Особенности популяции макрофагальных клеток у женщин с бесплодием

Бесплодие остается актуальной медицинской и социальной проблемой, охватывая значительную часть репродуктивного населения. Одним из факторов, влияющих на исход экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), является состояние иммунного микроокружения и фенотипическая пластичность макрофагов, участвующих в регуляции воспаления, имплантации и раннего эмбрионального развития.
Цель. Изучение фенотипических характеристик индуцированных in vitro макрофагов периферической крови у женщин с бесплодием, их реактивности на поляризующие стимулы (LPS, IL-4), а также оценка ассоциации с качеством эмбрионов в программе ЭКО.
Материалы и методы. В исследование включены пациентки с различными формами бесплодия, проходившие лечение методом ЭКО. Для моделирования макрофагальной активации использовались стимулы LPS и IL-4. Оценивались субпопуляции CD68+HLA-DR+CD80+/- и CD68+CD163+/-CD206+/- с помощью проточной цитометрии. Концентрация TNF-α в супернатантах клеточных культур определялась методом ИФА.
Результаты. Установлено, что низкое качество эмбрионов ассоциировано с преобладанием неполно активированных макрофагов CD68+HLA-DR+CD80-, тогда как высокое качество связано с увеличением классических М1 (CD68+HLA-DR+CD80+) и альтернативно активированных CD68+CD163-CD206+. Концентрация TNF-α достигала максимума после LPS-стимуляции, при этом наибольшие значения регистрировались у женщин с отличным качеством эмбрионов. Для ановуляторных форм бесплодия характерно статистически значимое повышение доли макрофагов CD68+HLA-DR-CD80+ по сравнению с другими группами. Корреляционный анализ подтвердил существование континуальности поляризации макрофагов, отражая баланс между зрелыми и незрелыми субпопуляциями.
Заключение. Фенотипическая структура и функциональная реактивность макрофагов тесно связаны с качеством эмбрионов при ЭКО. Выявленные особенности формируют иммунологический профиль, обладающий прогностическим потенциалом и перспективой для использования в персонализированных подходах к лечению бесплодия.

Вклад авторов. Меркулов Е.Д., Сваровский Д.А. – концепция и дизайн исследования, анализ и интерпретация данных; Спирина Л.В., Стахеева М.Н. – научное руководство, методологическое сопровождение, написание и редактирование статьи; Самойлова Ю.Г., Оккель Ю.В., Петров И.А. – клиническое сопровождение исследования, формирование групп пациенток, анализ клинических данных; Сулим В.В., Ульянова А.С. – экспериментальные исследования, ведение клеточных культур; Сидоренкова К.А., Прозорова А.В., Кубыкина М.И., Архипова Я.И. – сбор клинического и лабораторного материала, систематизация клинико-эмбриологических данных. Все авторы одобрили финальную версию статьи перед публикацией, выразили согласие нести ответственность за все аспекты работы, подразумевающую надлежащее изучение и решение вопросов, связанных с точностью или добросовестностью любой части работы.
Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с содержанием настоящей статьи.
Финансирование. Исследование выполнено при финансовом обеспечении Сибирского государственного медицинского университета МЗ РФ.
Одобрение Этического комитета. Исследование было одобрено этическим комитетом Сибирского государственного медицинского университета МЗ РФ (протокол № 8 от 18.01.2023).
Генеративный искусственный интеллект. При подготовке данной статьи технологии генеративного искусственного интеллекта не использовали.
Согласие пациентов на публикацию. Пациенты подписали информированное согласие на публикацию своих данных.
Обмен исследовательскими данными. Данные, подтверждающие выводы этого исследования, доступны по запросу у автора, ответственного за переписку, после одобрения ведущим исследователем.
Для цитирования: Меркулов Е.Д., Сваровский Д.А., Самойлова Ю.Г., Спирина Л.В., Стахеева М.Н., 
Оккель Ю.В., Cидоренкова К.А., Петров И.А., Прозорова А.В., Сулим В.В., Ульянова А.С., Кубыкина М.И., Архипова Я.И. Особенности популяции макрофагальных клеток у женщин с бесплодием.
Акушерство и гинекология. 2026; 7: 114-134
https://dx.doi.org/10.18565/aig.2025.291

Согласно отчету регистра вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) Российской Ассоциации Репродукции Человека за 2022 г., частота наступления беременности составила 26,4% на перенос эмбрионов в программах экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) [1]. Особое внимание в улучшении качества процедуры ЭКО уделяется иммунологическим аспектам бесплодия, в частности, роли врожденного иммунитета в процессах овуляции, оплодотворения и имплантации [2]. Макрофаги, будучи ключевыми эффекторными клетками врожденного иммунного ответа, активно участвуют в иммуномоделировании микросреды, необходимой для успешной имплантации и развития эмбриона, а их способность к пластичной смене поляризации в сторону провоспалительного М1-подобного или противовоспалительного М2-подобного фенотипа оказывает значимое влияние на реализацию репродуктивной функции [2].

В ряде исследований показано, что нарушение баланса между M1- и M2-макрофагами может ассоциироваться с такими патологиями, как эндометриоз, хронический эндометрит, невынашивание беременности и снижение эффективности программ ВРТ [3, 4]. При этом именно функциональное состояние и фенотип макрофагов периферической крови рассматриваются как отражение общего иммунного статуса организма, что открывает возможности для оценки прогноза эффективности ЭКО на доимплантационном этапе [5]. Активация макрофагов через толл-подобные рецепторы 4 типа (TLR4), например, при экспозиции к липополисахариду (LPS), приводит к продукции ими провоспалительных цитокинов, включая фактор некроза опухоли альфа (TNF-α) и интерлейкин (IL)-6, играющих неоднозначную роль – с одной стороны, они необходимы для инициации воспалительного ответа, с другой, – их избыток может нарушать процесс овуляции и снижать рецептивность эндометрия [6]. В то же время стимуляция IL-4 способствует поляризации в сторону M2-фенотипа, поддерживающего иммунную толерантность и создание благоприятной среды для имплантации [7].

На сегодняшний день иммунологическая оценка пациенток, проходящих процедуру ЭКО, в рутинной практике ограничивается определением циркулирующих цитокинов или субпопуляций иммунных клеток периферической крови (например, лимфоцитов и моноцитов), без анализа их функционального ответа на специфические стимулы in vitro [8]. В то же время моделирование активационного потенциала моноцитов и их поляризации в условиях in vitro (например, под действием LPS и IL-4) может предложить более точный подход к оценке репродуктивного прогноза.

Цель исследования заключалась в изучении фенотипических особенности пула моноцитов крови в ответ на поляризующие стимулы (IL-4 и LPS) у пациенток с бесплодием, проходящих процедуру ЭКО.

Материалы и методы

В исследование было включено 58 женщин, проходивших лечение на базе центра ВРТ ФГБОУ ВО «СибГМУ» Минздрава России г. Томска, средний возраст которых составил 36 (4,62) лет. Пациентами было подписано информированное согласие на участие в исследовании. Все исследования выполнялись в соответствии с правилами этического комитета СибГМУ и Хельсинской декларации. Было получено положительное заключение этического комитета на проведение исследования (протокол № 8 от 18.01.2023).

Пациентки были поделены на 4 группы по качеству и морфологии эмбрионов на 5-е сутки в соответствии с критериями, представленными в таблице 1 (по D. Gardner и W. Schoolcraft, 1999 [9]). Были сформированы 4 группы в зависимости от наличия конкретного фактора бесплодия по МКБ-10: первая группа – бесплодие, связанное с мужским фактором (n97.4); вторая группа – бесплодие трубного происхождения (n97.1); третья группа – женское бесплодие, связанное с отсутствием овуляции (n97.0), и четвертая группа – другие формы женского бесплодия (n97.8). Распределение по группам представлено в таблице 2. У всех пациенток были отобраны образцы периферической крови.

Выделение мононуклеаров

Венозную кровь брали в пробирки-вакутейнеры с К3 ЭДТА (Guangzhou Improve Medical Instruments Co. Ltd., Китай), утром натощак в количестве 12 мл у каждой пациентки перед пункцией фолликулов яичников. Кровь в соотношении 1:2 смешивали со средой для отмывки, включающей RPMI-1640 (ПанЭко, Россия). Полученную смесь в количестве 18 мл наслаивали на 9 мл фиколла (ρ=1,077 г/см3) (ПанЭко, Россия) и центрифугировали в течение 30 минут при 1500 об/мин при 24°С. Полученное интерфазное кольцо с мононуклеарными клетками аккуратно собирали в пробирку объемом 15 мл (Falcon, Biologix, Китай) с разведением до конечного объема раствором RPMI-1640. Затем проводили двойную отмывку со средой для отмывки в течение 12 минут при 1000 об/мин, 24°С. Полученные мононуклеарные клетки после отмывки доводили до концентрации 2×106 клеток на миллилитр культуральной средой (среда DMEM, L-глютамин, пенициллин и стрептомицин, 10% термически инактивированная фетальная телячья сыворотка (ПанЭко, Россия)).

Индукция моноцитов...

Меркулов Е.Д., Сваровский Д.А., Самойлова Ю.Г., Спирина Л.В., Стахеева М.Н., Оккель Ю.В., Cидоренкова К.А., Петров И.А., Прозорова А.В., Сулим В.В., Ульянова А.С., Кубыкина М.И., Архипова Я.И.