Механизмы регуляции компенсаторных реакций тромбоцитов при нефролитиаз-ассоциированной гематурии у женщин с фолликулярной фазой цикла

Цель исследования: изучить выраженность гематурии, содержание эстрадиола (Эс) и прогестерона (Пр) в крови, функциональную активность рецепторов тромбоцитов (Тц) и установить особенности регуляции тромбоцитарного звена гемостаза у женщин с фолликулярной фазой (ФФ) цикла.
Материал и методы. В исследование включены 59 женщин репродуктивного возраста с нефролитиазом (НЛТ), у которых при обследовании выявлена гематурия. Содержание Эс и Пр в сыворотке крови исследовали на анализаторе UniCel DxI 800. Проанализирована активность пуриновых Р2Y- и РХ1-рецепторов, ТР-рецептора, α2-адренорецептора, GPVI-рецептора, ФАТ-рецептора и аденозинового А2А-рецептора. Агонисты рецепторов использовали в концентрациях ЕС50 и ЕС10. Оценку агрегации Тц проводили турбидиметрическим методом на анализаторе ChronoLog. Статистический анализ осуществлялся с использованием пакета MedCalc.
Результаты. У обследованного контингента женщин уровень Эс находился в диапазоне 164,3±5,0 пг/мл, а Пр – 0,44±0,04 нг/мл.
При анализе рецепторного аппарата Тц обнаружена гиперреактивность ФАТ-рецептора и Р2Х1-рецептора, нормореактивность пуриновых P2Y-рецепторов, А2А-рецептора и ТР-рецептора, гипореактивность GPVI-рецептора и α2-адренорецептора. Выявленная зависимость гематурии от содержания Эс обусловлена негативной модуляцией сигнализации Р2Y-рецепторов, α2-адренорецептора и ТР-рецептора. Компенсаторная реакция Тц достигалась за счет синергизма Р2Y-рецепторов, Р2Х1-рецептора и ФАТ-рецептора. Максимальный эффект агрегации in vitro воспроизводился при взаимодействии пуриновых Р2Y-рецепторов и Р2Х1-рецептора, что обусловлено повышением уровня внутриклеточного Са2+ в результате ко-активации сигнализации через Gq- и Gi- белки и открытия АТФ-зависимого катионного канала.
Заключение. Понимание механизмов модуляции компенсаторных реакций Тц у женщин с ФФ цикла необходимо для разработки стратегии персонифицированной диагностики и лечения осложнений НЛТ.

Нефролитиаз (НЛТ) является одной из наиболее распространенных патологий почек, которая существенно снижает качество жизни пациентов [1]. Актуальность изучения нефролитиаз-ассоциированной гематурии у женщин обусловлена высокой частотой ее возникновения и связанными рисками, включая пиелонефрит, хроническую кровопотерю и необходимость проведения ургентного хирургического вмешательства [2]. Гематурия при НЛТ возникает вследствие механического повреждения слизистой оболочки мочевыводящих путей (МВП) конкрементами, что вызывает локальное воспаление и ишемию тканей [3]. У женщин репродуктивного возраста гематурия развивается на фоне гормональных изменений в течение менструального цикла, которые модулируют гемостатические процессы, включая агрегацию тромбоцитов (Тц). В фолликулярной фазе (ФФ) цикла выраженность гематурии зависит от уровня эстрадиола (Эс), который усиливает кровоток в сосудах МВП, повышая риск кровотечений, и модулирует сигнальные пути Тц, снижая их проагрегантную активность; низкий уровень прогестерона (Пр) в ФФ ограничивает его влияние на агрегацию Тц [4]. Половые гормоны, особенно Эс и Пр, играют ключевую роль в модуляции агрегации Тц через геномные и не геномные механизмы. Действие Эс на Тц может проявляться: а) снижением содержания внутриклеточного Ca²+, что ограничивает сигнализацию, индуцированную AДФ, коллагеном и другими агонистами [5], б) ингибированием экспрессии рецептора GPIIb/IIIa и синтеза ТхA2 [6], в) уменьшением экспрессии GPVI-рецептора [7]. Компенсаторные реакции Тц, ограничивающие гематурию, зависят от функциональной активности рецепторов, сопряженных с G-белком (GPCRs – G-protein-coupled receptors). До настоящего времени нет однозначного ответа о клинической значимости половых гормонов в патогенезе гематурии у женщин репродуктивного возраста с НЛТ, не изучены механизмы модулирующего действия половых гормонов на агрегацию Тц, не выяснены механизмы реализации компенсаторных реакций Тц при гематурии у женщин в разные фазы цикла.

Гипотеза: если у женщин репродуктивного возраста половые гормоны оказывает модулирующее влияние на сигнализацию Тц, то эффективность компенсаторных механизмов в ФФ цикла будет зависеть от Эс, содержание которого значимо превышает уровень Пр в крови.

Цель исследования: изучить выраженность гематурии, содержание Эс и Пр в крови, функциональную активность рецепторов Тц и установить особенности регуляции тромбоцитарного звена гемостаза у женщин репродуктивного возраста с ФФ цикла.

Материал и методы

Проведено одноцентровое проспективное нерандомизи­рованное и неконтролируемое исследование, что позволило оценить естественное течение гематурии и агрегации Тц у женщин репродуктивного возраста с НЛТ. В исследование включены 59 женщин репродуктивного возраста (средний возраст – 32,0±1,2 года; QI–QIII 27,0–34,0 года; min-max 19,0–39,0 лет), у которых при обследовании выявлена гематурия.

Критерии включения: подтвержденный диагноз НЛТ (ультразвуковое или рентгенологическое исследование), наличие микрогематурии (≥3 эритроцитов в поле зрения – э/пз) или макрогематурии, ФФ менструального цикла (дни 1–14, подтвержденные анализом уровня Эс и Пр). Критерии исключения: прием антикоагулянтов, нестероидных противовоспалительных средств в течение 7 дней до исследования, тромбоцитопения, онкологические заболевания, беременность.

Конкременты локализовались в верхней трети мочеточника у 29 (49,2%) пациенток и в нижней трети – у 30 (50,8%). Средний размер конкремента составлял 11,5±0,7 мм (диапазон – 3,0–30,0 мм), что соответствует типичным характеристикам НЛТ, вызывающим гематурию.

Микрогематурию определяли при наличии 3 и более э/пз при микроскопии осадка мочи, при этом выделяли легкую степень – 3–10 э/пз, среднюю – 11–49 э/пз и тяжелую степень микрогематурии –50–100 э/пз. Макрогематурия диагностировалась, если число эритроцитов составляло 1/2 и более поля зрения. Для подтверждения гормонального статуса (ФФ цикла) измеряли уровни Эс и Пр в сыворотке крови на анализаторе UniCel DxI 800 (США).

Оценку агрегации Тц проводили турбидиметрическим методом на агрегометре Chrono-Log (США) в соответствии с Европейскими рекомендациями по стандартизации агрегатометрии [8]. Обогащенную Тц плазму (PRP) получали из периферической крови путем центрифугирования при 200 g в течение 10 минут с последующим отделением PRP (концентрация Тц 250 000±20 000/мкл). Использовали следующие агонисты рецепторов, участвующих в регуляции агрегации Тц: аденозиндифосфат (АДФ, 5,0мкМ, лиганд P2Y-рецепторов), аденозинтрифосфат (АТФ, 500,0 мкМ, лиганд P2X1-рецептора),

Баринов Э.Ф., Ахундова С.А.