Терапия №6 / 2018

Взаимосвязь содержания регуляторов пролиферации и апоптоза с активностью протеинкиназы р38 в мононуклеарных клетках периферической крови у реконвалесцентов внебольничной пневмонии

12 ноября 2018

1 ФГБОУ ВО «Тульский государственный университет», Россия, Тула;
2 ФГБОУ ВО «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова» Минздрава России, Санкт-Петербург

Исследованы молекулярные показатели, отражающие состояние стресс-лимитирующих систем мононуклеарных лейкоцитов (МНК) цельной крови у пациентов, перенесших внебольничную пневмонию (ВБ). Цель исследования. Изучение характера зависимости между уровнем фосфорилирования терминальной протеинкиназы р38, отражающей состояние сигнального пути, и содержанием в клетке компонентов, регулирующих процессы пролиферации, дифференцировки и клеточной гибели у реконвалесцентов ВБ. Материал и методы. Обследованы 30 пациентов мужского пола с бактериальной ВБ нетяжелого течения на 15–17-е сутки заболевания, перед выпиской из стационара. Контрольную группу составили 15 практически здоровых молодых лиц из числа доноров крови. В работе оценивалось содержание в клетках компонентов MAPK/SAPK и JAK/STAT сигнальных путей, содержание протеина р53 и цитохрома С. Также в клеточных супернатантах исследовали уровень молекул, контролирующих апоптоз и пролиферацию, членов семейства фактора некроза опухоли альфа (растворимых форм рецепторов DR5 и DcR3, лигандов TRAIL, TWEAK, BAFF, LIGHT), а также концентрацию антиоксидантов. Уровень этих показателей исследовали в зависимости от активности протеинкиназы р38, оцениваемой по уровню ее фосфорилирования. Результаты. У пациентов, перенесших ВП на фоне возрастания уровня протеинкиназы р38, отмечено повышение содержания в МНК протеина р53, а также усиление фосфорилирования ингибитора фактора транскрипции NF-κB. Также выявлено статистически значимое повышение уровня фосфорилирования белка RB, растворимой формы DR5, TRAIL и BAFF. Указанные изменения сопровождались снижением уровня фосфорилирования JAK2, STAT3 и CREB, а также концентрации TWEAK, LIGHT и цитохрома С. Значимых изменений содержания DcR3, STAT5A и АОС в группах с различной активностью р38 выявлено не было. Проведенный линейный регрессионный анализ выявил статистически значимую положительную взаимосвязь активности р38 с уровнем фосфорилирования белка ретинобластомы, STAT3, IκB, JNK и отрицательную с уровнем фосфорилирования JAK2. Заключение. Активность MAPK/SAPK-сигнального пути в МНК реконвалесцентов ВП находится в антагонистичных отношениях к JAK/STAT-сигнальному пути, ослабляя его активность со снижением чувствительности клеток к соответствующим цитокинам. При этом повышение фосфорилирования р38 ассоциировано с повышением фосфорилирования IκB, определяя транскрипцию генов, контролирующих апоптоз, пролиферацию и клеточную дифференцировку. Повышение экспрессии гена BAFF и усиление продукции цитокинов способствует активации В-лимфоцитов, при этом секреция TRAIL усиливает апоптоз чувствительных клеток. Таким образом, активация р38 в МНК может способствовать повышению резистентности организма и противоопухолевой защиты. Проапоптотическая функция р38 может реализовываться за счет стимуляции продукции р53, экспрессии на клетках DR5 и продукции ими TRAIL, тогда как пролиферация и дифференцировка В-лимфоцитов может быть усилена через стимуляцию продукции BAFF, что, очевидно, определяется ее влиянием на ядерную транскрипцию через модуляцию функциональной активности IκB.

Митоген-активируемый/стресс-активи­руемый (MAPK/SAPK) молекулярный каскад играет важную роль в обеспечении реактивности иммунокомпетентных клеток (ИКК) к разнообразным внешним стимулам и запуске ответа острой фазы (ООФ). При этом реализация клеточных реакций в рамках ООФ проявляется активацией клеток, усилением продукции ими активных форм кислорода (АФК), антимикробных пептидов, а также цитокинов [1]. Синтезируемые в рамках ООФ цитокины, связываясь с соответствующими цитоплазматическими рецепторами и воздействуя через сигнальные пути, среди которых JAK/STAT-сигнальный путь, инициируют воспалительный ответ, служащий важнейшей стадией процесса саногенеза.

При этом инициация ООФ требует активации транскрипционных факторов NF-κB и АР-1, что обеспечивается протеинкиназами JNK и p38 [2, 3]. Вместе с тем в отдельных случаях стимуляция сигнального пути сопровождается инициацией процесса апоптоза, вызываемого отдельными цитокинами, входящими в семейство фактора некроза опухоли (ФНО), в частности ФНОα, TRAIL, TWEAK, BAFF и др. Продукция цитотоксическими Т-лимфоцитами и NK-клетками, отдельных представителей цитокинов семейства ФНО, определяет противоопухолевую резистентность организма [3, 4]. Вместе с тем в зависимости от конкретных условий данные факторы могут стимулировать клеточную пролиферацию и дифференцировку, способствовать опухолевому росту. При этом влияние данных факторов на процессы пролиферации находится под контролем внутриклеточных механизмов, эффекторами которых являются протеины р53 и белок ретинобластомы (RB), предупреждающие избыточную активацию данных процессов [5].

Таким образом, MAPK/SAPK-сигнальный путь играет важную роль в первичном клеточном ответе на внешние стимулы, от активности которого зависит дальнейшая судьба клетки и ее жизненный цикл. В связи с этим представляет интерес исследование зависимости между ключевыми молекулярными механизмами в зависимости от активности MAPK/SAPK-сигнального пути.

На основании вышеизложенного целью настоящего исследования стало изучение характера зависимости между уровнем фосфорилирования терминальной протеинкиназы р38, отражающей состояние сигнального пути и содержание в клетке компонентов, регулирующих процессы пролиферации, дифференцировки и клеточной гибели у реконвалесцентов внебольничной пневмонии (ВП).

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

В соответствии с целью настоящей работы обследованы 30 пациентов мужского пола с бактериальной ВП нетяжелого течения на 15–17-е сутки заболевания, перед выпиской из стационара. Средний возраст обследованных пациентов основной группы составил 25±5,5 лет. Контрольную группу составили 15 практически здоровых молодых лиц из числа доноров крови в возрасте от 20 до 33 лет (средний возраст 26±4,3 года).

Материалом для исследования служила венозная кровь, забиравшаяся в утренние часы из локтевой вены обследуемых лиц. Для проведения исследования внутриклеточных маркеров 1 мл цельной крови вносили во флакон, содержащий 4 мл среды DMEM, гепарин (2,5 ЕД/мл), гентамицин (100 мкг/мл) и L-глютамин (0,6 мг/мл). Подготовленные таким образом образцы помещались на 3 и 24 ч в термостат при 37 °C с последующим выделением на градиенте фиколл-верографина (ρ=1,077) мононуклеарных лейкоцитов (МНК) и приготовлением лизатов, для чего использовали 1 мл клеточной суспензии содержащей 0,5×106 МНК [6]. Выделенные таким образом МНК дважды отмывали в фосфатно-солевом буфере, после чего лизировали, используя б...

С.С. Бондарь, О.В. Гук, И.В. Терехов, В.С. Никифоров
Статья платная, чтобы прочесть ее полностью, вам необходимо произвести покупку
Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.