Состояние кишечной микробиоты у пациентов с сахарным диабетом 2 типа в зависимости от наличия хронического пиелонефрита на додиализных стадиях хронической болезни почек – наблюдательное исследование «случай-контроль»

Обоснование: Сахарный диабет (СД) 2 типа принадлежит к числу основных причин хронической болезни почек (ХБП) и терминальной стадии почечной недостаточности. В медицинском сообществе продолжаются дискуссии о возможном влиянии нарушения состава кишечной микробиоты (КМ) на прогрессирование ХБП. КМ представляет собой совокупность микроорганизмов, играющих важную роль в поддержании здоровья макроорганизма и участвующих в различных физиологических процессах. Одной из актуальных проблем является исследование состава КМ у пациентов с ХБП и СД 2 типа. Большинство исследований КМ были проведены у пациентов с ХБП 4–5 стадий. В данной статье представлены результаты исследования состояния КМ у пациентов с СД 2 типа с ХБП на додиализных стадиях в сочетании с хроническим пиелонефритом (ХП), полученные при помощи газовой хромато-масс-спектрометрии (ГХМС) по методике масс-спектрометрии микробных маркеров (МСММ). Цель исследования: изучение состава КМ в московской популяции пациентов с СД 2 типа в сочетании с ХП на додиализных стадиях ХБП при помощи ГХМС по методике МСММ образцов кала. Материалы и методы: Анализ КМ проводился с 2021 по 2024 г. у 69 пациентов (23 пациента с СД 2 типа и ХБП 3–4 стадий; 9 – с ХБП 3–4 стадий с СД 2 типа в сочетании с ХП; 23 – с СД 2 типа и ХБП 2 стадии; 14 – с СД 2 типа и без ХБП) и 26 здоровых добровольцев. Результаты: Установлено, что у пациентов с СД 2 типа без ХБП по сравнению со здоровыми добровольцами наблюдалось достоверное снижение количества Prevotella spp., Propionibacterium jensenii и Bacteroides fragilis, а также достоверное увеличение Bacillus megaterium (Priestia megaterium) (p<0,05). В группе пациентов с СД 2 типа и ХБП 2 стадии по сравнению с пациентами, имеющими только СД 2 типа, выявлено увеличение количества Fusobacterium spp./Haemophilus spp. (p<0,05). Сравнение пациентов с СД 2 типа и ХБП 3–4 стадий с пациентами с СД 2 типа и ХБП 2 стадии показало снижение Lactobacillus spp. и Ruminococcus spp. в группе СД 2 типа и ХБП 3–4 стадий. Одновременно у этих пациентов отмечено достоверное увеличение Propionibacterium acnes (Cutibacterium acnes) и Actinomyces spp. (p<0,05). У пациентов с СД 2 типа и ХБП 3–4 стадий с обострением хронического пиелонефрита, получавших антимикробную терапию, выявлено достоверное увеличение количества Rhodococcus spp., общей микробной нагрузки, общей бактериальной нагрузки, анаэробов и Peptostreptococcus anaerobius 18623 по сравнению с пациентами СД 2 типа, ХБП 3–4 стадии без ХП (все p<0,05). Заключение: В настоящем исследовании впервые на московской популяции был изучен и сравнен состав КМ у пациентов с СД 2 типа на различных додиализных стадиях ХБП. Полученные результаты определяют необходимость дальнейшего изучения роли КМ и прогностического значения ее изменений при прогрессировании ХБП.

Введение

Хроническая болезнь почек (ХБП) является важной медицинской и социальной проблемой. Это заболевание встречается у 16% лиц трудоспособного возраста и у 36% лиц старше 60 лет. Основными причинами развития ХБП являются артериальная гипертензия, сахарный диабет (СД), хронический пиелонефрит (ХП) и другие заболевания почек [1]. При прогрессировании заболевания до терминальной хронической почечной недостаточности (тХПН) требуется заместительная почечная терапия (ЗПТ), что представляет собой значительную финансовую нагрузку на систему здравоохранения.

В настоящее время актуальны исследования, посвященные изучению состава кишечной микробиоты (КМ) и прогностического значения его изменения при прогрессировании ХБП. КМ представляет собой совокупность микроорганизмов, населяющих кишечник человека. Внедрение метагеномного секвенирования – исследования, определяющего генетический материал (ДНК или РНК) всех микроорганизмов, находящихся в образце, позволило впервые обнаружить микроорганизмы, не культивирующиеся на питательных средах [2]. Это существенно расширило имеющиеся представления о структуре КМ и позволило изучить факторы взаимодействия (ферментацию короткоцепочечных жирных кислот (КЦЖК), выработку иммунных комплексов, снижение почечной экскреции, диетическое и медикаментозное влияние) между почками и кишечником [3]. Регуляция этих факторов может оказать влияние на КМ при ХБП, повысив тем самым качество жизни данной категории пациентов. Однако опубликованные к настоящему времени данные не являются исчерпывающими, а вопрос требует дальнейшего изучения.

Большая часть опубликованных исследований, посвященных изучению КМ, была проведена у пациентов с ХБП 4–5 стадий. В исследованиях КМ у пациентов с ХБП 4 стадии преобладала сахаролитическая флора (Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp.). У больных с 5 стадией ХБП было определено увеличение представителей протеолитической флоры в составе КМ. Проведение исследований на более ранних стадиях ХБП является актуальной и до конца не решенной задачей [4–10].

В настоящее время существуют следующие методы исследования состава КМ: бактериологический анализ кала, генетические методы (метагеномное секвенирование, 16S рРНК), газовая хроматография масс-спектрометрия (ГХМС). Бактериологический анализ имеет значительные недостатки и ограничения и не позволяет выявить значительную часть КМ, в частности бактериальную анаэробную флору (среди них Eubacterium spp., Clostridium spp., Propionibacterium spp. и другие) [11]. Генетические методы позволяют полностью оценить состав КМ, но обладают высокой стоимостью, что ограничивает их применение в рутинной практике [12].

ГХМС – микробиологический метод исследования, имеющий разрешение Росздравнадзора «Оценка микроэкологического статуса человека методом хромато-масс-спектрометрии» на территории Российской Федерации (ФС 2010/038 от 24.02.2010 г.) для применения в качестве новой медицинской технологии. Метод позволяет качественно и количественно идентифицировать микробные маркеры в любых биологических образцах (кал, кровь, моча, слюна, мазки из носо-, ротоглотки, влагалища, ткани), что позволяет обнаружить труднокультивируемые микроорганизмы. На сегодняшний день данные о возможных референсных значениях по результатам ГХМС в образцах фекалий у пациентов с ХБП отсутствуют.

В свете изложенного изучение состава КМ у пациентов с СД 2 типа и ХБП и при ее сочетании с ХП является актуальной задачей.

Цель исследования: изучение качественного и количественного состава КМ у пациентов с СД 2 типа на додиализных стадиях ХБП с помощью ГХМС.

Материалы и методы

Работа представляет собой обсервационное аналитическое исследование «случай-контроль». Всего в исследование было отобрано 69 пациентов и 26 здоровых добровольцев. Критерии включения: наличие информированного добровольного согласия на участие в исследовании, возраст старше 18 лет, отсутствие беременности. Критерии исключения: отсутствие информированного добровольного согласия, возраст младше 18 лет, беременность.

После подписания добровольного информированного согласия на участие в исследовании пациенты были стратифицированы на следующие группы: 1а-группу составили 23 пациента с СД 2 типа и ХБП 3–4 стадий (СКФ по формуле CKD-EPI менее 60 мл/мин/1,72 м2); 1б-группу – 9 пациентов с СД 2 типа и ХБП 3–4 стадий (СКФ по формуле CKD-EPI менее 60 мл/мин/1,72 м2) в сочетании с ХП, после антимикробной терапии, 2-ю группу – 23 пациента с СД 2 типа и ХБ...

Стуров Н.В., Попов С.В., Кобалава Ж.Д., Беликов И.И., Жуков В.А., Ляпунова Т.В., Мелешкевич Т.А.