РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ РАСПРОСТРАНЕННОСТИ И МОНИТОРИНГА ЗА ВОЗМОЖНО ОНКОГЕННЫМИ ТИПАМИ ВПЧ НА ОСНОВЕ ПЦР-РВ

Актуальность. Разработка новых лабораторных методик для выявления и количественного определения ранее малоизученных типов ВПЧ увеличивает объем данных об их распространенности в целом и при различных патологиях эпителия слизистых оболочек человека. Внедрение разработанных методик в практическое использование способствует установлению роли данных типов в развитии ВПЧ-ассоциированных заболеваний влагалища, цервикального канала, анального канала, ротоглотки и др. Цель работы: Разработка набора реагентов (НР) для качественного и количественного определения ДНК ВПЧ возможно онкогенных типов (26, 53, 67, 70, 73, 82) в биологическом материале методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ). Материалы и методы. Для разработки и апробации НР использовались образцы биологического материала пациентов с интраэпителиальной неоплазией цервикального канала различной степени тяжести и наличием ВПЧ возможно онкогенных типов. Для экстракции ДНК из биологических образцов использовались НР, разработанные во ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора. Для подтверждения наличия ВПЧ 26, 53, 67, 70, 73, 82 типов в биологическом материале использовалась вложенная ПЦР с использованием консенсусных праймеров My9/11 и Gp5+/6+ с последующим секвенированием ампликонов по Сэнгеру. Для определения концентрации амплифицируемых фрагментов в контрольных образцах использовалась цифровая капельная ПЦР.

Результаты. Разработаны специфические олигонуклеотидные праймеры и зонды для ампли...

Кулешова О.Б., Виноградова Н.А., Надысева Т.А., Домонова Э.А.