Урология №2 / 2018
Роль структурных изменений внеклеточного матрикса мочевого пузыря в возникновении побочных эффектов лучевой терапии разной степени тяжести
ФГБОУ ВО «Нижегородская государственная медицинская академия» МЗ России, Нижний Новгород, Россия; ГБУЗ НО «Нижегородский областной клинический онкологический диспансер», Нижний Новгород, Россия; ГБОУ ДПО РМАНПО, Москва, Россия
Цель исследования: определить роль структурных изменений внеклеточного матрикса мочевого пузыря в возникновении побочных эффектов лучевой терапии разной степени тяжести.
Материалы и методы. Анализ состояния соединительнотканного матрикса выполнен по 126 изображениям, полученным с гистологических срезов биоптатов мочевого пузыря 12 пациентов, классифицированных согласно клинической картине заболевания и степени тяжести побочных эффектов облучения (по шкале оценки поздних лучевых повреждений RTOG/EORTC). Контрольные изображения нормального мочевого пузыря (n=23) получены из секционного материала (post mortem).
В работе использован метод нелинейной микроскопии в режимах регистрации сигнала генерации второй гармоники (ГВГ) и двухфотонного возбуждения автофлуоресценции (ДВАФ).
Результаты. Результаты исследования гистологических срезов мочевого пузыря методом нелинейной микроскопии показали, что структурные изменения соединительнотканного матрикса при разной степени тяжести лучевых осложнений отличаются: при II степени тяжести структура коллагеновых волокон сохраняется на фоне их уплотнения, при III степени определяется их выраженная дезорганизация, размытость, при этом они не имеют выделенного направления.
В то же время в нормальном мочевом пузыре ход коллагеновых волокон четко визуализируется, они имеют извитую форму, местами собраны в пучки. Коллагеновые волокна и пучки расположены рыхло и сопровождаются эластическими волокнами.
Получены данные о соответствии клинического проявления лучевого поражения мочевого пузыря по степени тяжести осложнений с данными нелинейной микроскопии.
Обсуждение. Мозаичность радиационных изменений ткани мочевого пузыря даже в максимально страдающих от облучения зонах (задняя стенка, мочепузырный треугольник и шейка) свидетельствует, что при тяжелых степенях осложнений лучевой терапии патогенетически оправданно проведение различных курсов комплексного лечения с целью сохранения функциональных резервов мочевого пузыря, предотвращения прогрессирования снижения его емкости. В основу профилактики лучевых осложнений до начала лучевой терапии должна быть положена консультация врача-уролога, преследующая цель выявления и лечения хронических воспалительных заболеваний мочевого пузыря с определением его функциональных резервов. Другой путь – оптимизация лечения возникших осложнений.
Заключение. Исследование образцов тканей мочевого пузыря, взятых из разных зон, проведенное методом нелинейной микроскопии в режимах ГВГ и ДВАФ, выявило, что степень структурных изменений соединительнотканного матрикса в послелучевой период разная и коррелирует со степенью тяжести лучевых осложнений. Результаты данного исследования могут быть основополагающими в системе профилактики тяжелых радиационных повреждений мочевого пузыря при лучевой терапии онкологической патологии органов малого таза.
Введение. Изменения, возникающие в нормальных тканях после проведения лучевой терапии по поводу злокачественных новообразований, несмотря на развитие методов конформного облучения, до сих пор остаются нерешенной проблемой современной радиационной онкологии [1].
При облучении органов малого таза по поводу опухолей женской репродуктивной системы органами, подверженными высокому риску нежелательных эффектов лучевой терапии, являются мочевой пузырь и прямая кишка. Для практической урологии наиболее важное клиническое значение имеют поздние лучевые повреждения мочевого пузыря, которые появляются спустя 3 и более месяцев после окончания облучения, а иногда через несколько лет после лучевой терапии. Выраженность их может варьироваться от относительно незначительных функциональных нарушений до тяжелых осложнений, оказывающих влияние на качество жизни пациентов, вплоть до инвалидизации [2].
Трудность ведения таких пациентов для практикующего врача-уролога известна. Один из путей решения проблемы – развитие системы профилактики тяжелых лучевых повреждений и ее своевременное проведение, другой – оптимизация лечения возникших осложнений.
Оценить состояние соединительнотканного матрикса мочевого пузыря до облучения и, соответственно, выявить группу риска развития тяжелых лучевых повреждений до настоящего времени не представлялось возможным.
Традиционное использование стандартных методов гистологического исследования исключает возможность прижизненной оценки органа и не позволяет получить диагностически значимую информацию о состоянии ведущего компонента тканевого метаболизма в стенке мочевого пузыря – соединительнотканного матрикса. Современные оптические методы визуализации структуры коллагена и эластина [3] позволили вернуться к прицельному исследованию лучевых повреждений проблемных органов малого таза в целом и мочевому пузырю в частности на новом уровне.
Цель исследования: определить роль структурных изменений внеклеточного матрикса мочевого пузыря в возникновении побочных эффектов лучевой терапии разной степени тяжести.
Материалы и методы. Анализ состояния соединительнотканного матрикса выполнен по 126 изображениям, полученным с гистологических срезов биоптатов мочевого пузыря 12 пациентов, классифицированных согласно клинической картине заболевания и степени тяжести побочных эффектов облучения (по шкале оценки поздних лучевых повреждений RTOG/EORTC [4]): при II степени тяжести проанализировано 36 изображений (4 пациента), при третьей – 50 (n=5), при четвертой – 40 (n=3). Контрольные изображения нормального мочевого пузыря (n=23) получены из секционного материала трех образцов ткани нормального мочевого пузыря, взятых post mortem.
Для изучения соединительнотканного матрикса при осложнениях разной степени тяжести лучевого поражения мочевого пузыря применен метод нелинейной микроскопии в режимах регистрации сигнала генерации второй гармоники (ГВГ) и двухфотонного возбуждения автофлуоресценции (ДВАФ). Использование метода нелинейной микроскопии позволило получить информацию о состоянии и «упаковке» пучков коллагеновых и эластических волокон без окрашивания гистологического препарата.
Исследование неокрашенных депарафинированных гистологических срезов методом нелинейной микроскопии проводилось на инвертированном лазерном сканирующем микроскопе LSM 510 («Carl Zeiss», Германия). В качестве источника возбуждающего излучения был использован короткоимпульсный фемтосекундный лазер MAI TAI HP («Spectra Physics», США) с частотой следования импульсов 80 МГц и длительностью порядка 100 фс.
Возбуждение осуществлено на длине волны 800 нм, регистрация сигнала ГВГ от коллагеновых структур проведена в диапазоне 362–415 нм (изображение в зеленом цвете), сигнала ДВАФ от эластических волокон – в диапазоне 512–576 нм. Изображения размером 318×318 мкм (1024×1024 пиксела) строились с помощью масляно-иммерсионного объектива Plan-Neofluar 40x/1.3 («Carl Zeiss», Германия).
Для ве...
