Первые случаи заболевания, вызванного Borrelia miyamotoi, на Дальнем Востоке России

Проведены исследования по выявлению клещевых патогенов, включая вирус клещевого энцефалита, боррелии, анаплазмы эрлихии, на юге Дальнего Востока России.
Цель исследования. Верификация Borrelia miyamotoi в иксодовых клещах и крови пациентов, описание случаев заболевания.
Материалы и методы. В 2014–2015 гг. исследовали I. persulcatus, собранные с растительности (238 проб); I. persulcatus, снятые с пациентов (253 проб); лейкоцитарные фракции крови от пациентов после присасывания клеща (168 проб). ПЦР в режиме реального времени проводили с помощью наборов реагентов «МультиПрайм» для амплификации фрагмента кДНК TBEV, B. burgdorferi s.l., A. phagocytophilum, E.chaffeensis/E.muris-FL (ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии», Москва) и B. miyamotoi (АО «Вектор-Бест», Новосибирск). Проведено секвенирование участков гена glpQ B. miyamotoi длиной 680 п. н.
Результаты. Характерные симптомы болезни, вызванной B. miyamotoi, выявлены только у двух пациентов из 21 верифицированного случая (14 экземпляров I. persulcatus, снятых с пациентов, и 7 образцов лейкоцитарной фракции крови пациентов после присасывания клеща). Секвенирование гена glpQ и филогенетический анализ показали генетические отличия B. miyamotoi от B. burgdorferi s. l. и сходство с боррелиями группы возбудителей возвратных лихорадок.
Заключение. Среди клещевых патогенов велика роль не только B. burgdorferi s.l., вызывающих болезнь Лайма, но и нового возбудителя B. miyamotoi, не известного ранее на Дальнем Востоке.

В настоящее время предполагается, что под термином «иксодовые клещевые боррелиозы» (ИКБ) объединены 2 заболевания, развивающиеся после присасывания клеща. Этиология их различается: болезнь Лайма, вызываемая боррелиями группы B. burgdorferi sensu lato, характеризуется эритемой в месте присасывания, а заболевание, вызываемое В. miyamotoi, протекает, как правило, в безэритемной форме [1, 2]. В 1995 г. появилось первое сообщение об обнаружении на о. Хоккайдо (Япония) изолятов неизвестной спирохеты, которая была обнаружена в биологическом материале, собранном в период с 1990 по 1992 г. [3]: 3 из них выделены из голодных таежных клещей; 2 – из напитавшихся клещей, снятых с птиц; 1 – из клещей, снятых с грызуна. Обнаруженная новая спирохета была названа B. miyamotoi. Первооткрыватели тогда посчитали, что эта спирохета не имеет значения в патологии человека. Однако с 2009 г. стали появляться публикации об обнаружении нуклеиновых кислот В. miyamotoi в крови больных с нехарактерными для болезни Лайма рецидивирующими лихорадочными приступами, которые возникали после присасывания иксодовых клещей [1, 4, 5]. Позднее этот новый вид боррелии стали активно выделять из клещей и из крови пациентов в странах Европы [6] и в Северной Америке [7] на территориях обитания переносчиков – возбудителей болезни Лайма.

В 2006 г. была впервые выявлена ДНК B. miyamotoi у 6,3% клещей рода Ixodes, собранных на территории Удмуртии, и в крови пациентов с диагнозом «болезнь Лайма» [5, 8]. Затем было установлено, что данный возбудитель на территории Российской Федерации встречается в клещах I. ricinus в Московской и Липецкой областях и Ставропольском крае (1,2% случаев). Уровень зараженности клещей I. persulcarus B. miyamotoi составил в центральных областях РФ 1,9%, в Поволжье – 5,7%, на Урале – 2,9%, в Сибири – 3,3%. Причем одновременно на этих территориях до 62% клещей I. ricinus и до 35% I. persulcatus были инфицированы B. burgdorferi [9]. Генетический маркер B. miyamotoi в клещах и в крови лихорадящих больных в Новосибирске, а также в крови мелких грызунов в Западной Сибири выявляли, используя ПЦР-тест «РеалБест ДНК Borrelia miyamotoi» (АО «Вектор-Бест», Новосибирск) с последующим подтверждением с помощью секвенирования [10, 11]. Первые случаи выявления ДНК B. miyamotoi в иксодовых клещах на территории Дальнего Востока РФ были зарегистрированы в 2014 г. [12].

Молекулярно-генетический анализ В. miyamotoi показал принадлежность этого возбудителя к отдельной генетической ветви эволюционного дерева рода боррелий – группы возбудителей возвратных лихорадок [3, 13]. Borrelia miyamotoi, которая генетически группировалась с боррелиями возвратного тифа, была идентифицирована как патогенная для человека в России [1, 5], Соединенных Штатах [14–16], Европе [6] и Японии [17].

Цель настоящего сообщения – верификация B. miyamotoi в иксодовых клещах и крови пациентов, описание случаев заболевания на юге Дальнего Востока России.

Материалы и методы

В работе проведены результаты исследования материалов, собранных на юге Дальнего Востока в весенне-летние сезоны 2014 и 2015 гг.:

• 238 клещей I. persulcarus, собранных с растительности на о. Русском;
• 253 присосавшихся клещей I. persulcarus, снятых с пациентов;
• 168 лейкоцитарных фракций крови пациентов на 2–3-й день после присасывания клеща.

Каждого клеща гомогенизировали с помощью прибора TissueLyser LT («QIAGEN Hilden», Германия). Выделение нуклеиновых кислот для ПЦР проводили из индивидуальных суспензий клещей, лейкоцитарной фракции крови с использованием набора реагентов РНК/ДНК «РИБО-преп» (ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора, Москва) и набора «Реал¬Бест экстракция 100» (АО «Вектор-Бест», Новосибирск) согласно инструкциям производителей.

Для проведения ПЦР в режиме реального времени (ПЦР-РВ) использовали амплификатор с флуоресцентной детекцией «Rotor-Gene Q» («QIAGEN Hilden», Германия). Молекулярно-диагностические исследования проводили с помощью наборов реагентов серии «МультиПрайм» для амплификации фрагмента кДНК TBEV, B. burgdorferi s.l., A. phagocytophilum, E. chaffeensis/E. muris-FL (ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора, Москва), а также наборов реагентов для выявления ДНК B. miyamotoi «РеалБест ДНК Borrelia miyamotoi» (АО «Вектор-Бест», Новосибирск).

В качестве мишени в наборе «РеалБест ДНК Borrelia miyamotoi» для амплификации и последующего выявления участка ДНК B. miyamotoi был выбран фрагмент гена glpQ, который отсутствует у боррелий комплекса Borreli...

Леонова Г.Н., Бондаренко Е.И., Иванис В.А., Беликов С.И., Лубова В.А.