Антивозрастной эффект гидролизата плаценты человека. Доказательный стандарт

Гидролизаты плаценты человека содержат биологически активные пептиды, стимулирующие регенерацию поврежденных тканей. Антивозрастное, регенеративное и иммуномодулирующее действие препарата Лаеннек позволяет предположить наличие у препарата свойств, продлевающих жизнь. В настоящей работе проведено изучение геропротекторного действия Лаеннека на модельном организме Caenorhabditis elegans (C. elegans) в условиях теплового, токсического и оксидативного стресса. Показано, что в условиях без стресса добавление Лаеннека увеличивало продолжительность жизни C. elegans на 92% по сравнению с контролем. В условиях теплового стресса (t=35°С, 8 ч) выживаемость C. elegans в присутствии Лаеннека была на 27% выше по сравнению с контролем. В условиях продолжительного токсико-оксидативного стресса (Паракват 100 мМ, 120 ч) добавление Лаеннека увеличивало среднюю продолжительность жизни C. elegans от 24 до 120 ч. В условиях продолжительного оксидативного стресса (Н2О2 100 мкМ, 140 ч) добавление Лаеннека увеличивало продолжительность жизни C. elegans от 22 до 100 ч. Таким образом, Лаеннек обладает выраженным геропротекторным эффектом.

Препараты на основе высокоочищенного гидролизата плаценты человека (ГПЧ) характеризуются широким спектром возможных клинических эффектов: гепатопротекция, иммуномодуляция, ранозаживление и другие виды регенерации тканей, нейротрофические эффекты, нормализация пигментации кожи и др. (рис. 1) [1].

Препарат Лаеннек, технология получения которого разработана компанией Japan Bioproducts Ltd на основе ГПЧ, разрешен к применению в РФ с 2003 г. в качестве гепатопротекторного и иммуномодулирующего средства. Геропротекция представляется одним из перспективных направлений использования Лаеннека. В работе [2] было изучено действие Лаеннека на маркеры старения in vitro (накопление β-галактозидазы в фибробластах человека) и in vivo (гистоморфологические маркеры регенерации тканей кожи, печени и других органов). При выращивании культуры фибробластов добавление Лаеннека снижало число стареющих клеток на 7,9% (р=0,01, маркер β-галактозидаза). Экспериментальное исследование эффектов Лаеннека на заживление ран и ожогов (в дозировке 0,2 мл/кг массы тела внутрибрюшинно, 5 р/нед, 4 нед) показало существенное повышение скорости и качества заживления повреждений кожи (в частности, повышение количества эластиновых волокон и основного аморфного вещества, формирование волосяных фолликулов). Патогистологическое исследование секционного материала печени, почек и миокарда, полученного в результате создания модели алкогольного поражения печени, подтверждает регенеративное действие Лаеннека (снижение воспалительно-клеточной инфильтрации, отека стромы, жировой дистрофии, накопления билирубина) [2].

Исследованные маркеры указывают на более интенсивные процессы репарации тканей и косвенно указывают на геропротекторный эффект Лаеннека. В этой связи целесообразным представляется изучение in vivo возможного влияния Лаеннека на продолжительность жизни целого организма. В настоящей работе изучение геропротекторного действия Лаеннека было проведено на модельном организме Caenorhabditis elegans (C. elegans), который широко используется в современной молекулярно-клеточной биологии (в частности, в качестве модельной системы для скрининга потенциальных геропротекторов). Препарат тестировался по таким маркерам старения, как продолжительность жизни, устойчивость к температурному, токсическому и оксидативному стрессу.

Одной из наиболее «горячих точек» в современной геронтологии является вопрос о роли возрастных изменений в системе гормон роста (ГР)/инсулиноподобный фактор роста-1 (ИФР-1)/инсулин в механизме старения и развития ассоциированной с возрастом патологии [10]. Важным звеном в возрастных нарушениях является уменьшение индуцируемой ГР продукции ИФР-1. У старых крыс отмечено двукратное увеличение концентрации рецепторов к ГР в тканях, что, однако, не компенсирует возрастного снижения секреции этого гормона. С возрастом способность ГР индуцировать экспрессию гена ИФР-1 также существенно снижается. Таким образом, и у человека, и у лабораторных животных с возрастом развиваются нарушения в системе передачи сигнала рецептора ГР, приводящие к снижению секреции ИФР-1 [11].

ГР и ИФР-1 стимулируют синтез ДНК, РНК и белков в мозге, образование нейритов, пролиферацию олигодендроцитов и выживание нейронов и глии in vitro, усиливают образование синапсов в мышцах и способствуют репарации нервной ткани. ИФР-1 участвует в регуляции уровня обмена кальция в мозге и экспрессии онкогена с-fos. Введение ГР увеличивало концентрацию ИФР-1 в головном мозге и защищало нейроны от гибели в условиях ишемии, что свидетельствует о его способности преодолевать гематоэнцефалический барьер [11]. Имеются убедительные доказательства избирательной стимуляции введением ИФР-1 утилизации глюкозы в мозге старых крыс, а также нейротропного действия ИФР-1. Так, введение его в желудочки головного мозга старых животных увеличивало утилизацию глюкозы и активность глютамата в областях мозга, связанных со способностью к обучению и памятью.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Оценка показателей состояния и выживаемости C. elegans в присутствии Лаеннека

Целью настоящей работы являлась оценка геропротекторных свойств Лаеннека на C. elegans с использованием технологии фенотипического скрининга. Эксперимент ставился в стандартизованных условиях. Во-первых, тестирование Лаеннека проводили на популяции синхронизированных зрелых C. elegans стадии L4, развивающихся одновременно из одной кладки яиц C. elegans. Во-вторых, возможности получения смешанной популяции червей избегали посредством ингибирования репродуктивной функции добавлением реактива FUDR (фтордезоксиуридин) в инкубационную среду.

Эксперименты проводились в формате 96-луночного планшета (объем 150 мкл/лунка) при температуре +20°С в климатической камере Binder (Германия), помещенной в стерильные условия ламинара FastFlow (Италия). Планшет покрывали защитной пленкой во избежание испаре...

С.В. Леонов, Е.И. Марусич, О.А. Громова, И.Ю. Торшин, Е.А. Диброва