Исследование белка PCP4 как потенциального опухолевого маркера лейомиомы матки

Цель: Оценка возможной роли белка PCP4 как потенциального опухолевого маркера лейомиомы матки с помощью измерения титра антител к этому белку в сыворотках крови и применимости такой методики для оценки белков как потенциальных вакцинных антигенов.
Материалы и методы: Клонирован фрагмент кДНК, содержащий ген PCP4 из узла лейомиомы, сконструирован продуцент растворимого химерного белка PCP4-GFP на основе E. coli, проведена очистка рекомбинантного белка, после чего он был использован для исследования предельного титра антител в сыворотках крови больных с применением непрямого иммуноферментного анализа. Сыворотки доноров крови (24 образца) отбирали среди пациентов, проходивших лечение в НМИЦ АГП
им. В.И. Кулакова МЗ РФ, давших информированное согласие на участие в исследовании. Для исследования иммунологической активности сывороток в отношении белка 6His-PCP4hs-GFP было сформировано четыре группы пациентов: контрольная группа мужчин; группа женщины без диагностированных миом, у которых в анамнезе имелось пять или более успешно завершившихся беременностей, группа женщин с миомами, также с пятью или более успешно завершившимися беременностями, а также женщины с рецидивирующими миомами.
Результаты: Из кДНК миоматозного узла с драйверной мутацией в гене MED12 была получена экспрессионная конструкция в векторе pRSET-EmGFP, содержащая ген PCP4 и репортерный ген зеленого флуоресцентного белка EmGFP. С помощью данной конструкции, встроенной в геном E. coli, удалось получить белок человека PCP4 в препаративных количествах, достаточных для изучения его реакции с антителами из сывороток крови различных групп пациентов. Наиболее высокую иммунологическую реактивность в отношении белка 6His-PCP4hs-GFP показали сыворотки контрольной группы мужчин, тогда как группы женщин в среднем незначительно отличались друг от друга: минимальное различие выявлено между сыворотками групп 2 и 4, причем реакция сывороток женщин с рецидивирующими миомами оказалась выше, чем сывороток женщин без миом, имевших пять или более успешно завершившихся беременностей. При сравнении женщин групп 3 и 4 обнаружены статистически значимые различия в значениях оптической плотности, полученных при разведении сывороток 1:1600, 1:3200 и 1:6400, причем реакция сывороток женщин с рецидивирующими миомами оказалась выше, чем сывороток женщин с миомами, имевших пять или более успешно завершившихся беременностей. После распределения сывороток на три категории по уровню активности было показано, что реакция сывороток мужчин на антиген 6His-PCP4hs-GFP наиболее выражена (доля высокоактивных сывороток 60%), а в группе женщины без миом, имевших пять или более успешно завершившихся беременностей, доля низкоактивных сывороток составила 44%, что является максимальным показателем по сравнению с другими группами. Для группы женщин с миомами, имевших пять или более успешно завершившихся беременностей, наиболее характерен средний уровень реактивности с антигеном 6His-PCP4hs-GFP: на долю этой категории приходится 75% сывороток, что является максимальным показателем среди всех групп. Наконец, для группы женщин с рецидивирующими миомами характерно равное количество сывороток с высокой средней активностью, что показывает большую склонность пациенток этой группы к выработке антител против PCP4/PEP19 по сравнению с многорожавшими женщинами.
Заключение: Впервые был получен белок PCP4 человека в препаративных количествах, достаточных для изучения его реакции с антителами из сывороток различных групп пациентов. Тестирование показало, что большая часть образцов во всех группах имеет значимые титры антител к PCP4. Активность этих антител варьирует в широких пределах в сыворотках как мужчин, так и женщин. Антитела против PCP4 встречаются чаще у женщин с рецидивирующими миомами, чем у много рожавших женщин, особенно без лейомиом. Таким образом, иммунизация PCP4 вряд ли сопряжена с риском возникновения каких-либо патологий. Титры антител к PCP4 у общей группы многорожавших женщин значимо ниже, чем у мужчин и пациенток с рецидивирующими миомами. Таким образом, использование белка PCP4 в качестве основы для создания профилактической вакцины для защиты от лейомиом нецелесообразно.

Вклад авторов: Кузнецова М.В, Шевелев А.Б. – обзор литературы, концепция и дизайн исследования; Позднякова Н.В. – клонирование белка; Выпряжкина В.Е. – идентификация белков, блот-анализ; Трубникова Е.В., Зеленский Д.В. – статистическая обработка данных; Кузнецова М.В., Шевелев А.Б. – написание текста; Вишнякова П.А. – финальное редактирование текста. 
Конфликт интересов: Авторы заявляют об отсутствии возможных конфликтов интересов.
Финансирование: Проект РНФ 23-15-00069 «Разработка профилактической вакцины для предотвращения развития лейомиомы матки у пациенток, планирующих беременность».
Одобрение Этического комитета: Исследование было одобрено Этическим комитетом ФГБУ «НМИЦ АГП 
им. В.И. Кулакова» Минздрава России.
Согласие пациентов на публикацию: Все пациентки подписали добровольное информированное согласие на публикацию полученных данных.
Обмен исследовательскими данными: Данные, подтверждающие выводы этого исследования, доступны по запросу у автора, ответственного за переписку, после одобрения ведущим исследователем.
Для цитирования: Кузнецова М.В., Шевелев А.Б., Позднякова Н.В., Самойлова Д.В., Карягина В.Е., 
Тоноян Н.М., Трубникова Е.В., Зеленский Д.В., Вишнякова П.А. Исследование белка PCP4 как 
потенциального опухолевого маркера лейомиомы матки.
Акушерство и гинекология. 2025; 8: 159-171
https://dx.doi.org/10.18565/aig.2025.171

Лейомиома матки имеет широкое распространение у женщин в возрасте от 35 до 50 лет, являясь наиболее часто встречающимся типом доброкачественных опухолей репродуктивной системы [1]. Встречаемость этого заболевания составляет, по разным оценкам, до 50% среди женщин репродуктивного возраста, и именно миома матки занимает второе место по встречаемости среди гинекологической патологии. По данному показателю лейомиома матки уступает только воспалительным гинекологическим заболеваниям [2]. Среди женщин с диагностированной лейомиомой матки у 15–30% наблюдаются симптомы различной степени тяжести, включая болевой синдром, бесплодие, дисфункцию смежных органов, аномальные маточные кровотечения, анемию, а также ряд других тяжелых осложнений [3]. Несмотря на доброкачественную природу, лейомиомы способны метастазировать, проникая в различные ткани организма за пределами матки, в частности, в легкие [4]. В гинекологических стационарах России до 50–70% операций производится именно по поводу симптоматической лейомиомы матки; кроме того, от 40 до 60% гистерэктомий производится именно по поводу данного заболевания. В странах Европы в год проводится более 300 тыс. оперативных вмешательств, связанных с миомой матки [5], тогда как в США каждый год выполняется примерно 600 тыс. гистерэктомий, из которых около 200 тыс. обусловлены миомами [6].

Давно известно, что миомы способны к быстрому росту в период беременности, вследствие чего могут развиваться нарушения роста плаценты и развитие пороков у плода, а в случае субсерозной локализации опухоли образуются спайки с внутренними органами, что создает трудности для сокращений матки во время и после родов. Часто такие проблемы заставляют врачей выполнять срочные миомэктомии на ранних сроках беременности, либо кесарево сечение раньше срока родоразрешения [7]. Развитие послеоперационных рецидивов представляет отдельную проблему при лечении заболевания, поскольку частота рецидивирования после миомэктомии при множественных миомах, по нашим данным, превышает 70%; при этом почти в каждом четвертом случае возникает необходимость повторного лечения вплоть до нового оперативного вмешательства [8].

Наиболее радикальным способом предотвращения рецидивов лейомиомы является гистерэктомия, однако этот вариант не приемлем для женщин, планирующих беременность. Более того, существенной проблемой, возникающей в результате миомэктомии, является травматизация матки, возникновение рубцов, приводящих к нарушению ее нормального функционирования в период беременности и риску разрывов при растяжении и сокращении до и после родов. Кроме того, именно в период беременности скорость роста узлов миомы оказывается максимальной, что связывают с высоким уровнем прогестерона в крови [9]. Таким образом, одной из наиболее значимых медико-социальных проблем в области борьбы с лейомиомами является разработка методов лечения, позволяющих предотвращать рецидивирование заболевания у пациенток, планирующих беременность, либо находящихся в процессе вынашивания беременности.

В ранее опубликованной нашей работе было высказано предположение, что резкое сокращение риска развития лейомиом у женщин с пятью и более удачными беременностями в анамнезе, обусловлено выработкой антител к эмбриональным белкам плода, которые одновременно могут являться опухолевыми маркерами, характерными для лейомиом [10]. На этом основании выдвинуто предположение о возможности создания профилактической вакцины на основе таких опухолевых маркеров, которая предотвращала бы риск рецидивирования лейомиом за счет распознавания антителами и уничтожения клеток миометрия, прошедших опухолевую трансформацию и клетки-предшественники миоматозного узла.

По данным вышеуказанной обзорной статьи, а также ранее опубликованных работ других авторов [11, 12], а также базы данных NCBI GenBank (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene), одним из кандидатов на роль опухолевого маркера лейомиом является белок PCP4 (Purkinje cell protein 4), известный также, как PEP19, экспрессия которого повышена в узлах лейомиом всех типов, но отсутствует или находится на низком уровне в нормальных тканях взрослого организма, в том числе в миометрии.

Согласно современным представлениям, PCP4 представляет собой кальмодулин-связывающий белок, который в небольших количествах обнаруживается в клетках Пуркинье мозжечка головного мозга мышей [13]. Кроме того, присутствие мРНК PCP4 обнаружено в гиппокампе и в коре головного мозга. Эксперименты по иммуногистохимическому окрашиванию позволили обнаружить PCP4 в структурах новой коры, других кортикальных структурах и частях гиппокампальной формации, в обонятельной луковице и хвостатом ядре, в некоторых областях миндалевидного тела, таламуса (особенно в дорсальном латеральном коленчатом ядре) и гипоталамуса. В другой работе [14] также сообщается о важной роли PCP4 в регуляции секреции альдостерона в клетках надпочечников.

Белок PCP4 описан также в качестве онкомаркера, суперэкспрессия которого характерна для ряда опухолей. Так, в ...

Кузнецова М.В., Шевелев А.Б., Позднякова Н.В., Самойлова Д.В., Карягина В.Е., Тоноян Н.М., Трубникова Е.В., Зеленский Д.В., Вишнякова П.А.