Особенности экспрессии TLR9 в плаценте при преэклампсии и задержке роста плода

Цель. Оценить уровень экспрессии TLR9 в образцах плаценты от пациенток, страдающих преэклампсией (ПЭ), осложненной задержкой роста плода (ЗРП).
Были выполнены гистологическое (окрашивание гематоксилином и эозином) и иммуногистохимическое (иммуностейнер Ventana (Roche, UK) с закрытым протоколом для детекции) исследования с применением первичных поликлональных антител к TLR9 (1:300; GenTex) на серийных парафиновых срезах образцов плацент от 40 женщин на сроке 26–39 недель гестации. Из них у 18 диагностировали тяжелую ПЭ, у 12 – умеренную ПЭ; 10 относились к группе контроля. В 8 случаях тяжелой ПЭ была отмечена ЗРП. Сравнительная оценка оптической плотности окрашивания осуществлялась с использованием непараметрического теста Манна–Уитни.
Результаты. При тяжелой ПЭ, в том числе осложненной ЗРП, выявлено значимое повышение цитоплазматического, а также гранулярного окрашивания TLR9 в ворсинчатом (цито- и синцитиотрофобласте (СЦТ)) и вневорсинчатом трофобласте (ВТ). Кроме того, количество гранул TLR9 и их размер в СЦТ и ВТ было ассоциировано со степенью тяжести ПЭ. Диаметр окрашенных гранул в СЦТ при тяжелой ПЭ, осложненной ЗРП, был значимо увеличен (1,27+0,41 мкм) по сравнению с тяжелой ПЭ без ЗРП (1,16+0,33 мкм) (р=0,05), а также в сравнении с умеренной ПЭ (1,13+0,41 мкм) (р=0,001) и группой контроля (1,09+0,30 мкм) (р=0,001). При тяжелой ПЭ, осложненной ЗРП, размер гранул был максимальным для ВТ и составил 1,49+0,41 мкм, что было значимо больше, чем при тяжелой ПЭ без ЗРП, умеренной ПЭ и в группе контроля (р=0,001). Наличие гранулярного типа окрашивания было специфичным для цитотрофобласта, СЦТ, а также для плацентарных макрофагов (клеток Кащенко–Гофбауэра).
Заключение. Таким образом, при тяжелой ПЭ, в том числе осложненной ЗРП, выявлено значимое повышение цитоплазматического, а также гранулярного окрашивания TLR9 в структурах плаценты, прежде всего в ворсинчатом трофобласте (цитотрофобласте и СЦТ) и ВТ. Учитывая, что повышение экспрессии TLR9 ассоциировано с развитием провоспалительного ответа, возможность взаимодействия фрагментов ДНК, в том числе ДНК плода и молекул, связанных с повреждением (DAMP), может лежать в генезе ПЭ и развитии системного воспалительного ответа.

Плацента является барьером для вирусов и бактерий, что осуществляется главным образом посредством факторов неспецифической резистентности, одним из важных звеньев которой являются toll-подобные рецепторы (toll-like receptors, TLRs) [1]. TLR9 распознают неметилированные последовательности CpG-ДНК экзогенного и эндогенного происхождения: бактериальную и вирусную ДНК, а также поврежденные фрагменты клеток ДНК хозяина и ДНК плода [2, 3], чем инициируют сигнальный каскад, приводящий к активации NF-kB фактора и выработке провоспалительных цитокинов [1, 3]. Кроме того, TLRs посредством связи с белком AP-1 могут также регулировать не только уровень провоспалительного ответа, но и апоптоз, пролиферацию и дифференцировку клеток [4, 5].

Преэклампсия (ПЭ) – это мультисистемное осложнение беременности, выявляемое после 20 недели гестации, проявляющееся повышением давления и протеинурией, нередко – отеками [6, 7]. Хотя наиболее изученной причиной ПЭ является неполная трансформация спиральных артерий ввиду слабой инвазии трофобласта [6], ряд исследований показал, что для ПЭ характерно повышение цитокинов типа Th1 и Th17 и, соответственно, провоспалительный тип иммунного ответа [8].

Цель исследования: оценить уровень экспрессии TLR9 в ткани плаценты при ПЭ и задержке роста плода (ЗРП).

Материалы и методы

В исследование были включены 18 рожениц с тяжелой ПЭ, у 8 из них отмечалась ЗРП, а также 12 пациенток с умеренной ПЭ. Группу контроля составили 10 рожениц с неосложненной доношенной беременностью.

Критерии включения в группу с умеренной ПЭ: признаки артериальной гипертензии >140/90 мм рт. ст., протеинурии >0,3 г в сутки; для тяжелой ПЭ: артериальное давление >160/110 мм рт. ст. и протеинурия >5 г в сутки [6, 7]. Критериями включения при неосложненной доношенной беременности явились: физиологическое течение беременности, родоразрешение путем кесарева сечения по поводу неправильного положения плода, рубца на матке, а также патологии, не связанной с акушерским анамнезом (миопии тяжелой степени, угрозы отслоения сетчатки).

Критериями исключения из всех групп явились острые и хронические воспалительные заболевания, многоплодная беременность, тяжелая экстрагенитальная патология, состояние после трансплантации внутренних органов, применение вспомогательных репродуктивных технологий, онкологические заболевания в анамнезе, врожденные пороки развития плода, сахарный диабет, самопроизвольное родоразрешение.

На серийных парафиновых срезах было выполнено гистологическое исследование с окрашиванием гематоксилином и эозином, а также иммуногистохимическое (посредством иммуностейнера Ventana (Roche, UK) с закрытым протоколом для детекции) исследование с применением первичных поликлональных антител к TLR9 (1:300; GenTex) на образцах плацент, полученных от женщин на сроке 26–39 недель гестации, подвергнутых кесареву сечению [9]. Посредством системы анализа изображения NIS-Elements (Чехия) на базе микроскопа Nikon Eclipse было оценено мембранное и цитоплазматическое окрашивание продуктов реакции TLR9 в структурах плаценты в единицах оптической плотности. Для удобства представления все данные были умножены на 100. Учитывая техническую сложность и малый диаметр эндотелия сосудов промежуточных ворсин и мезенхимальных клеток стромы, была проведена оценка только цитоплазматического окрашивания.

Нами был выполнен анализ не менее 20 полей зрения (п./зр.) в каждом образце при увеличении х400. При помощи программы NIS-Elements измерен диаметр цитоплазматических гранул, окрашенных TLR9 в синцитиотрофобласте (СЦТ) и вневорсинчатом трофобласте (ВТ) в мкм, кроме того, произведена оценка количества гранул в СЦТ в соот...

Низяева Н.В., Амирасланов Э.Ю., Ломова Н.А., Долгополова Е.Л., Наговицына М.Н., Шмаков Р.Г.