Лечение бесплодия методами вспомогательных репродуктивных технологий у женщин с множественными неудачными попытками путем сокультивирования эмбрионов с аутологичными внеклеточными везикулами фолликулярной жидкости

Актуальность: Основная задача лечения бесплодия методами ВРТ – увеличение процента имплантации эмбриона и рождение здорового ребенка. Научные поиски направлены на улучшение условий культивирования, в частности, на возможности сокультивирования эмбрионов разных стадий развития с соматическими клетками и внеклеточными везикулами (ВВ). Экспериментальные модели на животных показали, что добавление ВВ фолликулярной жидкости (ФЖ) в течение in vitro культивирования модулирует развитие эмбриона, улучшает показатели имплантации. ВВ ФЖ были выбраны еще и потому, что доказана их роль в регуляции качества ооцита и последующего постимплантационного развития эмбриона.
Цель: Оценить клиническую эффективность оптимизации эмбриологического этапа программ лечения бесплодия методами ВРТ с помощью сокультивирования ВВ ФЖ с эмбрионами у пациенток с множественными неудачными попытками экстракорпорального оплодотворения.
Материалы и методы: В исследовании принимали участие супружеские пары с более 2 неудачными попытками ЭКО в анамензе, нормальным каритипом и невыраженной патозооспермией. Всего было обследовано 76 женщин. В рамках стандартного протокола ВРТ в день трансвагинальной пункции была забрана ФЖ, из которой методом последовательного ультрацентрифугирования были выделены ВВ. Ооциты после оплодотворения были поделены на две группы случайным образом: группа 1 – сокультивирование зигот с ВВ ФЖ в течение 24 ч, группа 2 – классическое культивирование. Добавление ВВ ФЖ осуществляли по следующей схеме. В лунку 4-луночного планшета с 0,3 мл культуральной среды и ооцитами после ИКСИ добавляли 2 мкл среды с ВВ ФЖ и оставляли на 24 ч. На 1-й день культивирования эмбрионы на стадии зиготы группы 1 были перенесены в классическую культуральную среду, где продолжили свое развитие до стадии бластоцисты. Проводили оценку эмбриологических и клинических результатов. Конечной точкой служила частота наступления беременности после переноса одного эмбриона в полость матки. Статистический уровень значимости принимали p<0,05.
Результаты: При оценке параметров раннего эмбриогенеза выявлено, что частота оплодотворения была статистически значимо выше в группе при сокультивировании ооцитов с ВВ ФЖ – 88,1% против 77,3% (р<0,001, тест хи-квадрат). Также в группе 1 была значимо выше частота формирования бластоцист отличного и хорошего качества – 55,0% против 42,6% (р<0,01). При сокультивировании оплодотворенных ооцитов после ИКСИ с ВВ ФЖ значимо больше вырастает бластоцист, пригодных для переноса в полость матки и криоконсервации: 1 [0; 1,25] в группе 1 и 0 [0; 1] в группе 2. При анализе клинических данных выявлено, что частота наступления беременности эмбрионами из группы 2 составила 27,2%, в группе 1 (ВВ ФЖ) клиническую беременность диагностировали у 14 женщин из 45 переносов, биохимическую – у двух. Частота наступления клинической беременности в группе 1 составила 31,1%. Как видно из представленных данных, статистически значимой разницы по клиническим показателям обнаружено не было в общей когорте набранных женщин с множественными неудачными попытками ЭКО в анамнезе. При анализе клинических исходов обратила на себя внимание тенденция к увеличению частоты наступления беременности при сокультивировании ВВ ФЖ у более молодых женщин и практически полное отсутствие положительного исхода у пациенток позднего репродуктивного возраста.
Заключение: Согласно полученным результатам, можно говорить о том, что сокультивирование с ВВ ФЖ у женщин с множественными неудачными попытками ВРТ в анамнезе позволяет существенно улучшить эмбриологический этап программы лечения бесплодия. Для получения статистически значимой разницы по клиническим исходам требуются дальнейшие исследования.

Вклад авторов: Ахмедова З.Ф., Сысоева А.П., Макарова Н.П. – концепция и дизайн исследования; Ахмедова З.Ф., Сысоева А.П., Макарова Н.П., Кулакова Е.В. – написание и редактирование текста; Ахмедова З.Ф., Непша О.С., Гаврилов М.Ю. – статистическая обработка результатов; Ахмедова З.Ф., Сысоева А.П., Зингеренко Б.В. – сбор биологического материала; Шевцова Ю.А., Силачев Д.Н. – лабораторный этап; Макарова Н.П., Кулакова Е.В., Калинина Е.А. – утверждение публикации.
Конфликт интересов: Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.
Финансирование: Работа выполнена в рамках инициативного научного проекта «Изучение влияния внеклеточных везикул биологических жидкостей репродуктивных органов и тканей на гаметы, процесс оплодотворения и раннего эмбриогенеза человека и имплантации» (2025–2027, руководитель Макарова Н.П.) ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» МЗ РФ.
Одобрение этического комитета: Исследование было поддержано на заседании Комиссии по биоэтике ФБГУ «НМИЦ АГП им. В.И.Кулакова» Минздрава России (протокол №10 от 20 октября 2022 г.).
Согласие пациентов на публикацию: Пациенты подписали информированное согласие на публикацию своих данных.
Обмен исследовательскими данными: Данные, подтверждающие выводы этого исследования, доступны по запросу у автора, ответственного за переписку, после одобрения ведущим исследователем.
Для цитирования: Ахмедова З.Ф., Сысоева А.П., Гаврилов М.Ю., Зингеренко Б.В., Шевцова Ю.А., Силачев Д.Н., Непша О.С., Макарова Н.П., Кулакова Е.В., Калинина Е.А. Лечение бесплодия методами вспомогательных репродуктивных технологий у женщин с множественными неудачными попытками путем сокультивирования эмбрионов с аутологичными внеклеточными везикулами фолликулярной жидкости.
Акушерство и гинекология. 2025; 5: 66-77
https://dx.doi.org/10.18565/aig.2025.85

Цель вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) при лечении бесплодия – увеличение частоты имплантации, наступление беременности и рождение здорового ребенка. Низкая частота имплантации (не более 40%) остается нерешенной проблемой репродуктивной медицины [1, 2]. Более того, до настоящего времени культивирование эмбрионов от стадии зиготы до экспандированной бластоцисты является крайне неэффективным процессом: в среднем около 50% культивируемых эмбрионов достигают стадии дробления и 30% – стадии бластоцисты в зависимости от возраста женщины, патогенеза бесплодия супружеской пары, условий лаборатории. Именно поэтому продолжаются поиски улучшения эмбриологического этапа программ ВРТ, одним из которых стало совместное культивирования (со-культивирование) различных клеток репродуктивного тракта женщины с эмбрионами. Данные методы широко распространены при культивировании эмбрионов животных и показывают очень хорошие результаты [3, 4]. Однако широкого клинического распространения у человека методы со-культивирования не получили в силу возникающих этических и практических проблем, в частности контаминации и невозможности адаптации системы культивирования. В настоящее время опубликовано ограниченное число исследований, посвященных сокультивированию клеток эндометрия/маточных труб/клеток кумулюса с эмбрионами [3, 5, 6]. В них на ограниченной выборке бесплодных женщин доказана целесообразность процедуры. В 2022 г. в исследовании Асфаровой Г.Р. и соавт. показана эффективность сокультивирования эмбрионов с аутологичными клетками кумулюса в клинической практике в программах лечения бесплодия методами ВРТ, доказана целесообразность и безопасность такой оптимизации эмбриологического этапа [7].

Настоящая работа является продолжением исследования, где используются внеклеточные везикулы (ВВ), выделенные из фолликулярной жидкости (ФЖ). В 2017 г. были получены обнадеживающие результаты по аутологичному сокультивированию ВВ с незрелыми ооцитами и эмбрионами у крупного рогатого скота, что послужило основанием повторить исследование на человеке в программах ВРТ [8]. Было показано, что добавление ВВ ФЖ в течение in vitro культивирования модулирует развитие эмбриона, улучшает показатели имплантации. ВВ ФЖ были выбраны еще и потому, что доказана их роль в регуляции качества ооцита и последующего постимплантационного развития эмбриона человека [9]. Согласно данным современной российской и зарубежной научной литературы, ВВ состоят из тех же молекул, что и клетки, из которых они происходят, и содержат соответствующие нуклеиновые кислоты (ДНК, кодирующие и некодирующие РНК), белки (ферменты, цитокины, ростовые факторы, антиоксиданты), липиды. ВВ играют решающую роль в коммуникации путем активации специфических рецепторов на клеточной поверхности с помощью белков-лигандов и биоактивных липидов или путем слияния мембраны ВВ с цитоплазматической мембраной клетки-реципиента и последующим транспортом внутрь клетки биоактивных молекул, участвующих в регуляции важных биологических процессов [9–12].

В связи с вышесказанным, цель настоящего исследования: оценить клиническую эффективность оптимизации эмбриологического этапа программ лечения бесплодия методами ВРТ с помощью сокультивирования ВВ ФЖ с эмбрионами у пациентов с множественными неудачными попытками экстракорпорального оплодотворения.

Материалы и методы

Характеристика пациентов

Отбор в исследование был проведен в отделении вспомогательных репродуктивных технологий в лечении бесплодия им. проф. Б.В. Леонова (руководитель – проф., д.м.н. Калинина Е.А.) ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России (директор – академик РАН, проф., д.м.н. Сухих Г.Т.) среди супружеских пар, обратившихся по поводу лечения бесплодия и проведения программы ВРТ с 2022 по 2024 гг.

Критериями включения в исследование служили следующие параметры: нормальный кариотип обоих супругов; возраст женщины 18–40 лет включительно; получение не менее 2 ооцитов в день трансвагинальной пункции фолликулов; не менее 2 неудачных переносов эмбриона в полость матки в анамнезе (как нативных, так и размороженных); невыраженная патозооспермия у супруга. Критериями исключения из исследования были: использование донорских гамет в изучаемом цикле ВРТ; суррогатное материнство; маточный фактор бесплодия, снижение овариального резерва, ожирение; отмена переноса в полость матки; отсутствие оплодотворения. Все супружеские пары были обследованы согласно действующим нормативно-правовым актам (Приказ Минздрава России № 803н от 31 июля 2020 г. «О порядке использования вспомогательных репродуктивных технологий, противопоказаниях и ограничениях к их применению»; клинические рекомендации «Женское бесплодие» (2022, 2024), клинические рекомендации «Мужское бесплодие» (2022)). Противопоказаний к исп...

Ахмедова З.Ф., Сысоева А.П., Гаврилов М.Ю., Зингеренко Б.В., Шевцова Ю.А., Силачев Д.Н., Непша О.С., Макарова Н.П., Кулакова Е.В., Калинина Е.А.