Прогностическая значимость уровня противовирусных антител в развитии рецидива рака мочевого пузыря

Введение: Серологическая диагностика вирус-ассоциированных опухолей привлекает внимание многих специалистов. Доказано изменение уровня противовирусных антител при опухолях различных локализаций. В ряде случаев авторы предлагают использовать эти данные с целью как скрининга возникновения неоплазм, так и контроля излеченности.
Цель: оценить прогностическую значимость уровня противовирусных антител в развитии рецидива рака мочевого пузыря.
Материалы и методы. Проведено пилотное исследование определения уровня противовирусных антител (IgG, M) к вирусу Эпштейна–Барр (ВЭБ), вирусу простого герпеса (ВПГ) 1-го и 2-го типов, цитомегаловирусу (ЦМВ) у 100 пациентов, страдавших раком мочевого пузыря (72 мужчины и 28 женщин) в возрасте от 38 до 90 лет (средний возраст – 65±10 лет). Выполнен многофакторный анализ, статистический анализ с построением дерева классификаций. В качестве зависимой переменной был взят показатель наличия рецидива опухолевого процесса.
Результаты. У пациентов с рецидивным характером опухоли имело место повышение уровня анти-ЦМВ IgG (616,5±501,46 ЕД/мл против 339,06±306,61; p=0,0017) и анти-ВЭБ IgG-EBNA (246,7±207 ЕД/мл против 141,5±163,7; p=0,0118). В результате построения дерева классификаций были отобраны показатели анти-ЦМВ IgG, анти-ВЭБ IgG-EBNA, стадия процесса и наличие ДНК ЦМВ в опухолевой ткани, при которых были правильно классифицированы 20 из 24 с рецидивом, 58 из 72 без рецидива. Наиболее значимыми показателями оказались уровни анти-ЦМВ IgG (100%), анти-ВЭБ IgG-EBNA (78%) и стадия процесса (50%). Чувствительность метода составила 83,33%, специфичность – 80,56%, положительное прогностическое значение (вероятность обнаружения болезни у лиц с положительным результатом теста) – 58,82%, отрицательное прогностическое значение (вероятность отсутствия болезни у лиц с отрицательным результатом теста) – 93,55%, точность – 81,25%. Проведен многофакторный анализ (бинарная логистическая регрессия) и получена достоверная модель (χ2=22,438, p=0,00043), в которую вошли следующие параметры: анти-ЦМВ IgG более 670 ЕД/мл, анти-ВЭБ IgG-EBNA более 130, степень анаплазии, наличие ДНК ЦМВ и ВЭБ в опухолевой ткани. На основании полученного регрессионного уравнения проведена проверка точности прогнозирования рецидива опухолевого процесса, в результате которой получены достаточно высокие предсказательные результаты: специфичность – 95,2%, чувствительность – 33,3%.
Заключение. Уровень анти-ЦМВ IgG более 670 ЕД/мл, анти-ВЭБ IgG-EBNA. И более 130 ЕД/мл служат достоверным прогностическим критерием развития рецидива рака мочевого пузыря.

Введение. Семейство герпесвирусов (Herpesviridae) объединяет пантропность к органам и тканям, пожизненная персистентность и способность вызывать многообразные манифестные формы заболевания. После внедрения вирусы герпеса персистируют в организме человека пожизненно в виде латентной инфекции и могут под влиянием ослабляющих факторов (грипп, СПИД и др.) реактивироваться с образованием новых вирусов, вызывая клинически выраженные формы болезни с развитием вторичной иммунологической недостаточности [1]. В процессе репликации вируса Эпштейна–Барр (ВЭБ) или вируса герпеса 4-го типа экспрессируется свыше 70 различных вирусспецифических белков, при этом к настоящему времени выделены группы иммуногенных белков, определение антител к которым дает возможность дифференцировать стадию инфекции: EA (еarly antigen) – ранний антиген, включает белки p54, p138; EBNA-1 (Epstein–Barr nuclear antigen) – ядерный антиген, белок p72; VCA (Viral capsid antigen) – капсидный антиген, включает комплекс белков p150, p18, p23; к настоящему времени показано, что иммунодоминантными белками в этом комплексе являются p18 и p23; LMP (Latent membrane protein) – латентный мембранный белок gp 125 [2–4]. Серологическая диагностика вирус-ассоциированных опухолей привлекает внимание многих специалистов [5–7]. Изначально первичная причинно-следственная связь между вирусом Эпштейна–Барр (ВЭБ) и лимфомой Беркитта подтверждена именно повышенным уровнем антител к антигенам ВЭБ, присутствующим у пациентов с лимфомой Беркитта [7]. Возможность ранней диагностики онкологических заболеваний, способность прогнозирования риска прогрессирования и рецидива опухолевого процесса, а также контроля излеченности по уровню противовирусных антител открывают перспективы использования неинвазивных и экономически выгодных методов как диагностики, так и контроля лечения вирус-ассоциированных неоплазм. Ранее в наших работах мы уже говорили о повышении уровня противовирусных антител у больных раком мочевого пузыря [9–11].

Цель исследования: оценить прогностическую значимость уровня противовирусных антител в развитии рецидива рака мочевого пузыря.

Материалы и методы. В пилотном исследовании проведено обследование и лечение 100 больных, страдающих раком мочевого пузыря (72 мужчины и 28 женщин) в возрасте от 38 до 90 лет (средний возраст – 65±10 лет). Интраоперационно выполнен забор ткани опухоли мочевого пузыря с целью выявления вирусов ВПГ 1-го и 2-го типов, вируса папилломы человека (ВПЧ) высокого онкогенного риска, цитомегалловируса (ЦМВ), ВЭБ. Определение вирусных ДНК осуществлено методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. Исследование проведено полуавтоматическим способом с использованием ПЦР-детекторов CFX-96, Bio-Rad (США) и реактивов Вектор-Бест (Россия), верхний предел определения (с разведением) – 100 копий в пробе. Следует отметить, что из всех проанализированных в работе вирусов только ВПЧ высокого онкогенного риска и ВЭБ онкогенные. У всех пациентов определен уровень противовирусных антител иммуноферментным методом к ВПГ 1-го и 2-го типов, ЦМВ, ВЭБ. Материалом для иммуногистохимического исследования послужил биопсийный и операционный материалы от 32 пациентов с верифицированной опухолью мочевого пузыря. Из них у 21 больного выявлено наличие вирусных ДНК (ЦМВ, ВЭБ, ВПГ 1-го и 2-го типов, ВПЧ высокого онкогенного риска) в опухолевой ткани, в 11 случаях вирусных ДНК выявлено не было.

Операционный материал фиксировали в 1%-ном растворе нейтрального формалина и заливали в парафин. Срезы толщиной 5 мкм, окрашенные гематоксилином и эозином, были подвергнуты обзорному морфологическому анализу, при котором стадию рака определяли в соответствии с классификацией TNM, степень дифференцировки опухолевых клеток оценивали в соответствии с рекомендациями ВОЗ от 1973 г. Микроскопическое изучение препаратов проведено с применением бинокулярного микроскопа с фотоприставкой Axio Zeis при 400-кратном увеличении. Иммуногистохимическое исследование выполнено на серийных парафиновых срезах 5 мкм путем стрептавидинбиотинового метода. В качестве детекционной системы использовано 6 маркеров. Определены следующие показатели: маркер пролиферативной активности Ki67 (sp6), маркер супрессора опухолевого роста Bcl-2 (D07), p53 (124), маркер ангиогенеза CD31 (sp164), маркер адгезии CD44 (spm521), ростовой фактор EGFR (sp84) (Spring Bioscience).

Интенсивность реакций с антигенами, локализованными на мембранах клеток и внутриклеточных мембранах (CD44, CD31, EFGR и Bcl-2), оценена полуколичественным способом по балльной шкале от 0 до 3 с учетом выраженности реакции и ее локализации: 0 – отсутствие реакции, 1 – слабая реакция, 2 – умеренная реакция, 3 – сильная реакция. Результаты реакции с антигенами, имевшими ядерную локализацию (Кi67, р63), оценивали по системе подсчета histochemical score, включающей интенсивность иммуногистохимической окраски по 3-балльной шкале и долю (%) окрашенных клеток и представляющей сумму произведений процентов, о...

И.В. Косова, О.Б. Лоран, Л.А. Синякова, Л.В. Гундорова, В.А. Косов, И.Е. Погодина, Д.Н. Колбасов