Исследование in vitro роста, размножения, антибиотикорезистентности, конкурентных взаимоотношений штамма Lactobacillus casei rhamnosus

Цель. Определение количества Lactobacillus casei rhamnosus, входящих в состав препарата лактожиналь (BESINS Healthcare, Бельгия), рН питательной среды при размножении этих лактобацилл, а также исследование антибиотикорезистентности и конкурентных взаимодействий с дрожжеподобными грибами рода Candida.
Материал и методы. Исследована лиофилизированная культура лактобацилл Lactobacillus casei rhamnosus и 10 клинических штаммов дрожжеподобных грибов Candida albicans, 2 штамма C. krusei, 3 штамма C. glabrata. В процессе размножения L. rhamnosus в течение первых суток исследовали рН жидкой питательной среды MRS. Чувствительность лактобацилл к антибиотикам определяли диско-диффузионным методом. При совместном культивировании лактобацилл и дрожжеподобных грибов определяли ингибирующие свойства L. rhamnosus по отношению к дрожжеподобным грибам рода Candida в течение 24–72 ч.
Результаты. Пробиотический препарат лактожиналь содержит в своем составе живые бактерии L. rhamnosus в концентрации 1011 КОЕ/мл, способные в течение первых суток снижать рН, а также угнетать рост дрожжеподобных грибов, резистентные к антимикробным препаратам, наиболее часто используемым в акушерстве и гинекологии.
Заключение. Лактожиналь может быть использован для восстановления нарушенного микробиоценоза влагалища как у небеременных, так и у беременных женщин в любые сроки беременности.

Пробиотики – это живые микроорганизмы, которые благоприятно влияют на здоровье организма-хозяина [1]. Пробиотики в основном характеризуются своими особенностями in vitro [2]. Отбор пробиотиков основан на наличии у них генетической стабильности и на характеристиках фенотипа, способности к адгезии к слизистым оболочкам и к конкурентному вытеснению патогенных микроорганизмов, в том числе способности к выработке веществ с противомикробным действием [3–6].

L. Grzeskowiak и соавт. в 2010 г. показали, что отдельные штаммы Lactobacillus casei rhamnosus, выделенные из различных продуктов, обладают отличными от исходного штамма способностями к нарушению адгезии патогенных микроорганизмов к эпителиальным клеткам и к влиянию на патогенные микроорганизмы путем их вытеснения и ингибирования [7].

L. c. rhamnosus Lcr35 представляет собой широко известный пробиотический штамм, чьи характеристики in vitro и in vivo хорошо изучены [8–11]. Пробиотик Lcr35 используется с профилактическими и лечебными целями при показаниях.

Целью нашего исследования стало определение количества Lactobacillus casei rhamnosus, входящих в состав препарата лактожиналь (BESINS Healthcare, Бельгия), рН питательной среды при размножении этих лактобацилл, а также изучение антибиотикорезистентности и конкурентных взаимодействий с дрожжеподобными грибами рода Candida.

Материал и методы исследования

Использованные бактериальные штаммы

В исследование включена лиофилизированная культура лактобацилл Lactobacillus casei вариант rhamnosus Döderlein (Lcr35), которая входит в состав препарата лактожиналь. Десятикратные разведения исследуемого штамма лактобацилл вносили в пробирки с жидкой питательной средой MRS (HiMedia, Индия), инкубировали при 37 °С в атмосфере, содержащей 10% CO2. При росте лактобацилл высевали исследуемый материал на чашки Петри с плотной питательной средой (Columbia agar Base, Oxoid, Великобритания) с 5% дефибринированной крови человека и сыворотки крупного рогатого скота (Биолот, Россия), инкубировали также при 37 °С в атмосфере, содержащей 10% CO2. Получали изолированные колонии лактобацилл, микроорганизмы идентифицировали микроскопическим методом с окраской препаратов по Граму и методом MALDI-TOF спектрометрии на приборе c программным обеспечением BioTyper (BRUKER Daltonics, Германия). В качестве контроля 1 использовали питательную среду MRS (HiMedia, Индия), в которую не вносили культуру лактобацилл; в качестве контроля 2 использовали физиологический раствор, в который вносили культуру L. c. rhamnosus.

Клинические штаммы дрожжеподобных грибов культивировали в жидкой питательной среде Сабуро (НИЦФ, Россия) при 37 °С до конечной концентрации 108 КОЕ/мл. В исследование были включены 10 штаммов Candida albicans, 2 штамма C. krusei, 3 штамма C. glabrata.

Определение уровня pH в процессе роста и накопления биомассы Lactobacillus casei вариант rhamnosus Döderlein (LCR35) in vitro

Исследовали рН жидкой питательной среды MRS в процессе роста Lactobacillus casei rhamnosus в первые пять часов и с 23 до 29 ч инкубации с помощью портативного лабораторного pH-метра (HANNA, Германия). В качестве контроля 1 и 2 использовали жидкую питательную среду MRS без лактобацилл и культуру Lactobacillus casei rhamnosus в физиологическом растворе.

Определение in vitro чувствительности штамма Lactobacillus casei rhamnosus, входящего в состав препарата лактожиналь, к антибактериальным препаратам

Суточную культуру Lactobacillus casei rhamnosus, выращенную на плотной питательной среде, помещали в физиологический раствор, доводили до 0,5 единиц мутности по McFarland. Полученную суспензию помещали на поверхность плотной питательной среды Мюллер–Хинтон (сухая основа BioRad, США) с добавлением 5% дефибринированной крови человека и сыворотки крупного рогатого ско...

Савичева А.М., Рыбина Е.В.