Биоценоз влагалища с точки зрения количественной полилимеразной цепной реакции: что есть норма?

Цель исследования. Изучение количественных характеристик микробиоты влагалища здоровой женщины для внедрения в клиническую практику молекулярно‑генетических методов исследования качественного и количественного состава биоценоза влагалища.
Материал и методы. С помощью количественной полимеразной цепной реакции с использованием реагента «Фемофлор» изучен качественный и количественный состав биоценоза влагалища у 604 клинически здоровых женщин в разные периоды жизни.
Результаты исследования. Показано, что факультативно‑анаэробные микроорганизмы (такие как стафилококки и стрептококки) встречаются гораздо реже, чем облигатно‑анаэробные микроорганизмы. У каждой пятой клинически здоровой женщины репродуктивного возраста выявлена уреаплазма в количестве более 104 гэ/мл. У 10% женщин репродуктивного возраста без клинических признаков дисбиотических процессов во влагалище были обнаружены дрожжеподобные грибы в количестве более 104 гэ/мл. Учитывая отсутствие каких‑либо клинических признаков воспаления или дискомфорта, данное состояние можно рассматривать как вариант нормального биоценоза. Показана неприемлемость интерпретации состояния биоценоза влагалища у женщин старшей возрастной группы с позиции нормы, характерной для женщин репродуктивного возраста.
Заключение. Высокая чувствительность полимеразной цепной реакции позволяет идентифицировать даже незначительные количества микроорганизмов, составляющих биоценоз влагалища.

Вагинальный биоценоз представляет сложную динамическую систему, находящуюся в каждый отдельный момент времени в равновесном состоянии, обусловленном множеством эндогенных и экзогенных факторов (следует уточнить, что понятия нормы и равновесия не являются тождественными).

Наиболее значимыми факторами являются возраст, репродуктивное поведение, акушерско-гинекологический анамнез, гормональный статус, использование гормональных и антибактериальных препаратов, наличие экстрагенитальной патологии. Также следует учитывать влияние на женщину социальных и культурных факторов, таких как национальные традиции, реклама средств интимной гигиены и мода на ношение тесной обтягивающей одежды, интимный пирсинг и другие травмирующие косметические процедуры в области гениталий, которые существенно изменили представление самой женщины о норме применительно к состоянию вульвы и влагалища. Широкое распространение приобрела практика самостоятельного применения вагинальных антисептических, антибактериальных и антимикотических средств.

Тем не менее понятие нормы применительно к биоценозу влагалища — это медицинская категория, основанная прежде всего на четких представлениях о количественном и качественном составе вагинальной микрофлоры [1], а современные молекулярно-генетические методы исследования позволяют получить на сегодняшний день максимально полное и объективное представление о всех участниках вагинальной биоты.

Для клинического применения молекулярно-генетических методов лабораторной диагностики необходимо определение нормальных и патологических характеристик вагинальной экосистемы у различных групп женщин. В силу разнообразных медико-социальных причин именно формирование группы клинически здоровых женщин вызывает наибольшие затруднения для акушеров-гинекологов и венерологов.

Целью настоящего исследования явилось изучение вагинального биоценоза с помощью метода ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени (ПЦР-РВ) у клинически здоровых женщин репродуктивного возраста и женщин в перимепопаузе и постменопаузе.

Материал и методы исследования

В исследование были включены 604 женщины в возрасте от 17 от 73 лет. В 1-ю группу вошли 230 небеременных женщин репродуктивного возраста — от 26 до 36 лет, обратившихся к гинекологу с целью профилактического осмотра или предгравидарной подготовки. Во 2-ю группу вошли 283 беременные женщины в возрасте от 25 до 33 лет, из них 140 женщин были обследованы в I (72 женщины планировали беременность вынашивать, 68 — прерывать), 50 — во II и 93 — в III триместре беременности. В исследование были включены женщины, у которых при микроскопии вагинального отделяемого лейкоциты выявляли в количестве от 0 до 5 клеток в поле зрения, флора была представлена преимущественно лактоморфотипами [2]. В 3-ю группу были включены 65 женщин в перименопаузе в возрасте от 48 до 52 лет. В 4-ю группу вошли 26 женщин в постменопаузе в возрасте от 57 до 60 лет.

Критериями включения в исследование являлись отсутствие жалоб на патологические выделения, дискомфорт в области вульвы и влагалища. Критериями исключения являлись следующие параметры: клинические признаки вагинита или бактериального вагиноза, выраженная лейкоцитарная реакция в вагинальном отделяемом, признаки воспалительного процесса во влагалище.

Исследование биоценоза влагалища проводи-ли методом ПЦР-РВ с использованием реагента «Фемофлор» (производитель: ООО «НПО ДНК-Технология», РУ ФСР 2009/04663, патент № 2362808 от 13.02. 08). Материал для исследования собирали с заднебоковой стенки влагалища на предметное стекло и в пробирку Эппендорф, содержащую 1 мл физиологического раствора. Хранение и транспортировку материала проводили согласно действующим нормативным документам. Микроскопию препаратов, окрашенных по Граму, осуществляли при увеличении в 1000 раз. При этом оценивали количество лейкоцитов и характер микрофлоры. Для исследования биоценоза влагалища выделяли ДНК микроорганизмов с использованием набора реагентов «Проба-ГС» (ООО «НПО ДНК-Технология»), а ПЦР-РВ проводили в амплификаторе ДТ-96 (ООО «НПО ДНК-Технология») согласно инструкции производителя. С помощью специального программного обеспечения рассчитывали количество (в геном-эквивалентах/ мл — гэ/мл) общей бактериальной массы (ОБМ), лактобацилл и каждой группы условно-патогенных микроорганизмов. Дополнительно оценивали долю нормофлоры, факультативно-анаэробных микроорганизмов и анаэробных микроорганизмов в процентах среди всех выявленных бактерий.

Статистическую обработку данных проводили с помощью статистического пакета SPSS Statistics версии 17.0 (Inc., Chicago, USA). В качестве меры центральной тенденции количественных признаков выбрана медиана, а в качестве интервальной оценки — верхний и нижний квартили, так как исследуемые выборки не подчиняются закону нормального распределения.

Результаты исследования и обсуждение

Результаты исследования вагинального биоценоза, полученные методом ПЦР-РВ, интерпретировали следующим образом. Наличие более 90% лак...

Ворошилина Е.С., Тумбинская Л.В., Донников А.Е., Плотко Е.Э., Хаютин Л.В.