Акушерство и Гинекология №4 / 2020
Микробиота эндометрия и репродуктивный исход в программах вспомогательных репродуктивных технологий
ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава России, Москва, Россия
Введение. Одной из причин неэффективности программ экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) являются неудачи имплантации. Последние исследования показали, что в организме человека такие биотопы, как полость матки и плацента, ранее считавшиеся стерильными, колонизированы собственной микрофлорой. Нарушение микробиоценоза полости матки может являться одной из причин снижения частоты имплантации эмбриона в программах вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ).
Цель. Оценить влияние микробиоты полости матки на успешность имплантации эмбриона у женщин при использовании ВРТ.
Материалы и методы. В исследование включено 80 пациенток с бесплодием, проходивших лечение в программах ЭКО: I группа – 50 пациенток с переносом эмбриона в цикле стимуляции, II группа – 30 пациенток с переносом эмбриона в криоцикле. Средний возраст женщин составил 31,4±1,5 года. Проведено микробиологическое исследование наружных стенок эмбриокатетера, извлеченного из полости матки после переноса эмбриона, методом культуромики с использованием расширенного набора селективных и неселективных питательных сред.
Результаты. У пациенток I группы выделены микроорганизмы 27 видов. Беременность наступила у 20 (40,0%) женщин. Доминировавшая микрофлора – лактобациллы – выявлена у 85% женщин. Среди условно-патогенных микроорганизмов (УПМ) у 50,0% пациенток наиболее часто встречались виды: Gardnerella vaginalis (G. vaginalis) и Enterococcus faecalis (E. faecalis) – у 20,0% женщин и Streptococcus anginosus (S. anginosus) – у 15,0%. У женщин с отсутствием беременности (60,0%) частота выделения лактобацилл была ниже, чем у женщин с наступившей беременностью (73,3%). В составе УПМ (46,6%) наиболее часто встречались G. vaginalis (10,0%) и факультативно-анаэробные микроорганизмы, такие как S. anginosus (10,0%), Staphylococcus haemolyticus (6,6%), Actinomyces sp. (6,6%) и редко выделяемый из половых органов вид Haemophilus influenzae (3,3%).
У женщин II группы обнаружены микроорганизмы 20 видов. Беременность наступила у 13 пациенток (43,3%). Доминировавшая микрофлора – лактобациллы – выделена у 69,2% женщин. Среди УПМ (38,5%) наиболее часто встречались факультативные анаэробы: Escherichia coli и Staphylococcus epidermidis (S. epidermidis) с равной частотой (15,4%). У женщин с отсутствием беременности (56,7%) частота выделения лактобацилл составила 64,7%. В составе УПМ (41,2%) также наиболее часто выделяли факультативные анаэробы: S. epidermidis (17,6%) и E. faecalis (11,8%). У 35,3% женщин были обнаружены бифидобактерии и у 5,9% – Actinomyces neuii.
Заключение. Проведенное исследование показало, что из 33 забеременевших женщин наилучшие результаты имплантации отмечены при колонизации матки только лактобациллами (42,4%). При обсеменении матки лактобациллами в ассоциации с УПМ частота наступления беременности составила 36,4%, а при колонизации только УПМ – 9,1%. При отсутствии колонизации эндометрия беременность наступила также только в 9,1% случаев.
В настоящее время концепция «стерильной матки», а также парадигма, что плод развивается в стерильной среде, широко обсуждается [1]. Поэтому роль микроорганизмов в поддержании гомеостаза в полости матки заслуживает внимания. Данные последних обзоров литературы сфокусированы на корреляции между комменсальной колонизацией матки, проблемами бесплодия и репродуктивными исходами [2–5]. Известно, что бактерии оказывают влияние на иммунную систему [6, 7]. Таким образом, если микроорганизмы влияют на иммунную систему еще до беременности, то это может в значительной степени сказываться на рецептивном потенциале эндометрия. Успех имплантации эмбриона во многом зависит от состояния эндометрия в момент «окна имплантации» – короткого периода, во время которого происходят анатомические и молекулярные изменения, необходимые для нидации эмбриона. Ухудшение восприимчивости эндометрия во время менструального цикла ведет к нарушению плацентации и бесплодию [8–10].
В силу того, что бактерии могут играть важную роль в морфологических изменениях, к примеру, клеток слизистой оболочки, не вызывает сомнения возможность негативного влияния деструктивных последствий воздействия микроорганизмов на процессы децидуализации. В то же время комменсальная микробиота может обеспечить защиту от патогенных видов микроорганизмов и тем самым способствовать благополучию в полости матки [11, 12].
В связи с этим цель нашего исследования – оценить влияние микробиоты полости матки на успешность имплантации эмбриона у женщин при использовании вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ).
Материалы и методы
В исследование включены 80 пациенток, обратившихся в ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава России с жалобами на бесплодие и имевшие в анамнезе одну или более безуспешных попыток ЭКО.
Критерии включения в исследование: возраст от 23 до 37 лет, одна и более неудачных попыток ЭКО с переносом эмбрионов «хорошего» качества. Критерии исключения: наличие у пациенток интерстициальной и/или субсерозной миомы матки более 4 см, наружный генитальный эндометриоз (III–IV стадия), внутриматочная патология (внутриматочная перегородка, субмукозная миома, полип эндометрия, «тонкий» эндометрий, хронический эндометрит), тяжелые формы патозооспермии у супруга (3–4 степень).
Проведено культуральное исследование дистального отдела эмбриокатетеров после переноса эмбриона. Особое внимание уделяли соблюдению правил асептики при проведении забора материала из полости матки, чтобы максимально исключить возможность контаминации матки микрофлорой влагалища и цервикального канала. Предварительно шейку матки обрабатывали стерильным ватным тампоном.
Учитывая, что в матке преимущественно может содержаться минимальное количество микроорганизмов (нулевая гипотеза), дистальный фрагмент эмбриокатетера предварительно помещали в пробирку со средой накопления (1 мл), используемой для гемокультур (Oxoid, Великобритания). После 48 ч культивирования в анаэробном боксе (Jouan, Франция) в атмосфере трехкомпонентной газовой смеси (N2 – 80%; CO2 – 10%; Н2 – 10%) состав микробиоты исследовали методом культуромики, с использованием расширенного набора селективных и неселективных питательных сред. Для выделения факультативно-анаэробных микроорганизмов использовали колумбийский агар (Oxoid, Великобритания), маннит-солевой агар (Himedia, Индия), среду CHROMagar, Франция (для выявления и дифференциации Streptococcus agalactiae), энтерококковый агар (ФГУН «ГИЦПМиБ», Оболенск, Россия), агар Эндо-Г...
