Акушерство и Гинекология №11 / 2013
Роль метода ПЦР в диагностике врожденных и нозокомиальных инфекций у новорожденных
ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России, Москва
Идентификация инфекционного агента является ключевым фактором в определении тактики проведения антибактериальной терапии, однако длительность микробиологического исследования приводит к запаздыванию старта этио-патогенетической терапии, выбору неоптимальной схемы лечения. Использование молекулярно-генетической идентификации микроорганизмов позволяет получить результат в течение нескольких часов.
Цель исследования. Определение роли и клинической значимости метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени в диагностике врожденных и нозокомиальных инфекций в периоде новорожденности.
Материал и методы. В работе проведено сравнение микробиологического и молекулярно-генетического методов идентификации микробных агентов в условиях отделения реанимации и интенсивной терапии новорожденных.
Результаты исследования. На основании 272 параллельно выполненных исследований показана высокая конкордантность использованных методов. При этом с помощью ПЦР результаты были получены врачами в 4 раза быстрее, чем идентификация чистой культуры при микробиологическом исследовании (предварительные посевы без определения чувствительности к антибиотикам) и в 8 раз быстрее, чем окончательные результаты микробиологического исследования.
Заключение. Метод ПЦР-диагностики является высокоточным, быстрым и может быть рекомендован для рутинной практики при совместном его использовании с традиционным микробиологическим методом при осуществлении инфекционного контроля в отделениях неонатологического профиля.
Работа частично поддержана Государственным контрактом Министерства образования и науки РФ №16.522.12.2009 от 29.09.2011.
Одним из приоритетных направлений в современной неонатологии является выхаживание недоношенных детей с очень низкой (ОНМТ) и экстремально низкой массой тела (ЭНМТ) при рождении. Данный контингент больных находится в зоне максимального риска по развитию нозокомиальных инфекций. C одной стороны, это связано с незавершенностью процессов формирования иммунного ответа у глубоко недоношенных детей, необходимостью длительного применения различных видов респираторной поддержки, постановки центральных сосудистых катетеров, осуществления большого числа заборов крови и других инвазивных процедур, с другой стороны, с особенностями госпитальной флоры, вносящей существенный вклад в реализацию нозокомиальных инфекций у новорожденных[1].
Возбудителями госпитальных инфекций являются условно-патогенные микроорганизмы (УПМ). Они широко распространены, устойчивы во внешней среде, а также обладают способностью к образованию биопленок [2]. В процессе антимикробной терапии условно-патогенные микроорганизмы приобретают резистентность к применяемым антибактериальным препаратам. Существенное значение в реализации инфекционных процессов среди пациентов реанимационных отделений придается группе так называемых ESKAPE-патогенов, к которым относятся Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumanii, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter spp. [3].
Не вызывает сомнений также тот факт, что идентификация инфекционного агента является ключевым фактором в определении тактики проведения целенаправленной антибактериальной терапии или, напротив, ее отмены в случае отсутствия возбудителя.
Таким образом, именно с целью слежения за циркулирующей госпитальной микрофлорой, а также для обеспечения своевременной и быстрой идентификации возможных возбудителей врожденных и нозокомиальных инфекций в отделении реанимации и интенсивной терапии новорожденных (ОРИТН) ФГБУ НЦАГиП им. В.И. Кулакова уже в течение 20 лет ведется регулярный микробиологический мониторинг, включающий выполнение дважды в неделю новорожденным посевов со слизистых оболочек (кал, зев), начиная с рождения. При наличии показаний дополнительно проводятся посевы отделяемого из трахеи, крови, мочи, ликвора, асцитической и плевральной жидкостей, отделяемого пупочной ранки, поврежденной кожи, конъюнктивы и других локусов.
Знание особенностей ESKAPE-патогенов и других УПМ, циркулирующих в реанимационном отделении, позволяет своевременно реагировать на клинически выраженное ухудшение состояния пациентов и назначать адекватную антибактериальную терапию [4, 5].
Основанием для исследования посевов материала из нестерильных локусов является широко известный феномен транслокации УПМ со слизистых оболочек в кровь и во внутренние органы [6–8] и наличие возможной причинно-следственной связи между патогенной флорой, контаминирующей ребенка, и инфекционным процессом.
В различных учреждениях в зависимости от уровня оснащенности микробиологических лабораторий результаты выполненных посевов могут быть получены в интервале от 3 до 10 дней. Позднее получение результатов микробиологических исследований приводит к запаздыванию старта этио-патогенетической антибактериальной терапии, к выбору неоптимальной схемы антибактериальной терапии, неоправданно широкому применению антибиотиков резерва, что, в свою очередь, в дальнейшем приводит к нарастанию мультирезистентности микроорганизмов [4, 7].
Наряду с традиционным выделением возбудителей микробиологическими методами в последние годы все большую актуальность приобретает использование молекулярно-генетических методов для более быстрой идентификации патогенов, способных вызывать течение инфекционного процесса у новорожденных, в том числе недоношенных детей с ЭНМТ и ОНМТ, находящихся в условиях отделения реанимации. Проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени позволяет идентифицировать возбудителя в биологическом материале в течение нескольких часов [9–12]. Вместе с тем, в силу относительной новизны методики, а также изменчивости микробного пейзажа стационаров, роль и клиническая...
