Тромбоцитарно-лейкоцитарные агрегаты циркулирующей крови как ранний индикатор рецидива хронического обструктивного пиелонефрита

Цель исследования. Оценить реактивность тромбоцитов (Тц) к фактору активации тромбоцитов (ФАТ), а также их возможности к формированию тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов (ТЛА) на фоне применения нестероидных противовоспалительных препаратов и антибиотиков пациентами с хроническим обструктивным пиелонефритом (ХОПН).
Материал и методы. В исследование включены 43 пациента, из которых 26 находились в фазе ремиссии ХОПН и 17 больных в фазе рецидива заболевания. Тромбоциты выделяли путем центрифугирования из цитратной периферической крови. Оценку агрегации Тц проводили на агрегометре ChronoLog (USA) при их стимуляции ФАТ в концентрации ЕС50. Количество ТЛА оценивали после окраски мазков крови по методу Романовского–Гимзе.
Результаты. В фазу рецидива ХОПН выявлена высокая остаточная реактивность Тц к ФАТ. При этом в фазе рецидива заболевания Тц формируют больше ТЛА, в составе которых доминировали нейтрофилы и моноциты. Для фазы ремиссии ХОПН характерна вариабельность реактивности Тц на ФАТ, отражающая особенности реализации хронической воспалительной реакции. У 10 (38,5%) больных в фазе ремиссии ХОПН, отличающихся более высокой остаточной реактивностью Тц, стимулирующий эффект ФАТ проявлялся увеличением количества тромбоцитарно-нейтрофильных и тромбоцитарно-моноцитарных агрегатов, тогда как у 16 (61,5%) пациентов с низкой остаточной реактивностью – повышением численности тромбоцитарно-лимфоцитарных агрегатов.
Заключение. Увеличение количества агрегатов, обеспечивающих рекрутирование нейтрофилов и моноцитов в очаг воспаления при ремиссии ХОПН, может быть предиктором перехода хронического воспаления в острую фазу.

Введение

Недостаточное понимание конкретных механизмов инициации воспалительной реакции при хроническом обструктивном пиелонефрите (ХОПН), принципов формирования межклеточной кооперации, поддерживающей и ограничивающей воспаление, сложности прогнозирования альтерации и репарации тканей почки ограничивает возможности ранней диагностики и лечения рецидива заболевания [1]. Взаимодействие между клетками крови в виде клеточных агрегатов наблюдается при различных физиологических и патологических состояниях, сопровождаются морфологическими и функциональными изменениями тромбоцитов (Тц) и лейкоцитов [2]. Характеристики тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов (ТЛА) циркулирующей крови продолжают обсуждаться в контексте поиска информативных маркеров развития воспаления [3], что позволило бы приблизиться к возможности ограничения развития воспалительной реакции на самых ранних этапах. Одним из подходов к решению данной проблемы является анализ реактивности Тц in vitro, поскольку последние вовлечены не только в реализацию гемостаза, но и в инициацию, прогрессирование и лимитирование воспалительного процесса [4].Тем не менее вопросы, каким образом оценить провоспалительную активность Тц и можно ли использовать в качестве индикатораТЛА для оценки динамики воспаления при ХОПН, остаются открытыми. В этом контексте представляет интерес фактор активации тромбоцитов (ФАТ), который секретируется активированными лейкоцитами и считается паракринным стимулятором Тц при воспалении [5].

Известно, что ФАТ обеспечивает взаимодействие нейтрофилов (Нф) и Тц в реализации воспаления [6]. Однако остается малоизученной роль ФАТ в формировании ТЛА при развитии воспаления. Исследование взаимодействия клеток крови могло бы пролить свет на механизмы перехода фазы ремиссии в фазу рецидива ХОПН.

Цель исследования – оценить in vitro реактивность тромбоцитов к ФАТ и их возможности к формированию тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов на фоне применения нестероидных противовоспалительных препаратов и антибиотиков у пациентов с хроническим обструктивным пиелонефритом.

Материал и методы

В исследование включены 43 пациента с хроническим обструктивным пиелонефритом, который был верифицирован на основании жалоб больных, анамнеза заболевания, объективного осмотра, результатов клинико-лабораторных и инструментальных исследований. В фазе ремиссии ХОПН обследованы 26 больных, в фазе рецидива – 17. Пациенты в фазе ремиссии ХОПН принимали нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) и антибиотики в стандартной дозе не менее 5–10 дней до момента госпитализации, связанной с необходимостью проведения литотрипсии. Пациентам в фазе рецидива ХОПН назначали стандартную противовоспалительную терапию и исследования проводили через 5–10 дней. Из цитратной периферической крови пациентов Тц выделяли путем центрифугирования. Для анализа реактивности Тц использовали ФАТ в концентрации ЕС50 (150 мкМ), воспроизводящей у здоровых лиц амплитуду агрегации на уровне 50±5%. Оценку агрегации тромбоцитов (АТц) проводили на агрегометре ChronoLog (USA). Формирование ТЛА моделировали in vitro в условиях инкубации ФАТ-стимулированных тромбоцитов с интактными лейкоцитами. Количество интактных и стимулированных ТЛА оценивали после окраски мазков крови по методу Романовского–Гимзе. Учитывали следующие параметры: количество ТЛА (на 100 лейкоцитов); состав лейкоцитов, вовлеченных в формирование агрегатов (на 100 лейкоцитов); соотношение основных типов агрегатов: тромбоцитарно-нейтрофильных (ТНфА), тромбоцитарно-моноцитарных (ТМА) и тромбоцитарно-лимфоцитарных агрегатов (ТЛфА). Все клинические исследования выполнены по согласованию с комиссией по биоэтике Донецкого национального медицинского университета им. М. Горького. Статистическую обработку результатов проводили в пакетах MedStat и MedCalc. Достоверность полученных результ...

Э.Ф. Баринов, Х.В. Григорян, А.О. Балыкина, Т.И. Фабер