Анализ микробного профиля мокроты и содержания в ней цитокинов ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-10, ИФН-γ у больных внебольничной пневмонией в период пандемии COVID-19

Цель исследования. Анализ микробного профиля и уровня цитокинов: интерлейкина-4, -6, -10 (ИЛ-4, 6, -10) и интерферона-гамма (ИФН-γ) в образцах мокроты больных внебольничной пневмонией (ВП) в период пандемии COVID-19.
Материалы и методы. Больные ВП с положительными результатами полимеразной цепной реакции (ПЦР) мокроты на РНК нового коронавируса (SARS-CoV-2) вошли в 1-ю группу (n = 46), больные с отрицательными результатами – во 2-ю (n = 57). Проведены бактериологический и иммуноферментный анализы мокроты.
Результаты. В обеих группах встречались возбудители, принадлежащие к 3 родам: Streptococcus spp. в 1-й группе – 35,7 ± 2,0, во 2-й – 34,0 ± 2,2 (р > 0,05); Staphylococcus spp. – 24,5 ± 2,2 и 11,8 ± 4,3% (р < 0,05); дрожжеподобные грибы рода Candida – 47,0 ± 2,3 и 11,2 ± 1,3% (р < 0,05) соответственно. Анализ цитокинов в мокроте показал, что в образцах пациентов 1-й группы уровень ИФ-γ составил 89,58 ± 26,5 пг/мл, а 2-й – 121,07 ± 24,55 пг/мл (р > 0,05); ИЛ-10 – 22,11 ± 6,19 пг/мл и 13,64 ± 3,50 пг/мл соответственно (р > 0,05).
Заключение. В структуре микробиоты мокроты у пациентов с ВП в обеих группах преобладали Streptococcus и Staphylococcus, достоверно отличающиеся большой резистентностью к антибиотикам. Показана значимая роль дрожжеподобных грибов рода Candida в развитии ВП. При ВП выявлена гиперпродукция противовоспалительного ИФ-γ. Значительная разница показателей цитокинов в 1-й и 2-й группах отмечена для ИЛ-10 – 22,1 ± и 13,6 ± 3,5 пг/мл соответственно (р < 0,05).

Внебольничные пневмонии (ВП), несмотря на современные методы диагностики и лечения, продолжают оставаться значимой медико-социальной проблемой, поскольку занимают одно из ведущих мест в структуре заболеваемости и смертности пациентов от осложнений инфекционных заболеваний. Согласно данным ВОЗ, ежегодный показатель заболеваемости ВП в мире составляет 1000–1200 на 100 тыс. населения [1]. В Российской Федерации общее число больных ВП ежегодно превышает 1,5 млн чел. [2].

Ведущим этиологическим фактором ВП являются Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Staphylococcus aureus, Enterobacteriaceae spp. и др. [3]. К атипичным возбудителям ВП бактериальной природы относят Mycoplasma pneumoniae, Chlamydophila pneumoniae, Legionella pneumophila, Chlamydophila psittaci и Coxiella burnetii [4]. Значительное место в этиологии ВП занимают респираторные вирусы человека – вирусы гриппа, коронавирусы, риносинцитиальный вирус, метапневмовирус и бокавирус [5]. Ряд авторов предлагают рассматривать ВП как микст-инфекцию бактериально-вирусного генеза [6].

Особый вклад в эпидемиологию ВП внесла пандемия новой коронавирусной инфекции COVID-19, вызванная коронавирусом (SARS-CoV-2). Так, по данным Росздравнадзора, в 2021 г. число заболевших ВП в России повысилось на 258%, составив 2 722 292 чел. [7]. Существенная роль в патогенезе COVID-19 с развитием ВП отводится изменению цитокинового профиля крови на разных стадиях заболевания [8]. Однако исследований по изучению уровня цитокинов в мокроте у пациентов с ВП ранее не проводили.

Цель исследования – сравнительный анализ микробного профиля и уровня цитокинов: интерлейкина-4, -6, -10 (ИЛ-4, -6, -10) и интерферона-гамма (ИФН-γ) в образцах мокроты больных ВП в период пандемии COVID-19.

Материалы и методы

Исследование выполнено на базе Ростовского научно-исследовательского института микробиологии и паразитологии Роспотребнадзора.

Материалом для исследования послужили образцы мазков из носо/ротоглотки и мокроты 315 больных ВП, находившихся в период с 2021 по 2022 г. на стационарном лечении в инфекционных отделениях г. Ростова-на-Дону и Ростовской области. Диагноз «внебольничная пневмония» (J18.9) у всех пациентов был верифицирован в соответствии с Российскими национальными рекомендациями по ВП (2019) на амбулаторном этапе диагностики в первые 5–7 дней заболевания с последующей госпитализацией в специализированный стационар [10]. Среди участников исследования было 146 мужчин и 169 женщин. Возраст пациентов колебался от 20 до 80 лет: 20–50 лет – 157 чел., 51–80 лет – 158.

Согласно сопроводительной медицинской документации, мазки из носо/ротоглотки были взяты у больных ВП непосредственно в момент их поступления в инфекционный стационар, что соответствовало 6–8-м суткам от начала заболевания. Правила сбора, хранения, транспортировки и исследования образцов биоматериала соответствовали требованиям методической документации1–4.

Молекулярно-генетическое исследование образцов мокроты проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) real time на амплификаторах серии «ДТпрайм» («ДНК-технология», Россия). Были использованы коммерческие наборы реагентов «РИБО-преп», «Реверта-L», «АмплиСенс ОРВИ-скрин-FL», «АмплиСенс Influenza virus A/B-FL», «АмплиСенс Mycoplasma pneumoniae/Chlamydophila pneumonia-FL», «АмплиСенс Legionella pneumophila-FL» (Центральный НИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора, Россия), «ВекторПЦРрв-2019-nCoV-RG» (ГНЦ вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, Россия). Бактериологическое исследование образцов проводили классическим количественным методом с разведением в физиологическом растворе 1:2 и посевом на стандартные дифференциально-диагностические среды. Для выявления Str. pneumoniae, H. influenza и Streptococcus spp. применяли 5% кровяной агар и шоколадный агар с селективной...

Полищук И.С., Алешукина А.В., Донцов Д.В., Маркова К.Г., Березинская И.С., Твердохлебова Т.И.