Функциональная активность клеток крови при хроническом обструктивном пиелонефрите

Цель. Изучить участие α-, β-адренорецепторов и пуриновых Р2-рецепторов в формировании тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов (ТЛА) у пациентов с хроническим обструктивным пиелонефритом (ХОПН).
Материал и методы. В исследование включены 43 пациента с ХОПН, диагноз которых был верифицирован на основании жалоб, анамнеза заболевания, объективного осмотра, результатов клинико-лабораторных и инструментальных методов исследования. В фазе ремиссии ХОПН обследованы 26 больных, в фазе рецидива – 17. Формирование ТЛА моделировали in vitro путем добавления к периферической крови агонистов в конечной дозе ЕС50. В качестве агонистов рецепторов клеток крови использовали адреналин, аденозиндифосфат (АДФ) и фактор активации тромбоцитов (ФАТ).
Результаты. При ремиссии ХОПН (хроническом воспалении в мочевыводящих путях – МВП) паракринная стимуляция тромбоцитов (Тц) активными лейкоцитами в процессе формирования ТЛА воспроизводила более выраженный эффект, чем системный механизм, обеспечивающий активацию лейкоцитов и Тц адреналином. Активация симпато-адреналовой системы при мочекаменной болезни может быть фактором риска рецидива ХОПН, поскольку адреналин может стимулировать Тц, которые при этом будут модулировать функциональную активность лейкоцитов. При рецидиве ХОПН (острая воспалительная реакция в МВП) активация ФАТ-рецепторов Тц с участием лейкоцитов более эффективна в плане формирования ТЛА, чем стимуляция P2Y-рецепторов лейкоцитов с помощью пуринов (АТФ и АДФ), секретируемых из плотных гранул Тц. Системный механизм активации клеток крови проявляется преимущественным вовлечением лейкоцитов в реализацию воспалительной реакции, которые могут стимулировать Тц. В свою очередь Тц, секретирующие АДФ, активируют пуриновые рецепторы лейкоцитов, тем самым возможно усиление влияния адреналина на лейкоциты (амплификация сигнала с α-адренорецептора).
Заключение. В фазе ремиссии и рецидива ХОПН формирование ТЛА и рекрутирование лейкоцитов крови из циркулирующей крови в очаг воспаления достигаются посредством включения системного (влияние адреналина) и паракринных механизмов (секреция АТФ, АДФ и ФАТ). Достигаемый эффект зависит от активности α2-, β2-адренорецепторов, Р2Y-пуриновых и ФАТ-рецепторов тромбоцитов и лейкоцитов.

Актуальной задачей современной нефрологии является уточнение механизмов активации и рекрутирования лейкоцитов из циркулирующей крови в очаг воспаления, что позволило бы приблизиться к возможности ограничения развития воспалительной реакции на самых ранних этапах. Существуют многочисленные доказательства, подтверждающие критическую роль адренергических механизмов в регуляции воспаления [1–3]. Известно, что адренергические рецепторы экспрессируются на поверхности тромбоцитов (Тц) и лейкоцитов, а их связывание с лигандами обеспечивает регуляцию адгезии и трансэндотелиальной миграции клеток крови из сосудистого русла [4, 5]. Внеклеточные нуклеотиды также признаны важным стимулятором лейкоцитов, запускающим множественные ответы через пуриновые P2-рецепторы мембраны, которые представлены P2X-ионотропными и G-белок-связанными P2Y-рецепторами [6]. Экспрессия рецепторов P2X1, P2X4, P2X5 и P2X7, а также P2Y-1,-2,-4,-6,-11 подтверждена на лейкоцитах человека; изменение активности Р2-рецепторов клеток крови признается триггером развития воспалительной реакции [7–9]. Значимость адрено- и пуриновых рецепторов позволяет рассматривать их в качестве перспективной таргетной мишени противовоспалительной терапии [10]. Однако в этом контексте видится существенная проблема – сложность анализа взаимодействия Тц и лейкоцитов при одновременной стимуляции α-, β-адренергических и Р2Х-, Р2Y-пуринергических рецепторов, инициирующих различные внутриклеточные сигнальные пути. Одним из способов решения этой проблемы служит проведение исследований in vitro на цельной крови, поскольку не только открывается возможность анализа механизмов взаимодействия Тц и лейкоцитов при изолированном действии лигандов, но и появляется надежный индикатор такого взаимодействия, как число образовавшихся ТЛА, обеспечиваюших активацию и рекрутирование лейкоцитов в зону воспаления.

Цель исследования – изучить участие α2-, β2-адренорецепторов и пуриновых Р2-рецепторов в формировании ТЛА у пациентов с хроническим обструктивным пиелонефритом (ХОПН).

Материал и методы

В исследование включены 43 пациента с ХОПН, у которых диагноз был верифицирован на основании жалоб, анамнеза заболевания, объективного осмотра, результатов клинико-лабораторных и инструментальных методов исследования. В фазе ремиссии ХОПН обследованы 26 больных, в фазе рецидива – 17. Формирование ТЛА моделировали in vitro путем добавления к 490 мкл периферической крови 10 мкл раствора, содержащего агонист в конечной дозе ЕС50.

В качестве агониста a2-, β2- адренорецепторов использовали адреналин – неселективный адреномиметик, эффект которого связан с активацией симпато-адреналовой системы (САС) вследствие повреждения конкрементом слизистой оболочки мочевыводящих путей (МВП). При одновременной активации a2- и β2-адренорецепторов воспроизводится суммарный эффект, связанный с агрегацией и дизагрегацией Тц. Выбор АДФ в качестве агониста P2Y-рецепторов клеток крови обусловлен участием в развитии воспалительной реакции Тц, которые, секретируя АДФ, могут дополнительно рекрутировать Тц (аутокринный механизм) и стимулировать лейкоциты (паракринный механизм взаимодействия). Изучение участия фактора активации тромбоцитов (ФАТ) в формировании ТЛА продиктовано тем, что: а) он является медиатором воспаления; б) секретируется лейкоцитами для активации Тц. Количество интактных и стимулированных ТЛА (на 100 лейкоцитов) оценивали после окраски мазков крови по методу Романовского–Гимзе. Все клинические исследования выполнены по согласованию с комиссией по биоэтике ГОО ВПО «Донецкий национальный медицинский университет им. М. Горького». Статистическую обработку результатов проводили в пакетах MedStat и MedCalc. При анализе межгрупповых различий в зависимости от характера распределения признаков учитывали критерий Стьюдента и Вилкоксона. Различие оценивали как статистически значимые при p<0,05.

Результаты

Для достижения поставленной цели необходимо ответить на следующие исследовательские вопросы:

1. Различается ли формирование ТЛА in vitro у здоровых волонтеров (контрольная группа) при стимуляции Тц адреналином, АДФ и ФАТ?

Базальный уровень ТЛА (формирование агрегатов в циркулирующей крови in vivo в физиологических условиях) находился в пределах 4,364±0,367%. При стимуляции Тц адреналином выявл...

Э.Ф. Баринов, Х.В. Григорян