Гендерные особенности регуляции гемостаза при гематурии, ассоциированной с нефролитиазом

Цель исследования: изучить гендерные особенности выраженности гематурии, возникающей при спонтанной элиминации конкрементов из мочевыводящих путей, и установить рецепторы, модулирующие внутриклеточную сигнализацию при развитии компенсаторных механизмов агрегации тромбоцитов (Тц) у женщин и мужчин.
Материал и методы. В исследование включены 89 женщин (1-я группа) и 61 мужчина (2-я группа) с нефролитиазом, у которых при обследовании выявлена гематурия. Проанализирована активность рецепторов, регулирующих проагрегантную активность тромбоцитов (Тц), в частности, пуриновых Р2Y-, РХ1-рецепторов, ТР-рецептора, α2- адренорецептора, GPVI-рецептора, ФАТ-рецептора, и аденозинового А2А-рецептора; использованы агонисты: в концентрациях ЕС50, вызывающих агрегацию на уровне 50% у здоровых лиц. Моделирование синергизма путей сигнализации воспроизводили при инкубации тромбоцитов с субпороговыми концентрациями агонистов (ЕС10). Оценку агрегации Тц проводили турбидиметрическим методом на анализаторе ChronoLog (USA). Статистический анализ осуществлялся с использованием пакета MedCalc.
Результаты. В 1-й группе тяжелая степень гематурии (62,0±1,9 э/пз) развивалась на фоне гиперреактивности ФАТ-рецептора и ТР-рецептора, нормореактивности α2-адренорецептора, пуриновых Р2Х1-рецептора, Р2Y-рецепторов, гипореактивности аденозинового А2-рецептора и GPVI-рецептора. Во 2-й группе средняя степень микрогематурии (35,9±1,9 э/пз) обусловлена гиперреактивностью ФАТ-рецептора и ТР-рецептора, нормореактивностью пуриновых Р2Y-рецепторов, Р2Х1-рецептора, аденозинового А2-рецептора и GPVI-рецептора, а также гипореактивностью α2-адренорецептора. Ограничение гематурии в 1-й группе обеспечивалось синергизмом ФАТ-рецептора, ТР-рецептора и α2-адренорецептора, во 2-й группе – ФАТ-рецептора, ТР-рецептора и Р2Y-рецепторов. Оптимальные параметры агрегации у женщин достигались путем взаимодействия путей сигнализации, связанных с белками Gq-и G12/13 (ТР-рецептор) и Gi (α2-адренорецептор); у мужчин – при ко-активации путей сигнализации, связанных с Gq-, G12/13-белками (ТР-рецептор) и Gq-, Gi-белками (Р2Y-рецепторы).
Заключение. Дальнейшее понимание механизмов, внутриклеточной сигнализации тромбоцитов, связанной с системой рецепторов GPCR, позволит оптимизировать тактику медикаментозной терапии при гематурии, ассоциированной с НЛТ.

Совершенстовование тактики гемостаза при гематурии, ассоциированной с нефролитиазм (НЛТ), является актуальной проблемой нефрологии, поскольку остаются малоизученными компенсаторные механизмы усиления проагрегантной функции тромбоцитов (Тц) [1]. Одним из дисскусионных вопросов считается значимость гендерных различий внутриклеточных путей сигнализации в агрегации, хотя имеются доказательства, что у женщин регистрируется более высокий агрегационный ответ на агонисты и менее выраженный эффект от назначения нестероидных противовоспалительных средств [2]. В этом контексте остается ряд невыясненных вопросов, касающихся влияния половых гормонов на гемостаз. В частности: а) различается ли выраженность гематурии у женщин и мужчин при спонтанной элиминации конкрементов из мочевыводящих путей (МВП); б) проявляются ли гендерные различия активности рецепторов Тц при гематурии, ассоциированной с НЛТ; в) отличаются ли молекулярные механизмы регуляции компенсаторных реакций Тц у женщин и мужчин при длительной гематурии.

Гипотеза. Установлено, что рецепторы, сопряженные с G-белками – система GPCR (G-protein [guanine nucleotide-binding protein]-coupled receptors), являются основными регуляторами адгезии и агрегации Тц [3]. Экспрессия на поверхности Тц рецепторов ERβ2 к эстрогену и AR к тестостерону [4, 5], а также возможность взаимодействия путей сигнализации системы GPCR и рецепторов половых гормонов [6] позволяют предположить наличие гендерных особенностей регуляции гемостаза. В этом контексте исследование активности рецепторов и их сигнальных путей, регулирующих адгезию и агрегацию Тц у женщин и мужчин, позволит приблизиться к пониманию механизмов, обеспечивающих разную выраженность гематурии у пациентов с НЛТ.

Цель исследования – изучить гендерные особенности выраженности гематурии, возникающей при спонтанной элиминации конкрементов из МВП, и установить рецепторы, модулирующие внутриклеточную сигнализацию при развитии компенсаторных механизмов агрегации Тц у женщин и мужчин.

Материал и методы

Пациенты находились на стационарном лечении в отделении рентген-ударно-волнового дистанционного дробления камней и эндоурологии Республиканской клинической больницы им. М.И. Калинина в период с 2022 по 2024 г. Проведенное исследование являлось одноцентровым проспективным нерандомизированным неконтролируемым. В исследование были включены 150 пациентов, у которых при поступлении в отделение выявлена гематурия. Контингент пациентов распределен на две группы. В 1-ю группу включены 89 женщин (средний возраст – 53,3±1,5 года; min-max – 17–81 год), из которых в возрасте менее 45 лет находились 60 (67,4%) и старше 45 лет – 29 (32,6%) человек. Во 2-ю группу включен 61 мужчина (55,1±0,9 года; min-max – 20–79 лет); в возрастном диапазоне <45 лет и >45 лет находились соответственно 39 (63,9%) и 22 (36,1%) человека. В 1-й группе средний размер конкремента составил 12,5±1,3 мм (min-max – 2,0–28,0 мм); наиболее часто – у 37 (41,6%) пациентов встречались конкременты размером 8,0–10,0 мм. Во 2-й группе средний размер конкремента составил 11,2±0,6 мм (min-max – 3,0–30,0 мм); наиболее часто – у 27 (44,3%) пациентов встречались конкременты от 11,0 до 15,0 мм.

Микрогематурию определяли при наличии трех и более эритроцитов в поле зрения (э/пз) при микроскопии осадка мочи; при этом выделяли легкую степень – 3–10 э/пз, среднюю – 11–49 э/пз и тяжелую степень микрогематурии –50–100 э/пз. Макрогематурия диагностировалась, если число эритроцитов составляло 1/2 и более поля зрения. Анализ функциональной активности рецепторов проводили in vitro на суспензии Тц, для чего из периферической крови путем центрифугирования выделяли обогащенную тромбоцитами плазму. В пробе содержание Тц в 1 мкл составляло 200 000±50 000. В исследовании применяли агонисты рецепторов, участвующие в адаптационных механизмах агрегации Тц, в частности: АДФ (лиганд пуриновых Р2Y-рецепторов), АТФ (лиганд пуринового РХ1-рецептора), стабильный аналог ТхА2 U-46619 (лиганд ТР-рецептора), эпинефрин (неселективный лиганд α2-адренорецептора), коллаген IV-типа (лиганд GPVI-рецептора), фактор активации тромбоцитов (лиганд ФАТ-рецептора), аденозин (лиганд А2А-рецептора) (Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Германия). Агонисты использовали в концентрациях ЕС50, вызывающих амплитуду агрегации 50% у здоровых лиц. У 60 пациентов воспроизводили моделирование синергизма путей сигнализации при инкубации Тц с субпороговой концентрацией агонистов (ЕС10). Оценивали следующие показатели агрегатограмм: амплитуду агрегации тромбоцитов (%); максимальный наклон кривой (Slope, %/мин.); площадь под кривой агрегации (AUC, U). Все клинические исследования выполнены по согласованию с комиссией по биоэтике ФГБОУ ВО «Донецкий национальный медицинский университет им. М. Горького». Точечная оценка величин, подлежащих анализу, проводилась путем расчета сре...

Баринов Э.Ф., Ахундова С.А., Гиллер Д.И.