Эпидемиология и Инфекционные болезни. Актуальные вопросы №3 / 2018
Антимикотическая активность штамма Bacillus subtilis 534 – основы пробиотика споробактерина
1 ФГБУ «Федеральный научный центр трансплантологии и искусственных органов имени академика В.И. Шумакова»
Минздрава России, Москва, Россия;
2 ФГБУН «Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков имени Г.Ф. Гаузе», Москва, Россия
Цель исследования. Изучение антимикотической активности пробиотического штамма Bacillus subtilis 534 в условиях культивирования in vitro.
Материалы и методы. Видовую идентификацию выделенных патогенных грибков и их антимикотическую чувствительность/устойчивость определяли на автоматическом бактериологическом анализаторе MicroScan WalkAway-96 рlus System. Штамм B. subtilis 534 выращивали в условиях глубинного культивирования. Антимикотическую активность культуральной жидкости определяли методом диффузии в агар. В качестве тестов для определения антимикотической активности использовали 36 клинических изолятов патогенных грибков Сandida albicans, C. catenulata, C. glabrata, C. krusei, C. lusitaniae, C. parapsilosis, С. tropicalis, Cryptococcus neoformans, Trichosporon spp. и водоросли Prototheca spp.
Результаты. Клинические изоляты отличаются по устойчивости/чувствительности к антимикотикам амфотерицину, миконазолу, кетоконазолу, итраконазолу и флуконазолу, причем 10 изолятов устойчивы ко всем 5 антимикотикам. Из 36 клинических изолятов 34 чувствительны к культуральной жидкости штамма B. subtilis 534 и выделенным из нее активным компонентам. Предположительно в кишечнике человека штамм 534 также образует антимикробные соединения, активные в отношении патогенных грибков, что обусловливает его лекарственную антимикотическую эффективность.
Заключение. Длительное применение в медицинской практике лекарственного препарата споробактерина, представляющего суспензию спор штамма B. subtilis 534, свидетельствует о его эффективности и отсутствии побочных эффектов.
Открытие и внедрение в медицинскую практику антибиотиков было одним из самых важных достижений медицины ХХ века, однако постепенно ответной реакцией патогенных микроорганизмов стала выработка механизмов устойчивости к применяемым препаратам. В настоящее время распространение патогенных штаммов с множественной устойчивостью к антибиотикам достигло критического уровня, в связи с чем возникла потребность в разработке новых антибиотиков, а также иных антимикробных препаратов, сочетающих эффективность и отсутствие токсичности [1–3]. К их числу относят пробиотики – лекарственные препараты на основе живых микроорганизмов, воздействующие на патогенную микрофлору человека или нормализующие баланс нормальной кишечной микрофлоры.
К микроорганизмам-пробиотикам относят как естественных обитателей кишечника (кишечная палочка, лактобациллы и бифидобактерии), так и транзиторных (самоэлиминирующихся) бактерий. В России и других странах в последние десятилетия активно изучают бацилл в качестве транзиторных пробиотиков, в частности, штаммы вида Bacillus subtilis, чему посвящен ряд обзорных статей [4–8]. Данный вид бактерий широко распространен в природе и попадает в организм человека разными путями: с воздухом, водой, пищевыми продуктами, поэтому некоторые авторы рассматривают его в качестве одного из естественных компонентов микрофлоры кишечника [8, 9].
В России более четверти века применяют препарат споробактерин, основой которого является штамм-пробиотик B. subtilis 534 [10]. Ранее нами было показано, что штамм 534 в условиях культивирования in vitro образует несколько антимикробных веществ, активных в отношении ряда коллекционных тест-штаммов и клинических изолятов бактерий Acinetobacter baumannii, Bacillus spp., Micrococcus luteus, Klebsiella рneumoniae, Staphylococcus aureus (включая MRSA), S. epidermidis, S. haemolyticus, S. hominis, а также грибков Aspergillus niger, Candida spp., Saccharomyces cerevisiae [11–13].
Целью данного исследования было с помощью клинических изолятов патогенных грибов с различной устойчивостью/чувствительностью к противогрибковым антибиотикам (антимикотикам) определить в опытах in vitro антимикотическую активность пробиотического штамма Bacillus subtilis 534.
Материалы и методы
Объектом исследования служил штамм Bacillus subtilis 534 – основа лекарственного препарата «споробактерин жидкий».
Условия культивирования
Глубинное культивирование штамма 534 осуществляли с использованием модифицированной среды № 2 Гаузе следующего состава: глюкоза – 1%, пептон – 0,5%, триптон – 0,3%, NaCl – 0,5%, вода водопроводная (рН 7,2–7,4). В колбы Эрленмейера объемом 750 мл со 150 мл среды вносили суспензию спор штамма 534 в количестве 106/мл, после чего засеянные колбы помещали на роторную качалку со скоростью вращения 220 об/мин при температуре 28 ºС. Антимикотическую активность культуральной жидкости (КЖ) определяли на 2-е, 4-е и 7-е сутки культивирования. Для поверхностного культивирования штамма 534 и клинических изолятов грибов использовали агаризованный вариант модифицированной среды № 2 Гаузе с добавлением 2% агара. Культивирование осуществляли при 37 ºС.
Определение антимикоти...
