Акушерство и Гинекология №10 / 2017
Уровень матричной РНК гена сосудисто-эндотелиального фактора роста как маркера хронического эндометрита в период «окна имплантации»
ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова
Минздрава России, Москва
Цель работы. Разработать критерии диагностики хронического эндометрита по профилю экспрессии матричной РНК (мРНК) в эндометрии в период «окна имплантации».
Материал и методы. Обследованы 33 пациентки с трубно-перитонеальным бесплодием, которые были разделены на 2 группы: 1-ю группу составили 15 женщин, у которых при гистологическом исследовании соскобов эндометрия в фазе пролиферации обнаружены плазматические клетки; 2-ю группу составили 18 женщин, у которых плазматические клетки не были обнаружены. В эндометрии проанализирована экспрессия мРНК 39 генов (маркеров ростовых факторов, цитокинов, поверхностных маркеров клеток иммунной системы, матриксных металлопротеиназ, генов гомеобокса, циклооксигеназы, транскрипционных факторов, эстрогеновых и прогестероновых рецепторов) в период «окна имплантации».
Результаты. Экспрессия мРНК гена сосудисто-эндотелиального фактора роста (VEGFA) в среднюю стадию фазы секреции, с чувствительностью 64% и специфичностью 89% ассоциирована с наличием плазмоцитов в 1-й фазе менструального цикла. В эндометрии средней стадии фазы секреции при наличии плазмоцитов увеличивается мРНК генов VEGFA в 1,7 раза, VEGFA189 – в 2,4 раза, протеина, связывающего инсулино-подобный фактор роста (IGFBP1) – в 16,6 раза, CD68 – в 2 раза, а также снижается экспрессия мРНК гена интерлейкина (IL)2 в 1,5 раза по сравнению с пациентками, у которых плазмоциты отсутствуют.
Заключение. Полученные данные позволили разработать критерии диагностики хронического эндометрита в среднюю стадию фазы секреции по уровню мРНК гена VEGFA в период «окна имплантации».
В ряде исследований последних лет продемонстрировано, что морфофункциональное состояние эндометрия вносит существенный вклад в эффективность программ экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) [1–5]. В структуре причин женского бесплодия частота приобретенной внутриматочной патологии составляет около 50% [1, 6]. Хронический эндометрит (ХЭ) занимает первое место в структуре патологических изменений эндометрия, его распространенность у женщин с бесплодием варьирует от 2,8 до 68% [4, 7]. У пациенток с неудачными попытками ЭКО и переноса эмбриона в анамнезе частота ХЭ по разным данным составляет от 30 до 60% [7–9].
Известно, что для диагностики ХЭ проводят гистологическое исследование соскоба эндометрия на 7–10-й день менструального цикла, и ведущим критерием при этом является наличие плазматических клеток. Большинство морфологов подчеркивают обязательное выявление в строме эндометрия даже единичных плазматических клеток, которые, по их мнению, в здоровой ткани эндометрия не содержатся. В то же время выявление очаговой лимфо-лейкоцитарной инфильтрации, эозинофилов, очагового фиброза стромы, склеротических изменений стенок спиральных артерий являются лишь косвенными признаками ХЭ [10–14]. Для оценки рецептивности эндометрия исследуется биоптат эндометрия в среднюю стадию фазы секреции [15].
На данном этапе развития науки совершенствуются иммуногистохимические (ИГХ) и молекулярно-генетические критерии диагностики ХЭ. Учитывая повышенный интерес исследователей в последнее десятилетие к оценке «имплантационного эндометрия» у пациенток с бесплодием, актуальным является поиск возможных диагностических критериев ХЭ именно в этот короткий временной промежуток [11, 13, 16–18].
Принимая во внимание ведущую роль ХЭ в структуре патологии эндометрия при бесплодии, а также трудности диагностики данного заболевания, представляется актуальным дальнейший поиск универсальных маркеров которые позволяли бы при одном заборе соскоба (или биоптата) эндометрия выявить наличие воспаления в эндометрии, оценить состояние рецепторного аппарата, а также служить основой для разработки тактики прегравидарной подготовки.
Цель исследования: разработать критерии диагностики ХЭ по профилю экспрессии матричной РНК (мРНК) в эндометрии в период «окна имплантации».
Материал и методы исследования
В соответствии с целью исследования было обследовано 33 женщины с трубно-перитонеальным бесплодием (ТПБ), планирующих реализацию репродуктивной функции в программе ЭКО, обратившихся в отделение сохранения и восстановления репродуктивной функции ФГБУ НЦАГиП им. В.И. Кулакова Минздрава России. Критерии включения: ТПБ, возраст не более 37 лет; овуляторный менструальный цикл; наличие диагностических ультразвуковых критериев ХЭ (повышение эхогенности эндометрия, расширение полости матки, неровный контур эндометрия, неоднородная эхоструктура эндометрия), 2 безуспешные попытки ЭКО в анамнезе. Критерии исключения: толщина эндометрия менее 7 мм в период предполагаемого «имплантационного окна», противопоказания для проведения программы ЭКО и переноса эмбриона, гинекологические заболевания: миома матки, эндометриоз.
Для выявления мРНК генов в среднюю стадию фазу секреции, ассоциированных с ХЭ, всем 33 пациенткам в 1-ю фазу менструльного цикла были проведены гистероскопия и диагностическое выскабливание эндометрия, а также пайпель-биопсия в день предполагаемого «окна имплантации» следующего менструального цикла.
Гистероскопию выполняли с помощью жесткого 5-миллиметрового гистероскопа фирмы Karl Storz (Германия) по общепринятой методике. Для инстилляции жидкости с целью регуляции скорости потока и давления использовали аппарат HAMEUO ENDOMAT, Karl Storz. Под гистероскопическим контролем проводили диагностическое выскабливание эндометрия.
В зависимости от результатов гистологического исследования были сформированы две группы: 1-я группа (основная) из 15 пациенток, у которых при гистологическом исследовании соскобов эндометрия в фазе пролиферации обнаружены плазматические клетки; 2-я группа (сравнения) из 18 женщин, у которых плазматические клетки не были обнаружены.
Биопсию эндометрия проводили в амбулаторных условиях в день менструального цикла ЛГ+7, который определяли с помощью мочевого теста Clear Blue («Unipath Ltd», Великобритания), основанного на определении пика ЛГ в моче. С помощью аспирационной кюретки Pipelle de Cornier («LaboratorieC.C.D.», Франция) получали биоптат эндометрия, который был поделен н...
