Взаимосвязь фенотипа NKT-клеток и степени фиброза печени у больных хроническим гепатитом С до и после лечения

Цель исследования. Определение особенностей фенотипа NKT-клеток у больных хроническим гепатитом С (ХГС) с разной степенью фиброза до и после лечения препаратами прямого противовирусного действия (ПППД).
Материалы и методы. Обследовано 112 больных ХГС в возрасте 44,2 ± 7,4 года. Диагноз подтвержден методом ПЦР – определение РНК вируса гепатита С (HCV). Для диаоностики фиброза печени использовали метод сдвиговолновой транзиторной эластометрии. Лечение больных ХВС проводилось ПППД – Софосбувир 400 мг/сут и Велпатасвир 100 мг/сут в течение 12 нед. В зависимости от степени фиброза печени до начала лечения ПППД больные ХГС были разделены на 3 группы: с фиброзом F0–F1 (п = 56), F2 (п = 20) и F3–F4 (п = 36). Все пациенты были обследованы до и после лечения ПППД. В качестве контроля обследовано 23 здоровых людей аналогичного возрастного диапазона. Исследование фенотипического состава NKT-клеток проводили методом проточной цитометрии.
Результаты. Установлены особенности фенотипа NKT-клеток, которые характеризуют функциональную активность данной фракции лимфоцитов. Изменения в фенотипе NKT-клеток у больных ХГС зависели от периода обследования (до или после лечения ПППД). До лечения на фоне высокой вирусной нагрузки, активности АЛТ в крови фенотип NKT-клеток незначительно зависел от степени фиброза и характеризовался высоким уровнем экспрессии рецептора CD57 на мембранах общих NKT-клеток, а также лимфоцитов данной фракции, экспрессирующих маркеры CD8, CD62L и CD94. После лечения у пациентов был достигнут полный клиренс HCV. На этом фоне особенности фенотипа NKT-клеток стали более существенно зависеть от степени фиброза, характеризуя при этом сохранение воспалительного импринтинга в иммунной системе. Наиболее значимые изменения в фенотипе NKT-клеток были обнаружены у пациентов со степенью фиброза F3–F4, которые выражались в пониженном количестве CD62L+NKT-клеток, максимальном уровне CD73+NKT-клеток, сохранении высокого уровня экспрессии CD57 на поверхности CD8+ и CD94+NKT-клеток.
Заключение. Необходима разработка дифференцированного подхода к лечению фиброза печени и методов прогноза развития гепатоцеллюлярной карциномы у пациентов с высокой степенью фиброза после успешной противовирусной терапии.

Хронический гепатит С (ХГС) является глобальной проблемой здравоохранения во всем мире [1–3]. Этиологическим фактором ХГС является вирус гепатита С (Hepatitis C virus, HCV), инфицирование которым с высокой степенью вероятности приводит к развитию хронической инфекции [4–7]. Разработка препаратов прямого противовирусного действия (ПППД) значительно повысила эффективность лечения данного инфекционного заболевания [1, 8]. Однако длительное инфицирование гепатоцитов вирусом, а также развитие защитных иммунных реакций приводит к выраженным гистологическим изменениям в печени в виде фиброза, вплоть до развития цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы (ГЦК) [9, 10]. Таким образом, фиброз печени, который характеризуется выраженным накоплением белков внеклеточного матрикса (включая коллаген), является осложнением или последствием инфекционного процесса при ХГС [3]. При этом даже при полной элиминации HCV после терапии ПППД в иммунной системе пациентов с ХГС остаются нарушения, которые могут обусловить как развитие новых инфекционно-воспалительных заболеваний, так и нарушение иммунных регуляторных механизмов стимулирования регенеративных процессов в печени [4, 11, 12].

Т-лимфоциты и NK-клетки являются ключевыми в механизмах противовирусного иммунитета, в том числе и при ХГС [11, 13]. Для NK-клеток в печени доказано наличие антифибротической функции, которая реализуется в элиминации активированных звездчатых клеток [13, 14]. Кроме того, в число клеток иммунной системы, принимающих активное участие и в инфекционном процессе, и поддержании гомеостаза печени, также входят NKT-клетки, представляющие собой естественные (натуральные) Т-киллеры с фенотипом Т- и NK-клеток (CD3+CD16+/56+) [15, 16]. Соответственно, функция NKT-клеток реализуется в различных механизмах иммунного реагирования, обеспечивая взаимосвязи между адаптивным иммунитетом и естественной резистентностью [17, 18]. На мембране NKT-клеток экспрессирована гетеродимерная молекула TCR, представленная преимущественно αβ-цепями, которая распознает липидные антигены, представленные мономорфной MHC-подобной молекулой CD1d антигенпрезентирующих клеток [16].

Около 5–10% всех лимфоцитов в печени составляют NKT-клетки [19, 20]. Миграция NKT-клеток в печень осуществляется посредством экспрессируемого ими рецептора CXCR6 (CD186), лигандом которого является хемокин CXCL16, синтезируемый синусоидными эндотелиальными клетками печени [20, 21]. Доказано, что миграция NKT-клеток из крови в печень возрастает при различных инфекционно-воспалительных заболеваниях печени. Так, в обзоре D. Poddighe и соавт. [15]. показано, что при аутоиммунном гепатите в печени увеличивается количество NKT-клеток с высоким уровнем синтеза провоспалительных цитокинов. При этом в исследовании M. Gao и соавт. [22] были представлены доказательства того, что при ингибировании функциональной активности NKT-клеток снижается уровень повреждения клеток печени [22]. Доказано, что увеличение количества активированных NKT-клеток в печени усиливает повреждение гепатоцитов и способствует развитию ГЦК [23]. Причем NKT-клетки в печени могут проявлять как антифибротическую (за счет секреции интерлейкина (IL) 30 и интерферона γ (IFN-γ), которые вызывают апоптоз активированных звездчатых клеток), так и профибротическую (IL-4 и IL-13) активность [19, 24]. Кроме того, активированные NKT-клетки посредством синтеза ряда хемокинов индуцируют дополнительную миграцию в ткань печени клеток врожденного иммунитета (макрофаги, эозинофилы и др.), которые за счет синтеза профибротических цитокинов (TGF-β) активируют звездчатые клетки и, соответственно, стимулируют формирование внеклеточного матрикса [25]. В исследовании T. Senff и соавт. [26] показано, что при остром вирусном гепатите С в крови пациентов возрастало количество NKT-клеток, экспрессирующих рецепторы CD38 и CD69, уровень которых положительно коррелировал с активностью аланинаминотрасферазы (АЛТ) в сыворотке. Однако в литературе недостаточно сведений об особенностях активности NKT-клеток при лечении ПППД больных с ХГС, в том числе при различных стадиях фиброза печени.

Цель исследования — изучение особенностей фенотипа NKT-клеток у больных ХГС с разной степенью фиброза до и после лечения ПППД.

Основной акцент в исследовании был сделан на экспрессии маркера CD57. Рецептор CD57 (Leu-7, HNK-1, NK-1) представляет собой олигосахарид с остатками глюкуроновой кислоты, экспрессируемый на различных мембранных компонентах (белки, протеогликаны, липиды) клеток-киллеров (включая, NKT-клетки), характеризующий накопление перфоринов и гранзимов, который также определяется как маркер терминальной дифференцировки [27–29].

Материалы и методы

На базе клинического гастроэнтерологического отделения НИИ медицинских проблем Севера (обособленное подразделение ФИЦ КНЦ СО РАН, г. Красноярск) было обследовано 112 больных ХГС (48 женщин и 64 мужчин) в возрасте 44,2 ± 7,4 года. Диагноз устанавливали на основании эпидемиологических и клинико-лабораторных данных при обнаруже...

Савченко А.А., Тихонова Е.П., Анисимова А.А., Кудрявцев И.В., Анисимова Е.Н., Борисов А.Г.