Цервикальные интраэпителиальные неоплазии: анализ профиля мРНК в практике жидкостной цитологии

DOI: https://dx.doi.org/10.18565/aig.2017.4.95-100

10.05.2017
491

1ФГБУ Российский научный центр рентгенорадиологии Минздрава России, Москва 2ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России, Москва

Цель исследования. Оценить возможность проведения дифференцировки пациенток с цервикальной интраэпителиальной неоплазией (CIN) 2+ и CIN1 или менее на основе экспрессии 21-генной панели мРНК методом количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в материале консервирующей жидкости флакона с образцами Пап-теста CellPrep.
Материал и методы. Уровень экспрессии мРНК 21 гена (Ki-67, STK-15, CCNB1, CCND1, MYC, MYBL2, P16INK4A, PTEN, BIRC5, BCL2, BAG1, TERT, NDRG1, ESR1, PGR, HER2, GRB7, MGB1, MMP11, CTSL2, CD68) определяли методом количественной ПЦР в материале консервирующей жидкости флакона после Пап-теста CellPrep у 59 пациенток, проходивших лечение в РНЦРР в 2015-2016 гг. Критерием достоверности были результаты сопоставления с последующим гистологическим исследованием.
Результаты исследования. Установлено, что сочетанная оценка уровней экспрессии мРНК генов ESR1 и MYBL2 позволяет, по данным дискриминантного анализа, провести правильную классификацию для пациенток с изменениями CIN2+ в 88,24% случаев, а для пациенток с гистологически подтвержденной CIN1 или менее – в 84,0% случаев. Сочетанная оценка уровней экспрессии мРНК 17 генов (ESR1, MYBL2, CD68, PTEN, CCND1, BCL2, HER2, MMP11, TERT, STK15, P16INK4A, BAG1, CTSL2, KI67, CCNB1, GRB7, NDRG1) позволяет с точностью 98,3% случаев дифференцировать группы CIN 2+ и CIN1 или менее. Совпадение классификации с данными гистологического исследования для группы CIN2+ составило 100,0% случаев, а для группы с гистологически подтвержденной CIN1 или менее – 96,0% случаев.
Заключение. Впервые показана возможность анализа экспрессии мРНК большой группы генов методом количественной ПЦР в материале жидкостной цитологии Пап-теста CellPrep. Оценка экспрессии панели 21 генов, дополняющая морфологическую дооперационную диагностику предраковых процессов и рака шейки матки по материалу жидкостной цитологии, позволяет с высокой точностью проводить дифференциальную диагностику 2 клинически важных групп: CIN 2+ и CIN1 или менее (неизмененный эпителий/доброкачественные изменения ткани шейки матки).

Заболеваемость раком шейки матки (РШМ) в Российской Федерации с 2005 по 2015 гг. возросла на 24,47% случаев, составив 21,27 случая на 100 000 населения в 2015 году [1]. Неблагоприятные эпидемиологические тенденции РШМ диктуют необходимость совершенствования методов ранней диагностики на новом технологическом уровне с внедрением в клиническую практику последних достижений молекулярной биологии.

По данным отечественной литературы даже изолированное тестирование мРНК гена р16 (INK4a) методом количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) (в материале традиционного соскоба шейки матки) может быть использовано в качестве дополнительного маркера прогнозирования распространенных поражений шейки матки [2].

Дифференциально-диагностическая панель маркеров для оценки цервикальной интраэпителиальной неоплазии (CIN) и РШМ должна включать комплексный анализ экспрессии мРНК BCL-2, BAG, циклина В1, Ki-67 и рецепторов эстрогена [3]. Однако указанные исследования, как и большинство других, проведены на образцах биопсийного и операционного материала. В настоящее время особый интерес вызывает возможность анализа нуклеиновых кислот и в особенности РНК в материале, получаемом для жидкостной цитологии.

В литературе описан целый ряд работ, в которых указывается на возможность проведения таких исследований. M. Del Pino и соавт. (2015) впервые сообщили об обнаружении мРНК клеточных биомаркеров в материале консервирующей жидкости флакона с образцом Пап-теста ThinPrep [4]. Исследователи отмечают, что сочетанная оценка TOP2A и CDKN2A/р16 в данном материале обладает достаточным соотношением чувствительности и специфичности для выявления женщин с высокой степенью плоскоклеточного интраэпителиального поражения (HSIL). H.Y. Wang и соавт. (2015) на основе комплексной оценки уровней мРНК онкопротеинов Е6 и Е7 вируса папилломы человека (ВПЧ) и белка теломеразной обратной транскриптазы человека (hTERT) в материале флакона Пап-теста ThinPrep (545 образцов) приходят к выводу, что сочетанная оценка указанных маркеров может использоваться взаимодополняющим образом при диагностике поражений шейки матки высокой степени злокачественности, а также являться прогностическим маркером при мониторинге заболеваний шейки матки низкой степени злокачественности [5].

Таким образом, определение мРНК в материале консервирующего раствора Пап-теста с использованием количественной ПЦР позволит расширить возможности дифференциальной диагностики CIN различной степени тяжести, рака in situ и инвазивного РШМ.

Список литературы

1. Каприн А.Д., Старинский В.В., Петрова Г.В., ред. Злокачественные новообразования в России в 2015 году (заболеваемость и смертность). М.: МНИОИ им. П.А. Герцена – филиал ФГБУ «НМИРЦ» Минздрава России; 2017. 250с. Available at: http://www.oncology.ru/service/statistics/malignant_tumors/2015.pdf

2. Боженко В.К., Кудинова Е.А., Близнюков О.П., Мельникова Н.В., Бурменская О.В. Патент на изобретение RUS 2464570, МПК G01N33/53. Метод диагностики цервикальных интраэпителиальных неоплазий. Заявитель и патентообладатель ФГУ „РНЦРР” Минздравсоцразвития России (RU). № 2010147074/15; Заявлено 19.11.2010; Опубл. 20.10.2012; Бюл. №29. 9с.

3. Боженко В.К., Ашрафян Л.А., Антонова И.Б., Мельникова Н.В., Бурменская О.Н., Трофимов Д.Ю., Кудинова Е.А., Хунова Л.З., Слонов А.В., Близнюков О.П. Анализ экспрессии генов пролиферации и апоптоза при цервикальных интраэпителиальных неоплазиях и раке шейки матки. Опухоли женской репродуктивной системы. 2011; 4: 72-5.

4. Del Pino M., Svanholm-Barrie C., Torné A., Marimon L., Gaber J., Sagasta A. et al. mRNA biomarker detection in liquid-based cytology: a new approach in the prevention of cervical cancer. Mod. Pathol. 2015; 28(2): 312-20. doi: 10.1038/modpathol.2014.106.

5. Wang H.Y., Park S., Kim S., Lee D., Kim G., Kim Y. et al. Use of hTERT and HPV E6/E7 mRNA RT-qPCR TaqMan assays in combination for diagnosing high-grade cervical lesions and malignant tumors. Am. J. Clin. Pathol. 2015; 143(3): 344-51. doi: 10.1309/AJCPF2XGZ2XIQYQX.

6. Боженко В.К., Васкевич Е.Ф., Трофимов Д.Ю., Бурменская О.В., Кудинова Е.А., Хунова Л.З. Анализ изменения профиля экспрессии генов при гиперпролиферативных заболеваниях шейки матки. Клиническая лабораторная диагностика. 2011; 9: 21.

7. Tavassoli F.A., Devilee P., eds. Pathology and genetics of tumours of the breast and female genital organs. Lyon: IARC; 2003. 432p.

8. Zhai Y., Bommer G.T., Feng Y., Wiese A.B., Fearon E.R., Cho K.R. Loss of estrogen receptor 1 enhances cervical cancer invasion. Am. J. Pathol. 2010; 177(2): 884-95. doi: 10.2353/ajpath.2010.091166.

9. Astbury K., McEvoy L., Brian H., Spillane C., Sheils O., Martin C. et al. MYBL2 (B-MYB) in cervical cancer: putative biomarker. Int. J. Gynecol. Cancer. 2011;21(2): 206-12. doi: 10.1097/IGC.0b013e318205759f.

Поступила 03.02.2017

Принята в печать 17.02.2017

Об авторах / Для корреспонденции

Mельникова Надежда Васильевна, к.м.н., в.н.с. лаборатории иммунологии, онкоцитологии и клеточной терапии в онкологии ФГБУ РНЦРР Минздрава России.
Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Профсоюзная, д. 86. Телефон: 8 (495) 333-91-30. E-mail: n_melnikova@list.ru
Боженко Владимир Константинович, д.м.н., профессор, зав. отделом молекулярной биологии и экспериментальной терапии опухолей ФГБУ РНЦРР Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Профсоюзная, д. 86. Телефон: 8 (499) 120-11-14. E-mail: vbojenko@mail.ru
Антонова Ирина Борисовна, д.м.н., зав. лабораторией профилактики, ранней диагностики и комбинированного лечения онкологических заболеваний ФГБУ РНЦРР Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Профсоюзная, д. 86. Телефон: 8 (499) 120-60-77. E-mail: iran24@yandex.ru
Бабаева Наталия Александровна, д.м.н., в.н.с лаборатории профилактики, ранней диагностики и комбинированного лечения онкологических заболеваний ФГБУ РНЦРР Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Профсоюзная, д. 86. Телефон: 8 (499) 120-60-77. E-mail: natbabaeva@yandex.ru
Яровая Наталия Юрьевна, к.м.н., зав. лабораторией цитологии патологоанатомического отделения ФГБУ РНЦРР Минздрава России.
Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Профсоюзная, д. 86. Телефон: 8 (499) 120-11-14. E-mail: natalya-yarovaya@yandex.ru
Болотина Наталия Александровна, к.м.н., врач-патологоанатом патологоанатомического отделения ФГБУ РНЦРР Минздрава России.
Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Профсоюзная, д. 86. Телефон: 8 (495) 333-91-30. E-mail: soloma-natali@yandex.ru
Захаренко Маргарита Владимировна, м.н.с. лаборатории иммунологии, онкоцитологии и клеточной терапии в онкологии ФГБУ РНЦРР Минздрава России.
Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Профсоюзная, д. 86. Телефон: 8 (499) 120-11-14. E-mail: zak-margarita@mail.ru
Сенчукова Анна Леонидовна, к.б.н., научный сотрудник лаборатории иммунологии, онкоцитологии и клеточной терапии в онкологии ФГБУ РНЦРР Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Профсоюзная, д. 86. Телефон: 8 (499) 120-11-14. E-mail: asenchukova@gmail.com
Акопова Наталия Борисовна, к.м.н., врач акушер-гинеколог отдела лучевой и инструментальной диагностики онкологических заболеваний женских репродуктивных органов ФГБУ РНЦРР Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Профсоюзная, д. 86. Телефон: 8 (499) 120-60-77
Александрова Наталия Владимировна, д.м.н., с.н.с. ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова.
Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. E-mail: alexandrova.ncagip@gmail.com
Бурменская Ольга Владимировна, д.б.н., старший научный сотрудник лаборатории молекулярно-генетических методов ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (916) 753-17-09. E-mail: bourmenska@mail.ru
Ашрафян Левон Андреевич, д.м.н., проф., заведующий научно-исследовательским отделом раннего канцерогенеза, профилактики, диагностики и комплексного лечения онкологических заболеваний женских репродуктивных органов ФГБУ РНЦРР Минздрава России.
Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Профсоюзная, д. 86. Телефон: 8 (495) 334-99-09

Для цитирования: Мельникова Н.В., Боженко В.К., Антонова И.Б., Бабаева Н.А., Яровая Н.Ю., Болотина Н.А., Захаренко М.В., Сенчукова А.Л., Акопова Н.Б., Александрова Н.В., Бурменская О.В., Ашрафян Л.А. Цервикальные интраэпителиальные неоплазии: анализ профиля мРНК в практике жидкостной цитологии. Акушерство и гинекология. 2017; 4: 95-100.
http://dx.doi.org/10.18565/aig.2017.4.95-100

Полный текст публикаций доступен только подписчикам

Нет комментариев

Комментариев: 0

Вы не можете оставлять комментарии
Пожалуйста, авторизуйтесь