Бронхолегочная дисплазия у детей в фокусе генетической вариабельности рецептора витамина D

Актуальность. Помимо основной функции, заключающейся в регуляции фосфорно-кальциевого обмена, витамин D (VD) и его рецептор (VDR) оказывают опосредованное влияние более чем на 300 генов, влияющих на клеточный цикл, иммунитет и метаболизм. Более чем из 30 известных однонуклеотидных последовательностей наиболее изучены и обладают фенотипическим действием на ряд заболеваний – это ApaI (rs7975232), BsmI (rs1544410), FokI (rs2228570), TaqI (rs731236) и Cdx2 (rs11568820). Цель исследования: определить влияние полиморфизма FOK1 гена VDR на течение и исходы бронхолегочной дисплазии (БЛД) у детей. Методы. При проведении работы основную группу составили 80 пациентов с диагнозом «бронхолегочная дисплазия» (БЛД). Группа контроля была представлена 93 недоношенными новорожденными, не сформировавшими диагноз БЛД. Все пациенты основной группы обследованы и получали лечение, согласно стандарту оказания медицинской помощи при данном заболевании. Для выполнения молекулярно-генетического анализа производили выделение тотальной ДНК из цельной крови. Генотипирование полиморфных маркеров изучаемых генов осуществляли с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) и анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ-анализа). Статистическая обработка проводилась методами вариационной статистики. Результаты. Доказана ассоциация полиморфизма FOK1 гена VDR с реализацией БЛД у детей. Согласно статистическим данным, генотип F/F предрасполагает к развитию заболевания (χ2=7,133; р=0,008, df=1, OШ=2,811, ДИ: 1,300–6,077). Изучение влияния генотипов полиморфизма FOK1 гена VDR на исходы БЛД, степень тяжести, реализацию бронхообструктивного синдрома при обострении БЛД, характер микробиоты дыхательных путей и длительность использования ИГКС не выявило статистически значимых различий. В то же время сравнительный анализ данных показал, что у гетерозиготных носителей генотипа F/f полиморфного маркера FOK1 гена VDR достоверно чаще диагностировались тяжелые поражения центральной нервной системы – ЦНС (χ2=7,619; р<0,05, р=0,006, df=1, отношение шансов [OШ]=9,000, доверительный интервал [ДИ]: 1,638–49,447). Анализ полученных данных выявил достоверную взаимосвязь гетерозиготного генотипа F/f полиморфного маркера FOK1 гена VDR с частотой респираторныж вирусных заболеваний (ОРВИ) (χ2=3,889; р=0,049, df=2), а также с появлением первых эпизодов ОРВИ до года (χ2=7,347; p<0,05, р=0,020). Заключение. В ходе проведенного исследования доказано, что гомозиготный генотип F/F имеет предрасполагающее значение для формирования БЛД у младенцев. Гетерозиготный генотип F/f полиморфного локуса FOK1 гена VDR ассоциирован с поражениями ЦНС васкулярного характера, частыми эпизодами и ранним стартом вирусных инфекций, сопровождающимися тяжелой формой обструктивного синдрома у детей с БЛД.

Введение

Помимо основной функции, заключающейся в регуляции фосфорно-кальциевого обмена, витамин D (VD) и его рецептор (VDR) оказывают опосредованное влияние более чем на 300 генов, влияющих на клеточный цикл, иммунитет и метаболизм [1]. Доказано, что активная форма витамина D оказывает прямое воздействие на недифференцированные и инактивированные Т-хелперы, Т-регуляторы, активированные Т-клетки и дендритные клетки [1, 2].

Ген VDR находится на коротком плече хромосомы 12 (12q13.1), состоит из 9 экзонов и 8 интронов. Он имеет высокую вариабельность полиморфных последовательностей, возникающих как в кодирующих, так и в некодирующих частях гена, и это ведет к изменениям его функции за счет активации экспрессии гена, реже – к структуре белка. Более чем из 30 известных однонуклеотидных последовательностей наиболее изученные ApaI (rs7975232), BsmI (rs1544410), FokI (rs2228570), TaqI (rs731236) и Cdx2 (rs11568820) [2]. Установлено их влияние на риск развития, тяжесть и течение иммуноопосредованных заболеваний, таких как сахарный диабет и ревматоидный артрит, хронические бронхолегочные и сердечно-сосудистые недуги. Полученные результаты исследований свидетельствуют о необходимости проведения дальнейших изысканий в этой области [2–6].

Цель исследования: определить влияние полиморфизма FOK1 гена VDR на течение и исходы бронхолегочной дисплазии (БЛД) у детей.

Методы

Исследование проведено на базе ГБУЗ АО ОДКБ им. Н.Н. Силищевой, Астрахань, в период с 2016 по 2019 г.

Основную группу составили 80 пациентов с диагнозом БЛД. Группа контроля представлена 93 недоношенными новорожденными, не сформировавшими диагноз БЛД. Все пациенты основной группы обследованы и получали лечение, согласно стандарту оказания медицинской помощи при данном заболевании.

Для выполнения молекулярно-генетического анализа производили выделение тотальной ДНК из цельной крови. Генотипирование полиморфных маркеров изучаемых генов осуществляли с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) и анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ-анализа) У пациентов с различными аллелями и генотипами анализировались следующие параметры: степень тяжести заболевания, длительность респираторной поддержки, гендерный признак, варианты исходов недуга, частота, тяжесть обострений и респираторных инфекций, заинтересованность в базисной терапии, коморбидные состояния, показатели функции внешнего дыхания по данным бронхофонограммы и интерпретация данных компьютерной томограммы легких.

Для сравнения частот аллелей и генотипов и их ассоциации с фенотипом БЛД использовали χ2-критерий Пирсо с поправкой Йетса на непрерывность при числе степеней свободы, равном 1, а также двусторонний точный тест Фишера в случае, если ожидаемое значение хотя бы в одной ячейке таблицы сопряженности было меньше 5.

Об ассоциации фенотипического признака с конкретным генотипом или аллелей судили по величине отношения шансов (Оdds Ratio [OR]).

Результаты

В ходе исследования выявлено, что генотипическая вариабельность полиморфизма FOK1 гена VDR у пациентов представлена таким образом, что наиболее часто идентифицирован генотип F/F – в 65,0% случаев (52 ребенка), в то вр...

Д.Ф. Сергиенко, П.Б. Хиштилова