Акушерство и Гинекология №9-1 (приложение) / 2024
ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДА ОКРАШИВАНИЯ АКРОСОМ СПЕРМАТИД
Научно-исследовательский институт имени академика А.П. Авцына государственного научного центра Российской Федерации ФГБНУ «Российский научный центр хирургии имени академика Б.В. Петровского» (Министерство науки и высшего образования РФ), Москва, Россия
Актуальность исследования. Акросомальная система сперматид и сперматозоидов формируется из гранулярного аппарата Гольджи. Акросома представляет собой окруженную мембраной органеллу или видоизмененную лизосому, которая прилегает к апикальному полюсу ядра и содержит большое количество углеводов и гидролитических ферментов, а также протеолитический фермент акрозин. В зависимости от изменений в акросомальной системе сперматид, выявляемой с помощью ШИК-реакции, спермиогенез подразделяют на этапы соответственно их дифференцировки. У мышей выделяют 16 18 этапов спермиогенеза. Представленные в литературе протоколы постановки ШИК-реакции отличаются по методам фиксации, использованным окислителям, времени проведения разных этапов окраски.
Цель исследования: оптимизировать этапы окраски акросом сперматид.
Материалы и методы исследования. В работе использовали самцов мышей линии С57BL/6 массой тела 20–22 г (питомник «Столбовая»). Мышей выводили из эксперимента методом цервикальной дислокации под эфирным наркозом.
Полученные результаты и заключение. Разработан модифицированный протокол обработки материала и выявления акросом в сперматидах у мышей:
Проводили забор семенников, помещали их в культуральную среду DMEM/F12 при температуре +4°С.
Семенник разрезали поперек продольной оси и делали мазки-отпечатки. Затем мазки высушивали и фиксировали.
Материал фиксировали по модифицированному методу Шабадаша. В отличие от него мы использовали азотнокислую медь Cu...
