Эпидемиология и Инфекционные болезни. Актуальные вопросы №1 / 2011
Распространение вируса Баткен/Дхори в эндемичной по крымской-конго геморрагической лихорадке Астраханской области РФ
Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН, Московская область; ФГУН Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва; ГОУ ВПО Астраханская государственная медицинская академия, Астрахань
Приведены данные о широком распространении вируса Баткен/Дхори в очаге крымской-конго геморрагической лихорадки (ККГЛ) на территории Астраханской области РФ и возможном его влиянии на спонтанную инфицированность клещей Hyalomma marginatum marginatum вирусом ККГЛ (по материалам 1980—1990 и 2005—2009 гг.). Выделены и описаны штаммы вируса Баткен/Дхори, относящиеся к негемагглютинирующему варианту этого вируса. Из клещей H. marginatum marginatum изолированы также природные микстштаммы вирусов Баткен/Дхори и ККГЛ. Обсуждается взаимодействие вирусов Баткен/Дхори и ККГЛ в экспериментальных и природных условиях.
Одним из биотических факторов среды, которые могут оказывать влияние на напряженность очагов крымской-конго геморрагической лихорадки (ККГЛ), является присутствие в организме переносчика дополнительного агента вирусной этиологии. Это обстоятельство может привести к изменению обычных симбиотических взаимоотношений между вирусом ККГЛ и его основным переносчиком — клещом Hyalomma marginatum marginatum [1]. На территории Астраханской области существуют сочетанные очаги чумы, туляремии, риккетсиозов и арбовирусных инфекций [2]. Наличие единых
переносчиков и механизмов передачи создает условия для совместной циркуляции возбудителей, при этом увеличивается риск возникновения микстинфекций. По данным многолетних исследованиий, проведенных в Астраханской области, была установлена циркуляция вируса Баткен/Дхори (Б/Д) — представителя рода Thogotovirus семейства Orthomyxoviridae [13]. Показатель зараженности клещей Hyalomma marginatum marginatum вирусом Б/Д в этой области в отдельные годы был значительно выше, чем вирусом ККГЛ [1]. В 1965—1966 гг. из клещей Hyalomma plumbeum plumbeum (их современное
название — Hyalomma marginatum marginatum), собранных в Астраханской области, был выделен вирус Астра, имевший родство с вирусом Дхори [4, 5]. В последующие годы при изучении циркуляции арбовирусов на территории этой области были отмечены находки вируса Дхори [6].
В настоящем сообщении приведены данные о распространении вируса Б/Д на территории
Астраханской области РФ и возможном его влиянии на спонтанную инфицированность клещей
Hyalomma marginatum marginatum вирусом ККГЛ (по материалам 1980—1990 и 2005—2009 гг.).
Материалы и методы
Иксодовых клещей собирали с домашних животных в стационарных пунктах 10 районов Астраханской области подекадно в период массового хода членистоногих (апрель—май). Всего исследовано 43 724 клеща, из которых было приготовлено 4335 суспензий. Формирование проб, обработку клещей для вирусологических исследований проводили, как описано ранее [7]. Для определения антител к вирусу Б/Д были исследованы пробы сыворотки крови 548 сельских жителей области и 1328 коров.
При исследовании вирусофорности клещей использовали метод внутримозгового заражения новорожденных белых мышей 2-суточного возраста (НБМ). Результаты заражения оценивали
с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) (определение антигена вируса ККГЛ в суспензии
мозга НБМ) и реакции связывания комплемента (РСК) (определение антигенов вируса ККГЛ
и вируса Б/Д) [7, 8]. Для 7 штаммов Б/Д и 16 штаммов ККГЛ, изолированных в 2005—2009 гг.,
их идентификация была подтверждена с помощью специфической полимеразной цепной реакции
(ПЦР) [9].
Для изучения патогенности вируса Б/Д использовали лабораторных животных: НБМ, молодых белых мышей массой 5—6 г (МБМ), взрослых белых мышей массой 18—20 г (ВБМ), морских свинок массой 300—400 г. Для изучения взаимодействия вируса Б/Д с клетками млекопитающих использовали культуру клеток Vero-E6. Для серологических исследований готовили сахарозоацетоновые антигены, используя штаммы К251-243 (Астраханская область, 1990) и Ходжа (Узбекистан, 1967) вируса ККГЛ и штаммы К251-55 (1990 г.) и К379-106 (2005 г.) вируса Б/Д, выделенные в Астраханской области.
Применяли метод внутримозгового и внутрибрюшинного заражения НБМ, МБМ, ВБМ и внутрибрюшинный метод заражения морских свинок. Заражение культуры клеток и выявление колоний бляшек под агаровым покрытием [10], обработку эфиром и дезоксихолатом натрия [11], постановку
реакции гемагглютинации [3] и РСК [8] выполняли, как описано ранее.
Геном штаммов вируса Б/Д был охарактеризован путем прямого секвенирования нуклеотидных последовательностей фрагментов гена гликопротеина с праймерами DHV-G1 CACTTTGCCTACCACACGTGCA ACCTAT и DHV-G2 CCGAGCAATGTTCCCAACAGTCTGT (577 нуклеотидов, сегмент 4) и гена нуклеопротеина с праймерами DHV-N1 CTTGTGGCAGCGGAACCCAGTCA и DHV-N2
GCAGGCAGCGAAAGGTGCAGTAGATTA (486 нт, сегмент 5). Праймеры DHV-G1 и DHV-G2 использовали также в ПЦР для идентификации вируса Б/Д.
Результаты и обсуждение
Данные о циркуляции вируса Б/Д, полученные нами в сезоны 1980—1990 гг., свидетельствовали о широком распространении этого арбовируса в дельтовых (южных) районах Астраханской области. Вирус Б/Д был выявлен в 29 точках сбора иксодовых клещей на территории 7 районов, расположенных в дельте Волги. В годы высокой численности иксодовых клещей (1983—1985, 1989) было отмечено значительное увеличение числа суспензий, содержавших вирус Б...
