Сравнение методов выявления биопленочного синдрома при бактериальном вагинозе

При бактериальном вагинозе Gardnerella vaginalis и Fannyhessea vaginae образуют высокоструктурированные плотные биопленочные консорциумы. Ключевые клетки являются маркерами биопленочной организации бактериальных сообществ. 
Цель: Сравнить микробиологические методы выявления биопленочного синдрома при бактериальном вагинозе.
Материалы и методы: Обследованы 28 женщин с жалобами на вагинальные выделения. Клиническим материалом служило отделяемое влагалища. Использовали метод микроскопии препаратов с окраской по Граму и метиленовым синим, а также метод флуоресцентной гибридизации in situ (FISH или РиГинаМ). Для молекулярного исследования использовали тест «Фемофлор». 
Результаты: Диагноз бактериального вагиноза при исследовании по Нудженту установлен у 89,3% (25/28) женщин. Как при микроскопической оценке микробиоценоза влагалища с использованием анилиновых красителей, так и при оценке методом РиГинаМ получены одинаковые результаты (отношение Л:Э менее 4:1, обнаружены ключевые клетки). Лишь в трех случаях всеми методами ключевые клетки не были обнаружены. У 25 пациенток с диагностированным бактериальным вагинозом тестом «Фемофлор» во всех клинических материалах были обнаружены G. vaginalis со средним логарифмом 7,55, в 22 случаях были обнаружены F. vaginae. В трех случаях физиологического микробиоценоза влагалища общая бактериальная масса была в основном представлена лактобациллами. У этих женщин обнаружены G. vaginalis, но общая бактериальная масса их была низкой (3,6; 4,1 и 
6,8 lg), F. vaginae обнаружена лишь в одном случае (2,1 lg). 
Заключение: Ключевые клетки как маркер биопленочного бактериального вагиноза выявляются как при окраске препаратов по Граму, метиленовым синим, так и методом РиГинаМ. Микроскопический метод с окраской анилиновыми красителями не дифференцирует виды бактерий, входящих в состав ключевой клетки; для метода РиГинаМ необходимы специфические зонды, позволяющие определить вид микроорганизма. Метод мультиплексной ПЦР в режиме реального времени может быть использован для диагностики бактериального вагиноза в сочетании с методами микроскопии.

Вклад авторов: Шалепо К.В. – методология, дизайн и координация исследования, написание и редактирование рукописи; Спасибова Е.В. – методология, дизайн и координация исследования; Сторожева К.В. – проведение исследования, участие в подготовке рукописи и редактирование рукописи; Хуснутдинова Т.А., Будиловская О.В., Крысанова А.А. – участие в подготовке рукописи и редактирование рукописи; Тапильская Н.И., Савичева А.М. – концепция и координация исследования, редактирование рукописи, утверждение окончательного варианта статьи; Коган И.Ю. – концепция исследования. Все авторы внесли существенный вклад в проведение поисково-аналитической работы и подготовку статьи, прочли и одобрили финальную версию до публикации. 
Конфликт интересов: Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.
Финансирование: Исследование выполнено в рамках научной темы ФНИ «Универсальные и специфические механизмы реализации и нарушений репродуктивной функции в семье», рег. №1021062812133-0-3.2.2.
Одобрение этического комитета: Исследование одобрено локальным этическим комитетом 
«ФГБНУ НИИ АГиР им. Д.О. Отта», протокол №141 от 04.03.2025 г.
Согласие пациентов на публикацию: Пациентки подписали информированное согласие на публикацию своих данных и изображений.
Обмен исследовательскими данными: Данные, подтверждающие выводы этого исследования, доступны по запросу 
у автора, ответственного за переписку, после одобрения ведущим исследователем.
Для цитирования: Шалепо К.В., Спасибова Е.В., Крысанова А.А., Хуснутдинова Т.А., Будиловская О.В., Сторожева К.В., Тапильская Н.И., Савичева А.М., Коган И.Ю. 
Сравнение методов выявления биопленочного синдрома при бактериальном вагинозе.
Акушерство и гинекология. 2025; 7: 121-129
https://dx.doi.org/10.18565/aig.2025.117

Бактериальный вагиноз (БВ) – это невоспалительный биопленочный полимикробный синдром, при котором микрофлора влагалища, представленная преимущественно лактобациллами, полностью или частично замещается высокими концентрациями другой, главным образом анаэробной, микрофлоры. БВ встречается в разных регионах мира с частотой 23–29% [1].

Бессимптомное течение БВ имеет место у 5–25% женщин. В среднем рецидив БВ развивается примерно у 30% женщин в течение первых трех месяцев и у 80% пациенток – в течение 9 месяцев после лечения [1]. БВ повышает восприимчивость к возбудителям инфекций, передаваемых половым путем, таких как вирус иммунодефицита человека, Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis, вирус папилломы человека и вирус простого герпеса [2]. БВ во время беременности повышает риск выкидыша, преждевременного разрыва плодных оболочек, преждевременных родов, хориоамнионита и послеродовых инфекций. Скрининг и лечение БВ рекомендуется беременным женщинам с повышенным риском преждевременных родов между 12 и 16 неделями, даже если он протекает бессимптомно [3].

Лабораторная диагностика играет существенную роль в раннем выявлении заболеваний и контроле эффективности терапии.

С момента публикации рекомендаций CDC по лечению инфекций, передаваемых половым путем, 2015 г. [4] для диагностики БВ используют: критерии Amsel с микроскопией нативных препаратов; критерии Hallen, Ison–Hay, Nugent при оценке препаратов, окрашенных по Граму [5]; тест для определения активности сиалидазы влагалища; тест для определения побочных продуктов метаболизма G. vaginalis и тест с олигонуклеотидными зондами, обнаруживающими высокие концентрации G. vaginalis (более 5×105 КОЕ/мл вагинальной жидкости). Чувствительность и специфичность этих тестов были недавно обобщены Coleman J.S. et al. [6]. В настоящее время для диагностики БВ используют коммерческие тесты, основанные на амплификации нуклеиновых кислот, которые обладают высокой чувствительностью и специфичностью. Они основаны на обнаружении специфических бактериальных нуклеиновых кислот с высокой чувствительностью и специфичностью (G. vaginalis, A. vaginae, BVAB2, Megasphaera spp. и др.), а также определенных видов лактобацилл, таких как L. crispatus, L. jensenii и L. gasseri [2].

Главным условием лабораторной диагностики является использование быстрого, точного и легко воспроизводимого метода с высокой чувствительностью и специфичностью. Методы микроскопии – быстрые и дешевые, сочетающие прямую визуализацию и ориентировочную характеристику бактерий на основе строения их клеточной стенки, а также позволяющие оценить клеточный состав вагинального биотопа и лейкоцитарную реакцию. Прогресс в области клинической микробиологии привел к появлению молекулярных методов, таких как полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени, причем в мультиплексном исполнении. Сочетание микроскопического и молекулярно-биологического метода позволяет с высокой долей вероятности установить диагноз вагинальной инфекции.

Повышенный интерес исследователей в настоящее время вызывают бактериальные пленки, которые формируют разные бактерии, колонизирующие влагалище как в норме, так и при заболеваниях, особенно при рецидивирующих формах БВ.

При физиологическом микробиоценозе комменсальные виды Lactobacillus представляют собой слабо прикрепленные конгломераты, которые являются биопленками агрегатного типа; их можно обнаружить в вагинальных образцах женщин без клинических симптомов [7]. При БВ образуются плотные биопленки, которые в основном состоят из Gardnerella vaginalis и Fannyhessea vaginae и прочно адгезируются на эпителиальные клетки влагалища [7, 8].

Следует отметить, что разнообразие вагинальной микрофлоры при БВ было описано Schröder в 1921 г. [9]. В 1955 г. Gardner H.L., Dukes C.D. описали клетки плоского эпителия, покрытые слоем вагинальных микроорганизмов, и назвали их «ключевыми клетками» за их центральную роль в диагностике состояния, названного БВ. У здоровых женщин эти клетки отсутствовали [10]. Именно эти клетки и считаются частью бактериальной пленки влагалища. Появление новых видов гарднерелл [11] и обнаружение их у здоровых женщин побудило исследователей провести поиск новых диагностических тестов, способных определить значимость этих видов в развитии заболевания, а особенно в развитии рецидивирующих форм БВ. Гущиным А.Е. были разработаны молекулярные тесты для выявления разных генотипов гарднерелл, которые далее были выделены в отдельные виды. В исследовании Крысановой А.А. и соавт. (2021) впервые было показано, что выявление одновременно нескольких гентотипов G. vaginalis свидетельствует о рецидивирующем БВ и это, скорее всего, биопленочный тип БВ [12].

Исследования Swidsinski A. (2010) показали, что G. vaginalis может существовать в виде дву...

Шалепо К.В., Спасибова Е.В., Крысанова А.А., Хуснутдинова Т.А., Будиловская О.В., Сторожева К.В., Тапильская Н.И., Савичева А.М., Коган И.Ю.