Эпидемиология и Инфекционные болезни. Актуальные вопросы №3 / 2012
Разработка тест-системы для определения РНК вируса Кемерово в формате ПЦР в режиме реального времени
ФБУН Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва; ФГБУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН, Москва; ФГБУ НИИ медицины труда РАМН, Москва
Цель исследования. Разработка тест-системы в формате ПЦР в реальном времени для определения РНК вируса Кемерово в различных типах исследуемого материала.
Материалы и методы. В качестве мишени выбран фрагмент нуклеотидной последовательности гена полимеразы. Для детекции разработан зонд типа TaqMan.
Результаты. Впервые разработана тест-система в формате ПЦР в режиме реального времени для определения РНК вируса Кемерово.
Заключение. С помощью разработанной тест-системы планируется определение базовых эпидемиологических характеристик вируса Кемерово на территории РФ.
Вирус Кемерово впервые выделен в 1962 г. из клещей Ixodes рersulcatus и ликвора больного человека в ходе экспедиции в Кемеровскую область под руководством акад. М. П. Чумакова. В процессе изучения вируса было установлено его отличие от вируса клещевого энцефалита, в напряженном очаге которого был обнаружен новый инфекционный агент. Затем была доказана его антигенная самостоятельность. По предложению М. П. Чумакова новый вирус был назван вирусом Кемерово [1].
Вирус Кемерово является представителем семейства Reoveridae рода Orbivirus. Геном представлен двухнитевой РНК, состоящей из 10 сегментов размером от 700 до 4000 пар оснований. Общий размер генома составляет 20 000 пар оснований.
По существующим представлениям лихорадка, вызываемая вирусом Кемерово, считается природноочаговой инфекцией с трансмиссивным механизмом передачи и отнесена ко II группе патогенности. [2]. Резервуаром вируса в природе являются птицы, переносчиком – иксодовые клещи. Естественная восприимчивость людей к вирусу высокая, после заболевания остается гуморальный, преимущественно типоспецифический иммунитет. Клиническая картина кемеровской лихорадки развивается через 4–5 дней после присасывания зараженного клеща. Дебют заболевания протекает остро, с подъемом температуры до 39–40 ˚С. Отмечается инъекция склер и конъюнктивы, появление пятнисто-папулезной либо мелкоточечной сыпи. Возможно развитие миокардита и менингоэнцефалита. Заболевание кемеровской лихорадкой регистрировали на территории Западной Сибири. Для лабораторной диагностики использовали методы РЕК (реакция связывания комплемента), РТГ (реакция торможения гемагглютинации), РН (реакция нейтрализации) в парных сыворотках, взятых в первые дни и на 2–4-й неделе. В настоящее время диагностика кемеровской лихорадки не проводится, так как инфекция перешла в разряд «забытых». ПЦР и ИФА-диагностикумы не разработаны.
Несмотря на то что вирус Кемерово был открыт 50 лет назад, до сих пор не описаны его базовые эпидемиологические характеристики. Остается открытым вопрос о возможном вкладе кемеровской лихорадки в структуру заболеваемости лихорадками неясного генеза после присасывания клеща.
Для изучения распространенности вируса Кемерово на территории РФ нами впервые была разработана тест-система в формате ПЦР в режиме реального времени, позволяющая выявлять РНК вируса как в полевом, так и в клиническом материале. В состав тест-систем...
