Урология №6 / 2021
Оценка антибиотико-чувствительности микроорганизмов, выделенных от больных острым пиелонефритом в стадии гнойного воспаления, при их внутриэритроцитарной локализации (эксперимент in vitro)
Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН, Оренбург, Россия
Цель: изучить антибиотикочувствительность штаммов микроорганизмов, выделенных от больных гнойной стадией острого пиелонефрита, находящихся внутри эритроцитов.
Материалы и методы. В данном исследовании использовали 15 штаммов микроорганизмов, выделенных из крови больных гнойной формой острого пиелонефрита. Для обнаружения и идентификации бактерий в крови обследуемых больных использовали современный молекулярно-генетический метод – флюоресцентную in situ гибридизацию (FISH), а для выделения гемокультуры микроорганизмов использовали классический бактериологический метод. При изучении влияния антибиотиков на внутриэритроцитарную локализацию штаммов микроорганизмов использовали метод ступенчатого лизиса.
Результаты. В результате данного исследования обнаружили, что микроорганизмы, выделенные от больных гнойной стадией острого пиелонефрита и впоследствии находящиеся внутри эритроцитов (эксперимент in vitro), в 80% случаев оказывались резистентными к антибактериальным препаратам разных групп (фторхинолоны, аминогликозиды, макролиды, производные фосфоновой кислоты). Вне эритроцитов у тех же исследуемых микроорганизмов наблюдали антибиотикочувствительность к препаратам, используемым в работе. По всей видимости, можно рассматривать вариант устойчивости к антибиотикам уропатогенов, находящихся внутри эритроцитов, как результат недостаточной внутриэритроцитарной концентрации антибиотика даже при его доставке методом ступенчатого лизиса.
Заключение. При лечении больных острым пиелонефритом в стадии гнойного воспаления необходимо учитывать тот факт, что микроорганизмы могут проникать внутрь эритроцитов. Эксперименты in vitro показали, что у микроорганизмов, находящихся внутри эритроцитов, наблюдается антибиотикорезистентность к антибактериальным препаратам разных групп. Необходимо дальнейшее изучение по внутриэритроцитарному расположению микроорганизмов при гнойной стадии острого пиелонефрита как нового звена в патогенезе развития заболевания. Возможно, полученные новые результаты могут привести к пересмотру принципов антибактериальной терапии.
Введение. Инфекционно-воспалительные заболевания в урологии и вопросы их лечения, профилактики представляют собой одну из наиболее актуальных проблем современной медицины [1, 2], а также большое внимание уделяется возбудителям, способным к длительной внутриклеточной персистенции [3].
В лечении острого пиелонефрита ведущее значение имеет антибактериальная терапия, которую подобрать адекватно можно после идентификации возбудителя и определения его чувствительности к антибиотикам. На начальном этапе успех в лечении острого пиелонефрита зависит от правильного эмпирического подбора антибактериального лечения. Для адекватной антибактериальной терапии важно выбрать антибиотик, с одной стороны, действующий на «проблемные» микроорганизмы, с другой – накапливающийся в почках в необходимой концентрации [4, 5].
Для больных урогенитальными инфекциями весьма актуальна проблема резистентности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Невозможно вылечить пациента с острым вторичным пиелонефритом, если свое-временно не восстановить уродинамику. Но в то же время наличие дренажей приводит к катетер-ассоциированной инфекции. Возникает порочный круг: без дренирования мочевых путей в большинстве случаев невозможно проводить адекватную антибактериальную терапию, эффективность которой снижается из-за дренажей, создающих условия для формирования биопленок. Поэтому в лечении больных гнойным пиелонефритом нужно использовать препараты с расширенным спектром антибактериальной активности, резистентность к которым основных возбудителей пиелонефрита отсутствует или находится на достаточно низком уровне [6]. При гнойном пиелонефрите стартовая эмпирическая терапия назначается парентерально сразу же после дренирования мочевыводящих путей и гнойных очагов в почке [7].
Известны работы, в которых описываются механизмы проникновения патогенов внутрь клеток, в частности нахождение бактерий внутри эритроцитов, например Brucella melitensis [8], Streptococcus pneumoniaе [9], Staphylococcus epidermidis [10]. В работах авторов Е. А. Щупловой и соавт. [11] были представлены данные о нахождении адгезированных на поверхности эритроцитов и внутриэритроцитарно расположенных бактерий в крови больных гнойной стадией острого пиелонефрита. Вопрос о влиянии антибактериальных препаратов на бактерии, находящиеся внутри эритроцитов, мало изучен.
Цель исследования: изучить антибиотикочувствительность штаммов микроорганизмов, выделенных от больных гнойной стадией острого пиелонефрита, находящихся внутри эритроцитов.
Материалы и методы. В экспериментальной работе использовали 15 штаммов гемокультур, выделенных из крови больных гнойной стадией острого пиелонефрита. Для обнаружения и выделения микроорганизмов в крови обследуемых больных использовали как классический бактериологический, так и современный молекулярно-генетический метод – флуоресцентная in situ гибридизация, которая одновременно с обнаружением позволяет проводить идентификацию [11]. Параллельно идентификацию выделенных гемокультур проводили с использованием тест-систем: Enterotest-24, Staphytest, Nefermtest-24 («Lachema», Чехия). После проведенной идентификации оказалось, что 15 гемокультур относились к 5 видам микроорганизмов: Staphylococcus aureus (2 штамма), S. epidermidis (1 штамм), Escherichia coli (8 штаммов), Klebsiella pneumoniae (1 штамм) и Pseudomonas aeruginosa (3 штамма).
При создании модели «эритроциты–бактерии» (in vitro) для внутриэритроцитарной локализации микроорганизмов использовали кровь донора, которую центрифугировали в течение 10 мин при 1500 g, плазму и верхний слой осевших клеток, содержащий лейкоциты и тромбоциты, удаляли, а оставшиеся эритроциты дважды отмывали путем ресуспендирования в двойном объеме изотонического фосфатно-солевого буферного раствора (ФСБ) (рН=7,2). Далее 2 мл эритроцитарной взвеси фильтровали через крупнопористые фильтры для грубых крупнодисперсных осадков и добавляли к осадку 18 мл ФСБ для получения 5%-ной эритроцитарной взвеси (или 106 эр/мл)).
Затем к 0,5 мл эритроцитарной взвеси добавляли 0,5 мл взвеси исследуемых микроорганизмов на физиологическом растворе в концентрации 109 КОЕ/мл и 0,2 мл питательной среды RPMI – 1640 (ООО «БиолоТ», Санкт-Петербург). Параллельно гот...
