Динамика показателей цитокинового профиля при хроническом пиелонефрите

01.01.2012
1258

ФГБУ “Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. почетного академика Н.Ф. Гамалеи” МЗиСР Российской Федерации, Москва

Цель. Изучение взаимосвязи между активностью хронического пиелонефрита (ХП) и изменениями в системе цитокинов, а также изучение влияния антибактериальной терапии и включения в схему препарата Циклоферон (меглюмина акридонацетат) на динамику показателей интерферонового (ИФН) статуса, цитокинового профиля и на характер течения заболевания
Материал и методы. Обследовали 30 больных ХП в различные периоды заболевания: 1-я группа – с латентным течением ХП без лабораторных проявлений обострения, 2-я – пациенты с обострением ХП, леченные антибиотиками в соответствии с результатами посева мочи, 3-я группа – пациенты с обострением ХП, получавшие помимо базисной терапии Циклоферон по стандартной схеме. Контрольную группу составили 14 здоровых добровольцев. Для всех пациентов определены показатели ИФН-статуса и чувствительность к известным иммуномодуляторам. Определение γ-ИФН, интерлейкин (ИЛ) 1β, ИЛ-1β, ИЛ-8, ИЛ-6, ФНО-α, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-17 проведено твердофазным иммуноферментным методом.
Результаты. Среди пациентов с ХП отмечено выраженное снижение уровня ИФН-продуцирующей способности лейкоцитов крови, особенно γ-ИФН. Добавление Циклоферона к антибактериальной терапии достоверно увеличило α- и γ-ИФН-продуцирующую способность клеток крови по сравнению с базисной терапией. Выявлено снижение продукции ИЛ-2 у пациентов с ХП, особенно в обострении; увеличение продукции ИЛ-8 у больных более чем в 3 раза по сравнению со здоровыми пациентами. Отмечена достоверная динамика выработки ИЛ-6 и -8 до и после лечения. Среди пациентов, получавших Циклоферон, отмечено снижение количества обострений ХП в течение года.
Заключение. Применение Циклоферона в комбинации со стандартной антибактериальной терапией способствует стойкой коррекции системы ИФН и других цитокинов при ХП, сокращает частоту обострений.

Введение

Хронический пиелонефрит (ХП) — самое распространенное из заболеваний почек, особенно часто встречающееся среди женского населения активного репродуктивного периода, а также среди детей раннего возраста. Пик заболеваемости ХП прихо­дится на пожилой и старческий возраст, его распространенность прогрессивно нарастает, особенно среди мужчин — от 12,6 % в возрастной группе 60—69 лет до 36,4 % в возрастной группе 80 лет и старше. У женщин отмечается аналогичная тенденция в распространенности ХП, хотя и менее выраженная (19,4—29,6 % в сходных возрастных группах) [1, 2].

Особое внимание в последнее время уделяется роли иммуноло­гических изменений в организме при хронических инфекцион­но-воспалительных заболеваниях мочевых путей, в т. ч. при ХП. Результаты ранее проведенных исследований свидетельствуют о том, что у больных ХП имеют место ассоциативная связь с иммуногенетическими параметрами, расстройство местного и системного иммунитета, иммунопатологические реакции [3, 4]; значительная частота обострений и резистентность к терапии определяют постоянную актуальность этого заболевания.

При ХП наблюдается подавление клеточных и гуморальных факторов иммунитета, а в основе патогенеза, как и при любых инфекционно-воспалительных заболеваниях, лежит запуск реакций цитокинового каскада, который включает выработку про- и противовоспалительных цитокинов. К настоящему времени известны лишь единичные исследования места и роли цитокинов при ХП. Имеются данные о дисбалансе цитокинового профиля мочи с преобладанием провоспалительных фракций у детей, страдающих обструктивным ХП [5]. В литературе обсуж­дается важность оценки цитокинового профиля при различных вирусных и бактериальных инфекциях. Изучение уровней цитокинов позволяет получать информацию о функциональной активности различных типов иммунокомпетентных клеток, тяжести воспалительного процесса, его переходе на системный уровень, о соотношении процессов активации Т-хелперов 1-го и 2-го типов, что позволяет прогнозировать дальнейшее течение и исход заболевания [6]. Раннее выявление больных с высоким риском осложнений способствует своевременному проведению коррекции терапии, дифференцированию инфекционной и неинфекционной патологии, оценке эффекта терапии [7].

Целью наших исследований было выявление взаимосвязи между активностью ХП и изменениями в системе цитокинов, интерферона (ИФН), а также влияние антибактериальной терапии и включение в схему препарата Циклоферон на динамику показателей ИФН-статуса, цитокинового профиля и на характер течения заболевания.

Материал и методы

В исследование были включены 44 больных ХП в возрасте от 22 до 60 лет. В зависимости от клинических проявлений и назна­ченной терапии пациенты были разделены на три группы. Первая группа — 7 человек с латентным течением пиелонефрита, 2-я — 10 больных с обострением пиелонефрита, получавших базисную терапию антибиотиками в соответствии с выявленной чувствитель­ностью, 3-я группа — 13 человек, леченных антибактериальными препаратами в комплексе с индуктором ИФН Циклофероном по схеме (пациенты получали препарат по 2 таблетки в сутки в 1-й, 2, 4, 6, 8, 11, 14, 17, 20, 23-й дни лечения). Контрольную группу составили 14 практически здоровых добровольцев.

Подсчет лейкоцитов мочи проведен при общем анализе мочи и по методу Нечипоренко. Концентрация креатинина в сыворотке крови определена методом Поппера на основе цветной реакции Яффе, использованы наборы реактивов “Lachema” (Чехия). Скорость клубочковой фильтрации рассчитана по формуле Кокрофта—Голта. Всем пациентам проведен посев мочи с опре­делением чувствительности к антибактериальным препаратам.

Для определения ИФН-статуса и чувствительности к иммунотропным препаратам применена оригинальная методика, разработанная в отделе интерферонов НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН. Для оценки ИФН-статуса биологическим методом использованы клетки гепаринизированной венозной крови пациентов: 1-й группы — однократно, 2-й и 3-й групп — до и через 2 недели после проведенной терапии. Были исследованы следующие показатели: продукция ИФН-α, продукция ИФН-γ лейкоцитами крови под действием стандартных индукторов (вируса болезни Ньюкасла и митогена фитогемагглютинина соответственно); уровень циркулирующего ИФН в сыворотке крови; уровень спонтанно продуцируемого клетками крови ИФН; уровень чувствительности лейкоцитов крови к Циклоферону.

Определение γ-ИФН, ИЛ-1β, ИЛ-8, -6, ФНО-α, ИЛ-2, -4, -10, -17 в сыворотке крови проведено твердофазным иммуноферментным методом с использованием наборов ЗАО “Вектор-Бест” (Новосибирск). Для определения содержания цитокинов в сыво­ротке крови забор крови пациентов осуществлен утром натощак из кубитальной вены в пробирку: 1-й группы — однократно, 2-й и 3-й групп — дважды (до начала лечения и через 2 недели после окончания терапии). Образцы центрифугировали при 1000 об/мин в течение 10 минут, а сыворотку аликвотировали в эппендорфы и хранили при t = 20 °С до проведения исследования. Аналогичным способом проведено исследование контрольных образцов.

Статистический анализ сделан с помощью пакета программ Biostat для Windows и DOS IBM-PC с расчетом показателей среднего арифметического значения (М) и ошибки среднего (m) в группах. Для сравнения показателей между группами использован парный критерий Стьюдента, различия между группами считались достоверными при достигнутом уровне значимости статистического критерия р

Результаты и обсуждение

При изучении ИФН-статуса у пациентов с ХП в наших исследо­ваниях имела место выраженная недостаточность системы ИФН по α- и особенно γ-ИФН-продуцирующей способности лейко­цитов крови, было выявлено повышение уровня сывороточного ИФН у 24 (80%) больных, наличие спонтанного ИФН в реакции in vitroкак при латентном течении пиелонефрита (n = 6), так и при клинико-лабораторных проявлениях обострения ХП (n = 11). Для всех пациентов на фоне терапии отмечена нормализация анализов мочи, способности к продукции α- и γ-ИФН-клетками крови. Добавление к антибактериальной терапии Циклоферона достоверно увеличило α- и γ-ИФН-продуцирующую способность по сравнению с монотерапией антибиотиками (табл. 1).

Таблица 1. Динамика ИФН-статуса у пациентов с обострением ХП на фоне лечения.

В наших исследованиях проведен также анализ уровня сыворо­точных цитокинов у всех пациентов, страдающих ХП, и у здоровых добровольцев. Выявлено снижение продукции ИЛ-2 у пациентов с ХП, особенно в обострении; кроме того, обращает на себя внимание более чем троекратное увеличение продукции ИЛ-8 у больных по сравнению с группой здоровых добровольцев (табл. 2).

Таблица 2. Оценка цитокинового профиля у пациентов с латентным ХП и обострением ХП по сравнению со здоровыми добровольцами.

Отмечена достоверная динамика выработки ИЛ-6 и -8 до и после лечения. Снижение продукции ИЛ-6 в случае антибакте­риальной терапии с добавлением Циклоферона более выраженно, в то время как динамика продукции ИЛ-8 более показательна в группе пациентов, не получавших Циклоферон (табл. 3).

Таблица 3. Динамика показателей цитокинового профиля на фоне базисной терапии и в комбинации с Циклофероном.

Через год после данной терапии проведен анализ частоты обострений у пациентов, как получавших Циклоферон, так и нахо­дившихся только на антибактериальной терапии. Выявлено, что у пациентов, дополнительно получавших Циклоферон, было заре­гистрировано от 0 до 2 случаев обострений ХП (0,46 ± 0,18; n = 13), в то время как пациенты, не принимавшие Циклоферон, перенесли от 3 до 9 обострений в год (3,3 ± 0,94; n = 10). Пяти пациентам с частыми обострениями ХП было проведено контрольное иссле­дование ИФН-статуса через год. ИФН-статус определен у наблю­даемых пациентов однократно в период ремиссии через год после терапии. В среднем показатели по α- и γ-ИФН-продуцирующей способности лейкоцитов составили 200 ± 25,3 и 15,2 ± 0,8 ЕД/мл соответственно. Повышения уровня сывороточного ИФН выяв­лено не было.

Дисбаланс цитокинов при ХП связан с активацией провоспалительных цитокинов, а обнаружение ФНО-αи ИЛ-8 в моче обследуемых лиц позволяет своевременно обнаруживать вос­палительные процессы в мочевыделительной системе [8—10]. Определение концентрации ИЛ-8 в моче имеет ограниченное диагностическое значение и может быть использовано как допол­нение к определению лейкоцитурии и бактериурии. Определение уровня цитокинов в сыворотке крови и моче может представлять собой особую значимость при определении прогноза заболевания и для контроля эффективности базовой терапии. У пациентов с ХП в стадии ремиссии после хирургической коррекции обструктивной уропатии определено увеличение концентрации ИЛ-8 в моче при нормальных показателях ИЛ-8 в сыворотке крови, а также повышение среднего содержания ИЛ-4 в обеих биологических жидкостях [11]. В отсутствие клинико-лабораторных признаков обострения патологического процесса это может свидетельство­вать об активации скрытого очага хронического воспаления. Установлено также, что хронический воспалительный процесс характеризуется значительно сниженной функциональной способностью клеток к выработке ИФН [12].

Результаты нескольких проведенных исследований свиде­тельствуют о повышении эффективности лечения ХП путем включения в схему терапии иммуномодулирующих препаратов с целью восстановления активности иммунной системы. В исследованиях показано, что применение различных имму­номодуляторов способствует быстрому выздоровлению и про­филактике рецидивов ХП [13—15]. Своевременное обнаружение изменений в системе цитокинов может быть использовано для современной диагностики, определения тяжести течения ХП и прогноза заболевания, а также для разработки новых подходов к профилактике обострений и предупреждения снижения функции почек. Существуют данные, подтверждающие, что избыточная продукция цитокинов и факторов роста может являться пусковым механизмом процессов ремоделирования тканей поврежденной почки с последующим развитием рубцовых изменений и терми­нальной почечной недостаточности [16].

Таким образом, важность оценки цитокинового профиля как для диагностики и прогноза течения ХП, так и для выявления риска осложнений, контроля базисной и иммунокорригирующей терапии данной патологии неоспорима. Определение уровня сывороточных цитокинов и анализ их динамики, особенно ИЛ-6 и -8, могут быть использованы для оценки эффективности терапии ХП. Дополнительное применение Циклоферона способствует более длительной ремиссии в течение года по сравнению со стандартной антибактериальной терапией, стойкой коррекции показателей ИФН-статуса у пациентов с ХП.

Список литературы

  1. Конев Ю.В., Левченко С.В. Хронический пиелонефрит у пожилых. Consilium medicum. 2005; 7(12): 1044—1048.
  2. Bastani B. In: Noble J.(ed.) Textbook of Primary Care Medicine, 3rd edition by Mosby Inc. 2001.
  3. Yamomoto S., Terai A., Yuri K. et al. Detection of urovirulents factors in Escherichia coli by multiplex polymerase chain reaction. FEMS Immunol. Med. Microbiol 1995; 12: 85-90.
  4. Сафина А.И. Использование препарата полиоксидоний в комплексной терапии пиелонефрита у детей. Нефрология и диализ. 2005; 7(4): 468-473.
  5. Глыбочко П.В., Морозов ДА., Свистунов АА, Морозова О.Л. Новые возможности диагностики и прогнозирования течения хронического обструктивного пиелонефрита у детей. Цитокины и воспаление. 2009; 8(3): 64- 67.
  6. Демьянов А.В., Котов А.Ю., Симбирцев А.С. Диагностическая ценность исследования уровней цитокинов в клинической практике. Цитокины и воспаление 2003; 2(3): 20-35.
  7. Железникова Г.Ф. Цитокины как предикторы течения и исхода инфекций. Цитокины и воспаление 2009; 8(1): 10-17.
  8. Rao W.N., Evans G.S., Finn A. The Significance of IL-8 in urine. Arch Dis Child 2001; 85: 256-262.
  9. Агафонова Е.В., Велижинская ТА., Зиятдинова Н.В. Показатели цитокинового профиля при хронических пиелонефритах у детей: клинические параллели. Новости "Вектор-Бест"2008; 47(1): 5-7.
  10. Frendeus B., Godaly G., Hang L., et al. Interleukin 8 receptor deficiency confers susceptibility to acute experimental pyelonephritis and may have a human counterpart. J. Exp. Med. 2000;18;192(6): 881-890.
  11. Пекарева Н.А., Лоскутова С.А., Трунов А.Н. Клинико-иммунологическая характеристика клинической ремиссии у детей с хроническим пиелонефритом после хирургической коррекции обструктивных уропатий. Бюллетень сибирской медицины. 2008: 105-110.
  12. Ершов Ф.И., Киселев О.И. Интерфероны и их индукторы (от молекул до лекарств). М.: ГЭОТАР-Медиа. 2005.
  13. Bessler W.G., Kleine B., Martinez Alonso C. et al. Biological activity of bacterial surface components: bacterial extracts and defined bacterial cell wall components as immunomodulators. Lung 1990; 168(Suppl.):707-715.
  14. Кириллов В.И., Теблоева Л.Т. Иммунокорригирующая терапия инфекций органов мочевой системы у детей. Нефрология и диализ. 2001; 3(2): 234-238.
  15. Ботвиньев О.К., Орехова С.Б., Романцов М.Г. Эффективность применения циклоферона при пиелонефрите у детей. Российский педиатрический журнал 2010; 1:25.
  16. Рагимова Р.Р., Азизова Г.И., Эфендиев И.М. Изучение некоторых цитокинов и иммунных параметров при хронической недостаточности. Цитокины и воспаление. 2009;8(3): 46-49.

Об авторах / Для корреспонденции

Кудряшова И.П. – младший научный сотрудник лаборатории интерфероногенеза, отдела интерферонов ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи Минздравсоцразвития России, врач-нефролог Кардиодиспансера № 2 УЗ ЮАО г. Москвы.
Тел. 8(499) 190-43-73;
Оспельникова Т.П. – старший научный сотрудник лаборатории интерфероногенеза отдела интерферонов, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздравсоцразвития России, к.м.н.
Тел.8(499) 190-43-73;
Ершов Ф.И. – академик РАМН, профессор, руководитель отдела интерферонов, ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи Минздравсоцразвития России.
Тел. 8(499) 190-43-73

Нет комментариев

Комментариев: 0

Вы не можете оставлять комментарии
Пожалуйста, авторизуйтесь