Первая беременность в России после проведения программы ЭКО и переноса эмбрионов, диагностированных с помощью сравнительной геномной гибридизации на чипах, в полость матки

01.05.2013
1340

ФГБУ Научный центр акушерства гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России, Москва

Пациентка Б., 27 лет поступила в Центр для проведения программы ЭКО с диагнозом: Бесплодие II трубного и мужского генеза (астенотератозооспермия 1–2-й степени). Проведена программа ЭКО в протоколе с антГнРГ (Гонал Ф 150/1500 МЕ). Произведена трансвагинальная пункция обоих яичников, получено 14 ооцитов . На 3-и сутки культивирования было получено 8 эмбрионов, пригодных для биопсии, которые в дальнейшем оценивались методом сравнительной геномной гибридизации на чипах. Для переноса в полость матки были выбраны 2 эмбриона, у которых не было выявлено генетических нарушений. На 5-е сутки произведен перенос двух эмбрионов в полость матки. На 8-й день после переноса эмбриона В-ХГ составлял 225 МЕ/л, по УЗИ в полости матки визуализируются два плодных яйца.

Проблема бесплодных браков ввиду нарастающей частоты во всем мире и в том числе в Российской Федерации является критически актуальной в связи с потенциальной угрозой воспроизводству населения и сохранению его генофонда. За прошедший 10-летний период эти цифры не имели существенной положительной динамики в различных популяциях, что позволяет констатировать сохраняющийся высокий процент неэффективных попыток ВРТ. Выбор эмбриона для имплантации играет критическую роль для успешного исхода планируемой беременности и основывается на морфологическом клеточном анализе эмбрионов [1, 2]. Первостепенной составляющей успеха в программах ВРТ может считаться эффективная оценка качества эмбрионов с целью их адекватной селекции, что позволит успешно повысить частоту наступления беременности и одновременно снизить частоту многоплодия. Однако поскольку эффективность морфологической оценки не абсолютна, до 70% полученных in vitro эмбрионов не имплантируются. Основной причиной этого являются количественные хро- мосомные аномалии с нарушением правильного числа хромосом в клетке (анеуплоидии), которые проявляются в потере или наличии дополнительной хромосомы или ее части.

Благодаря современным достижениям молекулярной генетики, на сегодня в целях преимплантационного генетического скрининга (ПГС) активно исследуется метод сравнительной геномной гибридизации (СГГ, Comparative genomic hybridization – CGH). CGH представляет собой технологию высокоразрешающего скрининга всего генома на предмет вариации числа копий отдельных его сегментов, что позволяет диагностировать анеуплоидии и микроструктурные хромосомные аномалии одномоментно во всех хромосомах [3, 4]. Этот метод обладает высокой разрешающей способностью, которая превышает

таковую в сравнении с кариотипированием более чем в 1000 раз. Даже после проведения полногеномной амплификации ДНК, выделенной из единичных клеток, разрешение метода позволяет определять как анеуплоидии целых хромосом, так и аномалии (делеции и дупликации) на субхромосомном уровне. Из существующих в настоящее время типов СГГ – на хромосомах и на микрочипе (последняя в англоязычной литературе носит название array-CGH, или aCGH, что переводится как матриксная CGH) – наибольшую диагностическую перспективу в клинической практике представляет метод array-CGН, называемый также «молекулярным кариотипированием» благодаря своей высокой разрешающей способности [5, 6].

Описание: Больная Б., 27 лет, поступила для проведении программы ЭКО с диагнозом: Бесплодие II трубного и мужского генеза (астенотератозооспермия 1–2-й степени).

В анамнезе:

– бесплодие в течении 4 лет. 2 внематочные беременности, двусторонняя тубэктомия. В феврале 2011 г. программа ЭКО в протоколе с антГнРГ (гонал Ф 150/1800), при трансвагинальной пункции получено 16 ооцитов, перенос 2 эмбрионов на стадии бластоцист. Биохимическая беременность, витрификация 3 бластоцист. В апреле 2011 г. криопротокол, перенос 2 эмбрионов на стадии бластоцист. Беременность не наступила. В октябре 2011 г. программа ЭКО в протоко- ле с антГнРГ (пурегон 100/1000МЕ), при трансвагинальной пункции получено 9 ооцитов, перенос 2 эмбрионов на стадии бластоцист. Беременность не наступила.

В феврале 2012 г. гистероскопия, ЦУГ-биопсия эндометрия, патологии не обнаружено. В марте 2013 г. программа ЭКО/ИКСИ в протоколе с антГнРГ (гонал Ф 150/1500 МЕ). 18.03.2013 произведена трансвагинальная пункция обоих яични- ков, получено 14 ооцитов. 11 ооцитов имели степень зрелости МII и были оплодотворены методом ИКСИ, на 1-е сутки развития нормальное оплодотворение наблюдалось у 11 клеток. На 2-е сутки было получено 11 эмбрионов, из них 3 – отличного качества, 7 – хорошего качества и 1 эмбрион удовлетворительного качества. На 3-и сутки культивирования было получено 8 эмбрионов, пригодных для проведения биопсии. 3 эмбриона остановились в развитии и были выключены из дальнейшего протокола культивирования. Биопсия проводилась по стандартной методике, иглами для биопсии бластомера HumagenMBB-BP-L-30 на установке микроманипуляторов Narishige, вспомогательный хетчинг был выполнен при помощи лазера Zilos- TK.

Сравнительная геномная гибридизация бластомеров проводилась с использованием оборудования фирмы Agilent (США). Полногеномную амплификацию ДНК исследуемых бластомеров проводили с помощью набора PicoPlex SingleCell WGA Kit (Rubicon Genomics, США). Качество и количество полученной в ходе амплификации ДНК контролировали с помощью 1,2% агарозного электрофореза. Мечение ампликонов проводили с помощью набора SureTag DNA labeling Kit (Agilent, США) согласно прилагаемой инструкции. Меченые ампликоны наносили на биочип Sure Print G3 8x60KCGH (Agilent, США), гибридизовали 16 часов, после чего проводили отмывку и сканирование на сканере биологических чипов SureScanMicroarrayScanner. Интерпретацию полученных результатов проводили с помощью программного продукта Agilent CytoGenomics 2.5.8.1.

Таблица. Результаты сравнительной геномной гибридизации эмбрионов согласно номенклатуре ISCN.

Методом сравнительной геномной гибридизации выявлено шесть эмбрионов с нормальным количеством хромосом и два с анеуплоидиями. У эмбриона № 2 установлена моносомия по хромосомам 7, 9, 10, 12, 21 и трисомия по хромосомам 11, 14 и 16. У эмбриона № 5 выявлена трисомия по хромосомам 2, 9 и 12. Эмбрионы № 2 и № 5 остановились в развитии на 3-и сутки. В эмбрионах № 1, 6, 7, 8, 9 и 11 анеуплоидии выявлено не было. Тем не менее, детальный анализ полученных данных позволил сделать вывод о наличии аномалий в 3-й хромосоме у эмбриона № 7, делеции в 13-й хромосоме у эмбриона № 8 и делеции в 18-й хромосоме эмбриона № 9. Эмбрион № 11, несмотря на отсутствие выявленной анеуплоидии, остановился в развитии на 3-и сутки. Таким образом, для переноса в полость матки были выбраны эмбрионы № 1 и № 6, в которых не было выявлено генетических нарушений (таблица). На 8-й день после переноса В-ХГ составлял 225 МЕ/л, по УЗИ в полости матки визуализируется два плодных яйца.

Заключение

Таким образом, впервые в России был успешно внедрен и проведен предимплантационный генетический скрининг с применением сравнительной геномной гибридизации на чипах. Широкое внедрение данной технологии позволит улучшить результативность программ ВРТ.

Работа частично поддержана Государственным контрактом Министерства образования и науки РФ №16.522.12.2009 от 29.09.2011.

Список литературы

1. Alfarawati S., Fragouli E., Colls P., Wells D. First births after preimplantation genetic diagnosis of structural chromosome abnormalities using comparative genomic hybridization and microarray analysis. Hum. Reprod. 2011; 26(6): 1560-74.

2. Fragouli E., Katz-Jaffe M., Alfarawati S., Stevens J., Colls P., Goodall N.N. et al. Comprehensive chromosome screening of polar bodies and blastocysts from couples experiencing repeated implantation failure. Fertil. Steril. 2010; 94(3): 875-87.

3. Екимова Е.В., Екимов А.Н., А лексеева М.Л. Роль молекулярных методов диагностики анеуплоидий в предимп- лантационном скрининге эмбрионов (обзор литературы). Проблемы репродукции. 2012; 6: 56-9.

4. Сорвачева М.В., Веюкова М.А., Мишиева Н.Г., Абубакиров А.Н., Виноградова Л.В. Роль предимплантационного генетического скрининга в повышении эффективности лечения бесплодия у пациенток с повторными неэффективными попытками ЭКО. Акушерство и гинекология. 2013; 1: 15-8.

5. Kuliev A., Cieslak J., Ilkevitch Y., Verlinsky Y. Chromosomal abnormalities in a series of 6,733 human oocytes in preimplantation diagnosis for age-related aneuploidies. Reprod. Biomed. Online. 2003; 6(1): 54-9.

6. Treff N.R., Levy B., Su J., Northrop L.E., Tao X., Scott R.T. Jr. SNP microarray-based 24 chromosome aneuploidy screening is significantly more consistent than FISH. Mol. Hum. Reprod. 2010;16(8): 583-9.

Об авторах / Для корреспонденции

Сорвачева Мария Викторовна, аспирант ФГБУ НЦ АГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России
Адрес: 117997, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (915) 054-19-77. Е-mail: Sorvacheva.86@mail.ru
Екимов Алексей Николаевич, врач клинической лабораторной диагностики ФГБУ НЦ АГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России
Адрес: 117997, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (926) 980-58-60. Е-mail: aekimov@gmail.com
Веюкова Мария Александровна, кандидат биологических наук, эмбриолог 1 гинекологического отделения ФГБУ НЦ АГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава
России
Адрес: 117997, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (929) 976-05-27. Е-mail: veymary@gmail.com
Екимова Елена Вячеславовна, кандидат биологических наук, научный сотрудник 1 гинекологического отделения ФГБУ НЦ АГиП им. академика В.И. Кулакова
Минздрава России
Адрес: 117997, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (903) 003-88-41. Е-mail: eleekimova@gmail.com
Мишиева Нонна Годовна, доктор медицинских наук, ведущий научный сотрудник 1 гинекологического отделения ФГБУ НЦ АГиП им. академика В.И. Кулакова
Минздрава России
Адрес: 1117997, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495)438-26-22. E-mail:nondoc555@mail.ru
Аксененко Артем Анатольевич, врач 1 гинекологического отделения ФГБУ НЦ АГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России
Адрес: 117997, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-26-22. Е-mail: a_axenenko@oparina4.ru
Абубакиров Айдар Назимович, кандидат медицинских наук, руководитель 1 гинекологического отделения ФГБУ НЦ АГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава
России
Адрес: 117997, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-26-22. Е-mail: nondoc555@yahoo.com
Трофимов Дмитрий Юрьевич, доктор биологических наук, руководитель лаборатории молекулярно-генетических методов ФГБУ НЦ АГиП им. академика
В.И. Кулакова Минздрава России
Адрес: 117997, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон 8 (495) 438-49-51. Е-mail::d_trofimov@oparina4.ru
Барков Илья Юрьевич, врач-генетик лаборатории молекулярно-генетических методов ФГБУ НЦ АГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России
Адрес: 117997, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-49-51. Е-mail: i_barkov@oparina4.ru
Левков Лев Алексеевич, кандидат биологических наук, советник директора по науке, ФГБУ НЦ АГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России
Адрес: 117997, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (925) 477-57-38. Е-mail: lev.levkov@gmail.com
Сухих Геннадий Тихонович, профессор, доктор медицинских наук, академик РАМН, директор ФГБУ НЦ АГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России
Адрес: 117997, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4

Нет комментариев

Комментариев: 0

Вы не можете оставлять комментарии
Пожалуйста, авторизуйтесь