Эпидемиология и Инфекционные болезни. Актуальные вопросы №4 / 2024
Количественное определение ДНК вируса Эпштейна–Барр в биологических материалах и поражение легких ВЭБ-этиологии у больных ВИЧ-инфекцией
1) Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва, Россия;
2) Московский городской Центр по профилактике и борьбе со СПИДом, Москва, Россия;
3) Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, Москва, Россия
Цель исследования. Изучение частоты выявления ДНК вируса Эпштейна–Барр (ВЭБ) и ее количественная оценка в образцах биологических материалов методом ПЦР-РВ; описание клинико-рентгенологической картины легочной патологии при высоких концентрациях ДНК ВЭБ в респираторных субстратах и установление связи между концентрацией ДНК ВЭБ в биологических материалах и поражением легких ВЭБ-этиологии у больных ВИЧ-инфекцией.
Материалы и методы. Представлены результаты клинического наблюдения и анализ историй болезни 5485 госпитализированных больных ВИЧ-инфекцией, 1954 из которых имели поражение легких. Исследовали образцы цельной крови (510), мокроты (35), бронхоальвеолярной лаважной жидкости (БАЛЖ) (1026), плевральной жидкости (ПЖ) (38), биоптатов бронхов (ББ) (133), лимфоузлов (ЛУ) (57) методом ПЦР-РВ с определением ДНК ВЭБ, M. tuberculosis, Pn. jirovecii, грибов рода Candida, цитомегаловируса (ЦМВ), вируса герпеса человека 6a/b в качественном и количественном форматах. Поиск ассоциаций количества копий ДНК ВЭБ в биоматериалах с поражением органов (в частности, легких) ВЭБ-этиологии проводили с применением ROC-анализа.
Результаты. Частота выявления ДНК ВЭБ в биоматериалах превысила 55%, чувствительность составила 84,6–100% при специфичности 5,3–35,4%. Определены диагностически значимые концентрации ДНК ВЭБ в лейкоцитах крови, концентрации ДНК ВЭБ в образцах БАЛЖ, ББ, ПЖ, ЛУ с 95% и 99% вероятностью подтверждающие ВЭБ-природу легочной патологии, а также низкие количественные значения ДНК ВЭБ в биообразцах с 95–99% вероятностью исключающие ВЭБ-этиологию поражения легких у больных ВИЧ-инфекцией. Поражение органов, связанное с ВЭБ, выявлено у 379 пациентов. Описаны клинические проявления и рентгенологические данные 172 больных с легочной патологией ВЭБ-этиологии.
Заключение. Количественное определение ДНК ВЭБ в биоматериалах имеет решающее значение для подтверждения ВЭБ-природы поражения легких. Наряду с «классическими» возбудителями вторичных заболеваний у больных ВИЧ-инфекцией ВЭБ может быть причиной тяжелой органной патологии.
Несмотря на широкое внедрение антиретровирусной терапии, в последние годы не менее половины умерших российских граждан с диагнозом «ВИЧ-инфекция» погибли от оппортунистических инфекций или онкологических ВИЧ-ассоциированных заболеваний [1]. В научной литературе и соответствующих клинических рекомендациях подробно освещены подходы к диагностике и лечению «классических» вторичных заболеваний, протекающих с поражением легких (пневмоцистоз, пневмония, обусловленная цитомегаловирусом (ЦМВ), грибковая патология легких), а также бактериальных пневмоний. Вместе с тем сохраняется значительной доля легочной патологии неясной этиологии. По нашим данным, у 16% из почти 2000 госпитализированных ВИЧ-инфицированных с поражением легких природа тяжелой патологии не была установлена [2]. Согласно анализу, проведенному С.Л. Вознесенским и соавт. [3], в 87,7% случаев у ВИЧ-инфицированных пациентов отделения реабилитации и интенсивной терапии Инфекционной клинической больницы № 2 Департамента здравоохранения города Москвы (ОРИТ ИКБ № 2 ДЗМ) этиология пневмоний осталась не определенной.
Вирус Эпштейна–Барр (ВЭБ), относящийся к семейству Orthoherpesviridae, известен как этиологический фактор инфекционного мононуклеоза вследствие первичного заражения и как ко-фактор развития лимфопролиферативных заболеваний: не менее 1% из них имеют ВЭБ-природу, в частности первичная лимфома головного мозга на фоне ВИЧ-инфекции [4–7]. Установлена высокая частота инфицирования ВЭБ взрослого населения. Далеко не всегда обнаружение ВЭБ в биологических материалах свидетельствует о ВЭБ-инфекции как причине болезни [5–7]. В то же время не следует и недооценивать данный патоген как возможную причину иной патологии, помимо описанной выше. Определение значения ВЭБ как этиологического фактора развития легочной патологии, поражения кишечника, сердца, нервной системы остается сложным вопросом.
Решающее значение для подтверждения первичной ВЭБ-инфекции имеет спектр серологических маркеров: выявление в крови IgM к капсидному антигену ВЭБ (аnti-EBV-VCA IgM) и IgG к раннему антигену ВЭБ (аnti-EBV-EA IgG) при отсутствии IgG к ядерному антигену ВЭБ (аnti-EBV-NA IgG) и IgG к капсидному антигену ВЭБ (аnti-EBV-VCA IgG) при наличии в крови высокой концентрации ДНК ВЭБ [6].
Вопрос диагностики вторичной активной ВЭБ-инфекции (реактивация или повторное заражение вирусом) остается открытым. Серологические маркеры не имеют диагностического значения: в сыворотке крови присутствуют только anti-EBV-NA IgG и anti-EBV-VCA IgG, свидетельствующие о встрече с вирусом ранее, в редких случаях – anti-EBV-VCA IgM. Диагностическое значение качественного и количественного определения ДНК ВЭБ в биологических материалах в случае органной патологии, связанной с ВЭБ, неизвестно.
Цель исследования – определение частоты выявления и количественных значений ДНК ВЭБ в образцах цельной крови, респираторных материалов, биоптатах периферических лимфоузлов (ЛУ); описании клинико-рентгенологической картины легочной патологии при высоких концентрациях ДНК ВЭБ в респираторных субстратах и установление связи между концентрацией ДНК ВЭБ в биологических материалах и поражением легких ВЭБ-этиологии у больных ВИЧ-инфекцией.
Материалы и методы
На протяжении четырех лет проводили клиническое наблюдение и анализировали истории болезни 5485 ВИЧ-инфицированных пациентов, госпитализированных в ИКБ № 2 ДЗМ. Средний возраст пациентов составил 35,1 ± 7,7 года. Мужчин было 3998 (72,9%), женщин – 1487 (27,1%). Подробная характеристика пациентов представлена в нашей предыдущей работе [8].
Стадии вторичных заболеваний 4Б (СПИД) – 4В (СПИД) диагностированы у 3333 (60,8%) больных. Количество CD4+-лимфоцитов < 200 клеток/мкл имели 2487 (45,3%) пациентов. Поражение легких различной этиологии диагностировано у 1954 чел.
Для диагностики вторичных заболеваний, протекавших с поражением легких, анализировали клиническое течение, данные рентгенографии и компьютерной томографии (КТ) органов грудной клетки (ОГК); результаты бактериологического исследования, микроскопии, люминесцентной микроскопии мокроты, бронхоальвеолярного лаважа (БАЛЖ); проводили бронхоскопию, плевральную пункцию с анализом образцов БАЛЖ, биоптатов бронхов (ББ), плевральной жидкости (ПЖ), мокроты методом ПЦ-РВ с качественным и количественным определением ДНК ВЭБ и ДНК возбудителей вторичных заболеваний: M. tuberculosis (МБТ), Pn. jirovecii (PCP), C. albicans, С. glabrata, С. kruzei, цитомегаловируса (ЦМВ), вируса герпеса человека 6-го типа (ВГЧ-6a/b). Также исследовали образцы периферических лимфоузлов (ЛУ), и сыворотки крови на наличие и количественное определение ДНК МБТ, ВЭБ, ЦМВ и ВГЧ-6a/b. Молекулярно-биологические исследования проводили с использованием наборов реагентов производства ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора (Москва).
Критериями, позволяющими подозревать ВЭБ-природу поражения легких (помимо данных молекулярных методов исследования), служили: характер поражения легких, результаты рентгенографии и ...
