Эпидемиология и Инфекционные болезни. Актуальные вопросы №1 / 2018
Использование иммунохроматографических тестов в алгоритме лабораторной диагностики гриппа
1 ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора, Москва, Россия;
2 ФГАУ «Национальный медицинский исследовательский центр здоровья детей» Минздрава России, Москва, Россия
Цель исследования. Оценка диагностической значимости обнаружения антигенов вирусов гриппа А и В методом иммунохроматографии (ИХА) в сравнении с выявлением нуклеиновых кислот (НК) вирусов гриппа методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме реального времени (ПЦР-РВ), а также определение оптимального порядока их использования при диагностике гриппа.
Материалы и методы. Мазки из носоглотки 211 детей с гриппоподобными симптомами исследовали параллельно методами ИХА и ПЦР-РВ для обнаружения НК вирусов гриппа и 19 видов других возбудителей острых респираторных заболеваний.
Результаты. НК возбудителей острых респираторных инфекций определены у 85,8% детей, грипп подтвержден у 62,6%. Антигены вирусов гриппа методом ИХА выявлены у 31,3% детей. Диагностическая чувствительность ИХА для вирусов гриппа А(H3N2) и В составила 58 и 20% соответственно, диагностическая специфичность – 97,5 и 97,7%.
Заключение. Отрицательный результат ИХА не может служить исключением диагноза «грипп», в связи с низкой чувствительностью метода. Исследование в 1–2-й день заболевания позволяет повысить чувствительность ИХА для диагностики гриппа А, для диагностики гриппа В метод малоинформативен. Для исключения диагноза «грипп» и определения респираторной инфекции другой этиологии целесообразно применять ПЦР-РВ.
Своевременное начало этиотропной терапии гриппа сокращает продолжительность болезни и период восстановления после нее [1].
Позднее начало либо отсутствие этиотропной терапии являлось одной из причин неблагоприятного исхода пневмонии, вызванной вирусом пандемического гриппа A(H1N1)pdm2009 [2, 3].
Известно, что прием препаратов против вирусов гриппа наиболее эффективен в первые 48 ч после появления симптомов инфекции [4, 5].
В этой связи крайне важно как можно раньше диагностировать заболевание. Однако, несмотря на то что симптомы гриппа хорошо знакомы практикующим врачам, точность клинической диагностики ограничена по ряду причин. Во-первых, другие патогены также способны вызывать симптомы, сходные с гриппом [6–10]. Во-вторых, исследования показывают, что характерные симптомы гриппа проявляются не у всех пациентов. В одном из ретроспективных исследований было установлено, что клинический диагноз «грипп» был поставлен только 29% пациентов с лабораторно-подтвержденным гриппом [11]. Кроме того, у детей, особенно младшего возраста, нередки случаи сочетанного инфицирования несколькими патогенами, что может изменять типичную клиническую картину гриппа.
В связи с этим требуется лабораторное подтверждение гриппа.
Современные методы лабораторной диагностики позволяют установить этиологический диагноз гриппа или другой инфекции дыхательных путей с различной скоростью – от 20 мин до нескольких дней.
С целью лабораторного подтверждения гриппа проводится обнаружение РНК вирусов гриппа методами амплификации нуклеиновых кислот (НК), выявление антигенов с использованием метода иммунохроматографии (ИХА), иммуноферментного анализа, иммунофлуоресценции, а также обнаружение специфических антител в парных сыворотках крови и выделение вирусов гриппа в культуре клеток.
Наиболее чувствительным и специфичным методом лабораторного подтверждения гриппа в настоящее время является полимеразная цепная реакция с детекцией в режиме реального времени (ПЦР-РВ), которая показывает высокие диагностические характеристики, сравнимые с выделением вирусов гриппа [12, 13]. При этом ПЦР-РВ лишена недостатков вирусологического исследования – продолжительности и трудоемкости, по причине которых выделение вирусов не проводится в рутинной практике.
Однако ПЦР-РВ занимает до 5 ч, поэтому экспресс-тесты, которые можно выполнять «у постели больного», особенно востребованы в клинической практике.
Целью настоящего исследования являлась оценка диагностической значимости обнаружения антигенов вирусов гриппа методом иммунохроматографии (ИХА) в сравнении с ПЦР-РВ, определение возможностей и ограничений при использовании тестов на основе ИХА и их места в алгоритме диагностики гриппа.
Материалы и методы
Обследованы 211 детей, поступивших с гриппоподобными симптомами в отделение неотложной педиатрии ФГАУ «Национальный медицинский исследовательский центр здоровья детей» Минздрава России (далее – НЦЗД) в феврале–марте 2015 г. (19 детей), в феврале–марте 2016 г. (5 детей) и с декабря 2016 г. по март 2017 г. (187 детей). При поступлении фиксировали дату начала заболевания (1–9-й день болезни, в среднем 2,48±1,74 день) и проводили сбор биологического материала для лабораторного исследования. Мазки из носоглотки (парные образцы из двух ноздрей) были собраны согласно инструкциям производителей использованных в работе наборов реагентов.
ИХА выполняли в НЦЗД сразу после сбора мазка согласно инструкции к набору реагентов «Influenza A+B» производства «Vegal Pharmaceutica» (Испания). Предел детекции составляет 4,7 нг/мл HA для Influenza virus A и 18,75 нг/мл HA для Influenza virus B; чувствительность и специфичность теста в сравнении с д...
