Оптимизация программ вспомогательных репродуктивных технологий у женщин позднего репродуктивного возраста путем сокультивирования ооцитов с донорскими внеклеточными везикулами фолликулярной жидкости

Актуальность: Эффективность лечения бесплодия методами вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) снижается с возрастом женщины из-за старения половых клеток. Ранее показано, что сокультивирование эмбрионов с аутологичными внеклеточными везикулами фолликулярной жидкости (ВВ ФЖ) улучшает эмбриологический этап лечения. Однако у женщин позднего репродуктивного возраста биологические жидкости стареют и теряют эффективность. Поэтому выдвинута гипотеза о применении донорских ВВ ФЖ для улучшения результатов ВРТ.
Цель: Оценить эффективность донорских ВВ ФЖ при сокультивировании эмбрионов женщин старше 40 лет.
Материалы и методы: Исследование проведено среди 79 супружеских пар с бесплодием. Критерии включения: возраст женщины от 40 лет, нормальный кариотип супругов. Пациентки разделены на две группы: основную (n=40) с сокультивированием ооцитов с донорскими ВВ ФЖ и группу сравнения (n=39) со стандартным культивированием. Проведена стимуляция овариальной функции по протоколу с антагонистами гонадотропин рилизинг-гормона. Трансвагинальную пункцию выполняли под анестезией. В группе 1 к оплодотворенным ооцитам добавляли ВВ ФЖ донора. На следующий день выполняли перенос в свежую культуральную среду. Основные параметры оценки: частота оплодотворения, формирования бластоцист и наступления клинической беременности.
Результаты: В группе с донорскими ВВ ФЖ частота оплодотворения была выше (84,8% против 70%, p=0,008), доля отмен переноса эмбрионов ниже (22,5% против 46,1%, p=0,021). Частота наступления беременности и генетически нормальных эмбрионов не отличалась статистически.
Заключение: Донорские ВВ ФЖ улучшают эмбриологические показатели, но не влияют на клинические исходы у женщин позднего репродуктивного возраста.

Вклад авторов: Ахмедова З.Ф. – разработка концепции исследования, сбор материала, обработка данных, написание рукописи статьи; Сысоева А.П. – проведение эмбриологического этапа программы лечения бесплодия, критическое осмысление полученных результатов; Гаврилов М.Ю. – проведение эмбриологического этапа программы лечения бесплодия, выделение внеклеточных везикул; Зингеренко Б.В. – проведение эмбриологического этапа лечения бесплодия, обработка данных; Шевцова Ю.А. – выделение внеклеточных везикул методом ультирацентрифугирования; Силачев Д.Н. – критический анализ рукописи и полученных результатов; Екимов А.Н. – выполнение преимплантационного генетического тестирования; Макарова Н.П. – разработка концепции исследования, обработка данных, написание рукописи; Кулакова Е.В. – критический анализ полученных результатов с точки зрения акушерства и гинекологии; Калинина Е.А. – финальное утверждение рукописи статьи.
Конфликт интересов: Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.
Финансирование: Работа выполнена в рамках инициативного научного проекта «Изучение влияния внеклеточных везикул биологических жидкостей репродуктивных органов и тканей на гаметы, процесс оплодотворения и раннего эмбриогенеза человека и имплантации» (2025–2027, руководитель Макарова Н.П.) ФГБУ «НМИЦ АГП 
им. В.И. Кулакова» МЗ РФ.
Одобрение этического комитета: Настоящее исследование было поддержано на заседании Комиссии по биоэтике 
ФБГУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России (протокол №10 от 20 октября 2022 г.).
Согласие пациентов на публикацию: Пациенты подписали информированное согласие на публикацию своих данных.
Обмен исследовательскими данными: Данные, подтверждающие выводы этого исследования, доступны по запросу у автора, ответственного за переписку, после одобрения ведущим исследователем.
Для цитирования: Ахмедова З.Ф., Сысоева А.П., Гаврилов М.Ю., Зингеренко Б.В., Шевцова Ю.А., 
Силачев Д.Н., Екимов А.Н., Макарова Н.П., Кулакова Е.В., Калинина Е.А. Оптимизация программ вспомогательных репродуктивных технологий у женщин позднего репродуктивного возраста путем сокультивирования ооцитов с донорскими внеклеточными везикулами фолликулярной жидкости.
Акушерство и гинекология. 2025; 8: 133-142
https://dx.doi.org/10.18565/aig.2025.104

Успешное наступление беременности в программах лечения бесплодия методами вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) является результатом взаимодействия множества факторов, среди которых адекватный фолликулогенез и правильное раннее эмбриональное развитие. У женщин позднего репродуктивного возраста (старше 40 лет) эффективность лечения бесплодия остается крайне низкой в силу естественного старения женских половых клеток и, следовательно, неудовлетворительного качества полученных из таких ооцитов эмбрионов [1, 2]. Согласно мировой статистике, частота наступления клинической беременности с собственными ооцитами у пациенток старше 40 лет не превышает 12–13% [1]. Для улучшения результатов развития беременности у данной когорты пациенток требуются новые подходы ВРТ.

В наших предыдущих исследованиях показано, что использование аутологичных внеклеточных везикул (ВВ) фолликулярной жидкости (ФЖ) позволяет улучшить результативность программ лечения бесплодия методами ВРТ [3–5]. На эмбриологическом этапе ВРТ применение ВВ ФЖ увеличивает подвижность сперматозоидов, позволяет проводить селекцию мужских гамет и улучшает оплодотворение. Однако также показано, в том числе на животных моделях, что в позднем репродуктивном возрасте биологические жидкости репродуктивных органов и тканей подвергаются старению и уже не приносят пользы в программе ВРТ. Состав ВВ ФЖ у пациенток старше 40 лет значительно отличается от такового у молодых женщин. Липидом, концентрация важных малых некодирующих РНК, протеом – все эти показатели в рамках общего старения организма и затухания женской репродуктивной функции ухудшаются [6, 7]. Именно поэтому нами была выдвинута гипотеза о возможности улучшения репродуктивных исходов при использовании донорских ВВ ФЖ на эмбриологическом этапе программы лечения бесплодия.

В связи с вышесказанным, цель работы – оценить клиническую и эмбриологическую эффективность применения ВВ ФЖ молодого донора при сокультивировании с ооцитами женщин позднего репродуктивного возраста при лечении бесплодия методами ВРТ.

Материалы и методы

Характеристика пациентов

Отбор пациентов был проведен в отделении вспомогательных репродуктивных технологий в лечении бесплодия им. проф. Б.В. Леонова (руководитель – проф., д.м.н. Калинина Е.А.) ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России (директор – акад. РАН, проф., д.м.н. Сухих Г.Т.) среди пациенток, обратившихся по поводу лечения бесплодия и проведения программы ВРТ с 2023 по 2024 гг.

Критериями включения в исследование служили следующие параметры: нормальный кариотип обоих супругов; возраст женщины от 40 лет включительно; невыраженная патозооспермия у супруга. Критериями исключения из исследования были: отсутствие ооцит-кумулюсных комплексов при трансвагинальной пункции фолликулов, аномальное оплодотворение (3 и более пронуклеуса), использование донорских ооцитов в изучаемом цикле ВРТ; суррогатное материнство; маточный фактор бесплодия, ожирение. Все супружеские пары были обследованы согласно действующим нормативно-правовым актам: Приказ Минздрава России № 803н от 31 июля 2020 г. «О порядке использования вспомогательных репродуктивных технологий, противопоказаниях и ограничениях к их применению»; клинические рекомендации «Женское бесплодие» (2022, 2024), клинические рекомендации «Мужское бесплодие» (2022). Противопоказаний к использованию методов ВРТ у всех супружеских пар не было выявлено. До вступления в программу ВРТ супружеские пары подписали информированное добровольное согласие. Настоящее исследование было поддержано на заседании Комиссии по биоэтике ФБГУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России (протокол № 10 от 20 октября 2022 г.).

Согласно критериям включения/исключения было набрано 79 супружеских пар. Все женщины были случайным образом поделены на две группы: группа 1 основная (n=40) – сокультивирование ооцитов с донорскими ВВ ФЖ; группа 2 сравнения (n=39) – стандартное культивирование. Согласно действующим клиническим рекомендациям, у набранных женщин в большинстве случаев выполняли биопсию полученных бластоцист с последующим проведением преимплантационного генетического тестирования на анеуплоидии (ПГТ-А). При отказе супружеской пары от ПГТ-А, выполняли перенос эмбриона в полость матки.

Проведение лечения бесплодия методами ВРТ

Стимуляцию овариальной функции проводили по протоколу с антагонистами гонадотропин рилизинг-гормона. Триггер овуляции вводили при наличии в яичниках фолликулов диаметром более 17 мм. В качестве триггера овуляции использовали хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) в дозировке 10 000 МЕ или агонист гонадотропин рилизинг-гормона 0,2 мг.

Трансвагинальную пункцию фолликулов проводили под общей анестезией под контролем ультразвукового исследования (УЗИ) атравматичными иглами (Vitrolife, Швеция)...

Ахмедова З.Ф., Сысоева А.П., Гаврилов М.Ю., Зингеренко Б.В., Шевцова Ю.А., Силачев Д.Н., Екимов А.Н., Макарова Н.П., Кулакова Е.В., Калинина Е.А.