Разработка тканеинженерной конструкции на основе декстраномера и гиалуроновой кислоты для лечения стрессового недержания мочи у женщин

Цель исследования. Разработка тканеинженерной конструкции для лечения стрессового недержания мочи у женщин на основе стромальных клеток и объемобразующего препарата, состоящего из декстраномера и гиалуроновой кислоты в качестве носителя.
Материал и методы. Мультипотентные стромальные клетки (МСК) выделяли из жировой ткани или вартонова студня человека путем ферментативной обработки. Для оценки стабильности объемобразующий препарат смешивали с культуральной средой и инкубировали в течение 7 суток при 37°С или 6 месяцев при 4°С. Цитотоксичность объемобразующего препарата оценивали с помощью МТТ-теста. Для соединения компонентов тканеинженерной конструкции МСК в концентрации 5 млн клеток в 1 мл смешивали с равным объемом препарата и помещали в стандартную культуральную посуду или в посуду с низкими адгезивными свойствами. Для оценки выживаемости клеток в условиях, имитирующих трансплантацию, конструкцию пропускали через иглу 20G.
Результаты. Выделенные из жировой ткани или пупочного канатика человека клеточные культуры имели характерный для МСК иммунофенотип и отвечали на действие индукторов дифференцировки. Носитель оставался стабилен в течение 7 суток инкубирования в культуральной среде при 37°С. При инкубации в течение 6 месяцев наблюдали отдельные очаги резорбции гиалуроной кислоты, но не декстрановых гранул. МТТ-тест показал отсутствие цитотоксичности исследуемого препарата по отношению к МСК человека. Соединение компонентов конструкции в посуде с низкими адгезивными свойствами оказалось более эффективно, чем при использовании стандартной культуральной посуды. На одной единице носителя через 2 суток располагалось 17±8 клеток. Более длительное культивирование приводило к образованию клеточных конгломератов. Пропускание отмытой от культуральной среды суспензии объемобразующего препарата с адгезированными клетками через иглу 20G не приводило к гибели клеток.
Заключение. Полученные нами данные подтверждают возможность использования исследуемого объемобразующего препарата в качестве инъекционного микроносителя для тканевой инженерии.

Работа выполнена при финансировании Министерством образования и науки Российской Федерации в рамках федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009 – 2013 гг. (соглашение № 8068).

Недержание мочи у женщин является одной из самых частых и до конца не решенных проблем современной урогинекологии. Данное заболевание значительно ухудшает качество жизни пациентов, зачастую приводя к социальной дезадаптации. По данным эпидемиологических исследований распространенность недержания мочи у женщин значительна: проблемы с удержанием мочи испытывают до 25% молодых женщин, от 44 до 57% женщин в постменопаузе и до 75% женщин старшего возрастной группы [1]. Поиск новых методов лечения стрессового недержания мочи (наиболее распространенной формы) не прекращается: на сегодняшний день зарегистрировано 189 клинических исследований в этой области [2]. Наряду с консервативным подходом применяется также хирургическое лечение – слинговые операции («поддерживание» уретры с помощью петли из синтетических материалов). Вторым по распространенности хирургическим методом лечения стрессового недержания мочи является введение объемобразующих препаратов (табл. 1), который в силу своей малой инвазивности обладает рядом преимуществ: меньший риск инфицирования и формирования рубцов, лучшая переносимость пациенткой, более доступная цена. В то же время вышеописанные хирургические методы лечения недержания мочи не всегда эффективны и могут требовать проведения повторных вмешательств [3, 4].

Новейшим направлением в лечении стрессового недержания мочи можно считать применение клеточных технологий. В экспериментальных исследованиях продемонстрирована высокая эффективность трансплантации клеток в периуретральную область на модели стрессового недержания мочи лабораторных животных [5, 6]. Зарегистрировано 8 подобных клинических исследований, касающихся изучения безопасности и эффективности введения скелетных миобластов или мультипотентных стромальных клеток (МСК) [2]. Предварительные результаты этих исследований свидетельствуют о безопасности и эффективности данных подходов [7, 8].

Следующим этапом развития этих технологий, несомненно, должно стать введение не суспензионных клеточных культур, а тканеинженерных конструкций, которые могут обеспечить более высокую выживаемость клеточного компонента и его иммобилизацию в области введения [9]. Оптимальной с этой точки зрения представляется комбинация объемобразующего препарата и стромальных клеток. Выбор носителя может быть обусловлен его максимальным приближением к микроносителям, которые широко применяют для масштабирования клеточных культур. Сравнительная характеристика наиболее часто применяемых клеточными технологами микроносителей приведена в табл. 2.

Как видно из табл. 1 и 2, наибольшим сходством обладают объемобразующий препарат уродекс (Биополимер, Германия) и универсальный микроноситель Cytodex 1™. Обращает на себя внимание меньший диаметр декстрановых гранул в уродексе (80–120 мкм) и наличие в нем гиалуроновой кислоты в качестве несущего геля. Однако в литературе представлены данные о возможности выживания стромальных клеток на поверхности декстрановых гранул диаметром 80 мкм в присутствии гиалуроновой кислоты по меньшей мере в течение 12 часов [10]. Возникает также вопрос о влиянии диэтиламиноэтил-декстраномера (DEAE-декстраномера) в качестве подложки на свойства клеточного компонента конструкции. В недавно опубликованной работе было продемонстрировано,...

Арутюнян И.В., Фатхудинов Т.Х., Макаров А.В., Тетерина Т.А., Кананыхина Е.Ю., Ельчанинов А.В., Ким А.А., Васюкова О.А., Кириенко Е.Е., Раимова Э.Ш., Павлович С.В., Аполихина И.А., Сухих Г.Т.