Противовирусная активность Тантума Верде и его активного вещества бензидамина гидрохлорида в отношении вируса гриппа в опытах in vitro

Обоснование. Вирусы гриппа относят к социально значимым инфекциям, и именно с этим связана актуальность исследований, направленных на снижение ущерба как здоровью человека, так и обществу в целом. Одним из направлений в поиске препаратов с широким спектром противовирусного действия является изучение эффектов ранее применяемых лекарственных средств. Бензидамина гидрохлорид (БГ) относят к фармакологической группе нестероидных противовоспалительных средств, изучение его противовирусных свойств могло бы расширить рекомендации по применению этого препарата.
Цель исследования: изучение активности БГ и его готовой лекарственной формы Тантум Верде в отношении вируса гриппа.
Методы. В исследовании использовался вирус гриппа A(H1N1) pdm09, представитель популяции эпидемических штаммов, в опытах in vitro. В качестве исследуемых препаратов использовались субстанция БГ и готовый лекарственный препарат – спрей для местного применения, содержащий 0,15%-ный раствор бензидамина (Тантум Верде). Исследование их противовирусных свойств проведено по профилактической и лечебной схемам.
Результаты. Минимальные ингибирующие концентрации IC50 для БГ составили 1,4 и 4,2 мкг/мл в профилактическом и лечебном режимах соответственно, а для Тантум Верде – 2,8 мкг/мл в профилактическом режиме. Также отмечено наличие вирулицидного действия Тантум Верде. При концентрациях препарата 1,0–10,0 мкг/мл наблюдали подавление вирусной репродукции на 4,0–6,0 lg.
Заключение. Результаты исследования обнаружили активность БГ в отношении вируса гриппа A(H1N1) pdm09 как в профилактическом (до или одномоментно с заражением культуры), так и в лечебном режиме внесения (через 2 часа после заражения культуры), что говорит о том, что БГ способен влиять на репликацию вирусов в культуре клеток.

Введение

В 2009 г. на сайте Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) появилось первое сообщение о вспышке в Мексике и США нового варианта вируса гриппа, А(H1N1) pdm09, с которым была связана более высокая смертность, чем при ранее циркулировавших вирусах гриппа A(H1N1), A(H3N2) и В [1].

Традиционно для лечения и профилактики осложнений при вирусных и бактериальных инфекциях, облегчения клинической симптоматики применяют препараты разных лекарственных групп, вводимые «во входные ворота» возбудителей, например орально или интраназально. Бензидамина гидрохлорид (БГ), его лекарственные формы Тантум Роза и Тантум Верде – лекарственные средства, обладающие сразу несколькими фармакодинамическими свойствами: антибактериальным, фунгицидным, обезболивающим и противовоспалительным [2]. Антисептический эффект БГ изучался в исследованиях in vitro с использованием нескольких типов культурных сред и множества микроорганизмов [3, 4]. БГ ингибировал различные бактерии (грамположительные и грамотрицательные кокки, грамотрицательные бациллы), дрожжевые и другие грибы в культурных средах, инфицированных изучаемыми микроорганизмами. До настоящего времени действие БГ на вирусы гриппа человека не изучали.

Исходя из вышесказанного, актуальность исследования активности БГ и его лекарственных форм в отношении вируса гриппа очевидна с точки зрения возможности расширения рекомендаций по их практическому применению.

Методы

Субстанция и лекарственные препараты

Субстанция БГ и готовое лекарственное средство Тантум Верде (содержит 0,15% БГ) производства Angelini S.p.a. (Италия) были предоставлены российским представительством компании ООО «Анджелини Фарма Рус». Субстанцию БГ и Тантум Верде растворяли в дистиллированной воде до конечной концентрации 1,0 мг/мл (сток). Перед постановкой опытов готовили разведение стоков средой Игла МЕМ с двойным набором аминокислот. В работе использовали концентрации соединения 0,5; 1,0; 2,5; 5,0; 7,5 и 10,0 мкг/мл. В качестве контроля использовали среду Игла МЕМ с двойным набором аминокислот.

Вирусы, применяемые в опытах in vitro

В исследования был включен пандемический штамм вируса гриппа человека, вызвавший тяжелую форму гриппозной инфекции с летальным исходом – A/IIV-Orenburg/29-L/2016 (H1N1) pdm09 – в эпидемическом сезоне 2015–2016 гг. Вирус был выделен из аутопсийного материала (легкие – L) на культуре клеток MDCK в лаборатории этиологии и эпидемиологии гриппа ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России. Штамм депонирован в Государственную коллекцию вирусов Центра экологии и эпидемиологии гриппа Института вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России; номер депонирования – 2827.

Данный вирус гриппа резистентен к ремантадину. По данным частичного секвенирования гемагглютинина, определена мутация в рецептор-связывающем сайте (D222N), что определяет более широкую специфичность вируса по отношению к рецепторам респираторного тракта человека (не только верхних, но и нижних дыхательных путей).

Характеристика клеточной культуры, использованной в опытах in vitro

Для изучения активности препаратов БГ и Тантум Верде использовали клетки культуры ткани MDCK (Madin and Darby Canine Kidney), перевиваемую линию клеток почки собаки породы «спаниель», которую применяют во всех лабораториях мира для выделения эпидемических штаммов вирусов гриппа из клинических материалов, а также проведения опытов in vitro.

Изучение токсичности субстанций для клеток культуры ткани MDCK

Клетки MDCK выращивали в 96-луночных культуральных плоскодонных планшетах до полного монослоя. Затем среду удаляли и в планшеты вносили разные концентрации Тантум Верде: 10,0–1000,0 мкг/мл.

После инкубации клеток с препаратом в течение ...

Н.В. Бреслав, Е.С. Кириллова, И.В. Кукес, Е.И. Бурцева