Экспрессия генов пролиферации и апоптоза у беременных женщин, инфицированных ВПЧ

Обоснование. Цервикальная интраэпителиальная неоплазия (CIN) встречается от 1,3 до 2,7 случаев на 1000 беременностей, а заболеваемость раком шейки матки (РШМ) составляет 0,1–12 на 10 000 беременностей. Изменение экспрессии генов различных сигнальных путей может служить прогностическим фактором перехода CIN в рак. Однако эти процессы изучены недостаточно, особенно у беременных женщин, что послужило основанием для настоящего исследования.
Цель исследования: определить экспрессию генов пролиферации и апоптоза у беременных женщин, инфицированных вирусами папилломы человека (ВПЧ), и их роль в прогнозе прогрессирования цервикальной неоплазии.
Методы. Проведено открытое наблюдательное неинтервенционное когортное клиническое исследование. Обследованы 82 беременные женщины, инфицированные ВПЧ. Контроль – 25 беременных без ВПЧ. Были проведены общеклинические методы обследования, тест «Квант-21» для определения типов ВПЧ, цитологическое исследование мазков шейки матки, определение экспрессии мРНК генов VEGFA, TGFb, BCL-2, BAG1, BAX в клетках эпителия цервикального канала методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.
Результаты. Статистически значимо выше по сравнению с контролем наблюдалась экспрессия генов, связанных с пролиферацией – VEGFA (в присутствии 16-го, 39-го и 58-го типов), TGF-b (16-го, 33-го, 39-го и 59-го типов), BCL-2 (16-го, 52-го и 58-го типов), экспресии BAG-1 (16-го, 31-го, 35-го, 58-го, 87-го типов). При LSIL (low grade squamous intraepithelial lesion) повышалась экспрессия гена VEGFA, а при HSIL (high grade squamous intraepithelial lesion) – всех генов (кроме BAX). То есть выявлена способность некоторых типов ВПЧ изменять экспрессию генов, ответственных за пролиферацию, но не было выявлено изменений экспрессии гена BAX, контролирующего апоптоз.
Заключение. Наиболее выраженной способностью изменять экспрессию генов, ответственных за пролиферацию, обладают ВПЧ 16-го и 58-го типов. При LSIL выявлено увеличение экспрессии только гена VEGFA, при HSIL – всех генов, характеризующих пролиферативный потенциал. Изменений экспрессии гена BAX, стимулирующего апоптоз, у ВПЧ-инфицированных беременных женщин не обнаружено. Результаты исследования свидетельствуют о возможности использования этих маркеров в прогнозе прогрессирования поражений шейки матки, однако требуется дальнейшее изучение.

Введение

Распространенность инфекций, вызванных вирусами папилломы человека (ВПЧ), у беременных женщин обнаруживается в 2 раза чаще по сравнению с небеременными [1] и составляет от 5,5 до 65% [2]. Цервикальная интраэпителиальная неоплазия (CIN) встречается от 1,3 до 2,7 случая на 1000 беременностей, а заболеваемость раком шейки матки (РШМ) составляет 0,1–12 на 10 тыс. беременностей [3]. Повышенная чувствительность эпителия шейки матки (ШМ) к ВПЧ у беременных связана с влиянием эстрогенов и прогестерона, которые увеличивают экспрессию ВПЧ 16-го типа [4].

Исследователи обращают внимание на то, что изменение экспрессии генов различных сигнальных путей может служить прогностическим фактором перехода CIN в рак. Однако эти процессы изучены недостаточно, особенно у беременных женщин, что послужило основанием для настоящего исследования.

Цель исследования: определить экспрессию генов апоптоза и пролиферации у беременных женщин, инфицированных ВПЧ, и их роль в прогнозе прогрессиронания цервикальной неоплазии.

Методы

Проведено открытое наблюдательное неинтервенционное когортное клиническое исследование. В исследовании приняли участие 82 беременные женщины, инфицированные ВПЧ, в возрасте от 23 до 31 лет. Контрольную группу составили 25 беременных женщин без ВПЧ. Пациентки дали информированное согласие на участие в данном исследовании.

При создании протокола исследования учитывались положения Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации (пересмотр 2008 г.), а также документа «Международные этические рекомендации по проведению биомедицинских исследований с участием людей». Протокол исследования одобрен этическим комитетом ФГАОУ РУДН.

Отбор пациенток проведен в соответствии с критериями включения и исключения. Критерии включения: возраст пациенток 18–45 лет, беременность. Критерии исключения: тяжелые соматические заболевания, резус-отрицательная кровь, преэклампсия, угроза прерывания беременности, психические заболевания и когнитивные расстройства, злокачественные новообразования любой локализации.

Применялись общеклинические методы исследования (изучение жалоб и анамнеза, объективное и акушерское обследования), лабораторные методы включали тестирование на ВПЧ методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени (тест «Квант-21»), цитологическое исследование мазков экто- и эндоцервикса по Папаниколау с оценкой по классификации Бетесда (пересмотра 2014 г.).

Определение уровня экспрессии мРНК генов VEGFA, TGFb, BCL-2, BAG1, BAX в клетках эпителия цервикального канала выполняли методом ПЦР в режиме реального времени (реактивы и детектирующий амплификатор производства компании «ДНК-Технология», Россия). Для выделения нуклеиновых кислот использовали наборы «Проба НК». Реакцию ставили в двух повторах для каждой точки.

Уровень экспрессии мРНК указанных выше генов измеряли в относительных единицах, нормировку которой проводили методом сравнения пороговых циклов (метод ΔΔCр) относительно нормировочного фактора, рассчитанного с использованием референсных генов (B2M, GUSB, TBP).

Статистический анализ полученных данных осуществляли при помощи пакета программы Statistica 6.0. Использовали методы описательной статистики. Количественные показатели представляли в виде Ме (Q25–Q75%), где Мe – медиана, а Q25–Q75% – интерквартильный размах ...

Т.Н. Бебнева, Г.Б. Дикке, И.С. Галкина