Акушерство и Гинекология №4 (приложение) / 2019
Оценка цитотоксической активности NK-клеток в лабораторной диагностике репродуктивной патологии
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.И. Отта», Санкт-Петербург, Менделеевская линия, 3
Введение. Известны лабораторные методы определения цитотоксической активности (ЦА) NK-клеток – с использованием клеток-мишеней К562 и по экспрессии лизосомального маркера CD107a. NK-клетки присутствуют в эндометрии и децидуальной оболочке. Функции NK-клеток матки и особенности взаимодействия NK-клеток и клеток трофобласта остаются малоизученными.
Целью работы явилась разработка и апробация метода оценки ЦА NK-клеток периферической крови в отношении клеток трофобласта в модели in vitro.
Материалы и методы. Обследованы здоровые небеременные женщины без предшествующих беременностей и с предшествующей одной или несколькими физиологически протекавшими беременностями, закончившимися родами в срок (фертильные), женщины с неосложненной (физиологической) беременностью на сроке 6–7 недель. NK-клетки получали из периферической крови, выделяя мононуклеары в градиенте плотности Histopaque®-1077 (Sigma Aldrich). Используя проточный сортировщик клеток FACSAra III (BD), также выделяли NK-клетки из пула мононуклеаров. Предварительно культивированные в присутствии 1% раствора HEPES и 10% ЭТС клетки трофобласта линии Jeg-3 обрабатывали раствором 4мкМ CFSE и помещали в 96-луночный планшет. В часть лунок с клетками трофобласта вносили мононуклеары периферической крови (соотношение эффектор:мишень 10:1) либо NK-клетки, выделенные из мононуклеарной фракции (соотношение эффектор:мишень 5:1). Центрифугировали планшеты 3 минуты, 100g и инкубировали клетки 4 ч. Затем оценивали количество нежизнеспосо...
