Циркулирующие микроРНК как новые биомаркеры прогрессирования стеноза при бессимптомном стенозе сонной артерии

Предпосылки и цель исследования. Прогрессирование бессимптомного стеноза сонной артерии (БССА) у лиц с сужением просвета сонной артерии >50% считается потенциальным фактором риска развития ишемического инсульта. Тем не менее данных о субклинических молекулярных биомаркерах прогрессирования БССА нет. В ранее проведенных исследованиях высказали предположение о регуляторной функции некоторых микроРНК (миРНК) в отношении эволюции каротидной бляшки, но их роль в прогрессировании БССА в целом не изучена. Цель настоящего исследования заключалась в изучении широкой панели микроРНК в экзосомах периферической крови пациентов ­
с БССА для обнаружения взаимосвязи профилей экспрессии циркулирующих микроРНК с прогрессированием стеноза. Методы. В исследование включили 60 пациентов с БССА с сужением просвета артерии >50%. Сначала профили экспрессии микроРНК циркулирующих экзосом определили с помощью микрочипов Affymetrix в образцах плазмы 16 пациентов из общей выборки. Затем микроРНК с наиболее отличающимися профилями экпрессии у пациентов с прогрессированием БССА количественно оценили с использованием ПЦР в реальном времени в отдельной группе репликации, состоящей из 39 субъектов общей выборки пациентов. Результаты. Полученные результаты продемонстрировали, что прогрессирование БССА было ассоциировано с развитием инсульта. У пациентов с прогрессированием БССА была наиболее выражена экспрессия миРРК-199b-3p, миРНК-27b-3p, миРНК-130а-3p, миРНК-221-3p и миРНК-24-3p. Выводы. ­
В заключение, результаты нашего исследования подтверждают, что определение профиля экспрессии специфических циркулирующих микроРНК можно рассматривать в качестве нового способа диагностики в дополнение к мониторингу прогрессирования БССА, позволяющего улучшить терапевтические подходы с целью профилактики развития ишемического инсульта.

Стеноз сонной артерии является важным фактором риска развития ишемических неврологических событий и причиной развития ≈10% ишемических инсультов – ИИ [1]. Такое атеросклеротическое поражение артерии может протекать бессимптомно [2], от простого утолщения слоев интимы-медии до симп­томного стеноза. В этом отношении польза профилактического хирургического вмешательства на сонных артериях у пациентов с бессимптомным стенозом сонной артерии (БССА) становится все более спорным вопросом в связи с умеренным риском развития инсульта на фоне адекватной медикаментозной терапии (в т.ч. лечение статинами и антиагрегантами) [3]. Таким образом, выявление пациентов с высоким риском развития неврологических событий в будущем позволит более грамотно назначать целевую интенсивную терапию или использовать инвазивные стратегии лечения [4]. Среди различных клинических факторов именно прогрессирование БССА при сужении про­света артерии >50% считается потенциальным маркером повышенного риска развития инсульта, даже более информативным, чем степень стеноза [2, 5]. Действительно, прогрессирование стеноза, по данным допплеросонографии, является предиктором развития ипсилатеральных сосудистых событий [2, 6]. Тем не менее случаи прогрессирования стеноза у пациентов с БССА не изучены, и данных о субклинических молекулярных биомаркерах, определяющих прогноз при бессимптомном стенозе сонной артерии, нет. В недавно проведенных исследованиях предположили наличие потенциальной регуляторной функции некоторых микроРНК (миРНК) в отношении развития дисфункции эндотелия, способствующей эволюции бляшек в сонной артерии в виде увеличения их размера, нестабильности и разрыва [7]. В упомянутых исследованиях проводили анализ микроРНК, изолированных непосредственно из ткани самой бляшки. Тем не менее роль миРНК в прогрессировании БССА в целом не­известна, и инновационный подход к определению профиля циркулирующих в периферической крови миРНК в качестве биомаркера прогрессирования стеноза до сих пор не изучен. В этом отношении известно, что микроРНК могут избирательно высвобож­даться из клеток сосудов и крови в периферический кровоток, встраиваясь в экзосомы [8, 9]. В отличие от других внеклеточных везикул экзосомы, предположительно, высвобождаются из жизнеспособных клеток посредством активного процесса в ответ на внешние воздействия с целью передачи содержащихся в них миРНК в клетки-реципиенты, таким образом, играя определенную роль в межклеточном взаимодействии [9, 10]. Мы предположили, что нестабильные бляшки в сонных артериях могут спровоцировать селективное высвобождение миРНК в экзосомы сосудистых клеток и клеток периферической крови, влияя на процесс развития стеноза сонной артерии.

Таким образом, цель настоящего исследования заключалась в изучении роли определения профилей миРНК циркулирующих экзосом в качестве нового неинвазивного биомаркера прогрессирования БССА для выявления пациентов группы высокого риска развития эмболического инсульта, которым проведение реваскуляризации сонных артерий будет точно показано. В связи с этим мы выявили пациентов с прогрессированием БССА по данным допплеросонографии и проанализировали широкую панель миРНК в циркулирующих экзосомах у пациентов с БССА (сужение просвета артерии >50%) для изучения взаимосвязи профилей экспрессии миРНК с прогрессированием стеноза сонной артерии.

МЕТОДЫ

Дизайн исследования

В исследование включили 60 пациентов с БССА с сужением просвета артерии >50%. В период с 2011 по 2014 г. отбирали пациентов из амбулаторной службы по лечению сосудистых заболеваний и отделения по лечению инсульта неврологического отделения клиники Universitario y Politecnico La Fe (Валенсия, Испания). Сначала исходный микроматричный анализ провели в подгруппе, состоящей из 16 пациентов (таблица I в дополнительных данных on-line), а затем с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) провели анализ репликации в отдельной группе, состоящей из 39 субъектов той же выборки пациентов (таблица II в дополнительных данных on-line). У пяти пациентов качество плазмы и образцов РНК было ненадлежащего качества, что являлось ограничивающим критерием для их включения в молекулярное исследование. Основные характеристики и исходы у пациентов приведены в таблицах 1 и 2 соответственно.

В отношении всех пациентов собирали демографические данные, данные о сосудистых факторах риска и наличие в анамнезе ИИ. Критериями включения в исследование были наличие у пациента >50% стеноза внутренней сонной артерии (ВСА) и отсутствие диагностированных или транзиторных нарушений мозгового кровообращения, или патологии сетчатки глаза в предшествующие 6 месяцев [11, 12]. Лечение проводили в соответствии с общепринятыми стандартами оказания медицинской помощи, с особым упором на управление сердечно-сосудистыми факторами риска. За всеми пациентами затем вели наблюдение в условиях нашей поли...

С. Долз, Д. Горриз, Дж.И. Тембл, Д. Санчез, Г. Фортеа, В. Паркутик, А. Лаго