Акушерство и Гинекология №4 / 2017
Цервикальные интраэпителиальные неоплазии: анализ профиля мРНК в практике жидкостной цитологии
1ФГБУ Российский научный центр рентгенорадиологии Минздрава России, Москва
2ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России, Москва
Цель исследования. Оценить возможность проведения дифференцировки пациенток с цервикальной интраэпителиальной неоплазией (CIN) 2+ и CIN1 или менее на основе экспрессии 21-генной панели мРНК методом количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в материале консервирующей жидкости флакона с образцами Пап-теста CellPrep.
Материал и методы. Уровень экспрессии мРНК 21 гена (Ki-67, STK-15, CCNB1, CCND1, MYC, MYBL2, P16INK4A, PTEN, BIRC5, BCL2, BAG1, TERT, NDRG1, ESR1, PGR, HER2, GRB7, MGB1, MMP11, CTSL2, CD68) определяли методом количественной ПЦР в материале консервирующей жидкости флакона после Пап-теста CellPrep у 59 пациенток, проходивших лечение в РНЦРР в 2015-2016 гг. Критерием достоверности были результаты сопоставления с последующим гистологическим исследованием.
Результаты исследования. Установлено, что сочетанная оценка уровней экспрессии мРНК генов ESR1 и MYBL2 позволяет, по данным дискриминантного анализа, провести правильную классификацию для пациенток с изменениями CIN2+ в 88,24% случаев, а для пациенток с гистологически подтвержденной CIN1 или менее – в 84,0% случаев. Сочетанная оценка уровней экспрессии мРНК 17 генов (ESR1, MYBL2, CD68, PTEN, CCND1, BCL2, HER2, MMP11, TERT, STK15, P16INK4A, BAG1, CTSL2, KI67, CCNB1, GRB7, NDRG1) позволяет с точностью 98,3% случаев дифференцировать группы CIN 2+ и CIN1 или менее. Совпадение классификации с данными гистологического исследования для группы CIN2+ составило 100,0% случаев, а для группы с гистологически подтвержденной CIN1 или менее – 96,0% случаев.
Заключение. Впервые показана возможность анализа экспрессии мРНК большой группы генов методом количественной ПЦР в материале жидкостной цитологии Пап-теста CellPrep. Оценка экспрессии панели 21 генов, дополняющая морфологическую дооперационную диагностику предраковых процессов и рака шейки матки по материалу жидкостной цитологии, позволяет с высокой точностью проводить дифференциальную диагностику 2 клинически важных групп: CIN 2+ и CIN1 или менее (неизмененный эпителий/доброкачественные изменения ткани шейки матки).
Заболеваемость раком шейки матки (РШМ) в Российской Федерации с 2005 по 2015 гг. возросла на 24,47% случаев, составив 21,27 случая на 100 000 населения в 2015 году [1]. Неблагоприятные эпидемиологические тенденции РШМ диктуют необходимость совершенствования методов ранней диагностики на новом технологическом уровне с внедрением в клиническую практику последних достижений молекулярной биологии.
По данным отечественной литературы даже изолированное тестирование мРНК гена р16 (INK4a) методом количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) (в материале традиционного соскоба шейки матки) может быть использовано в качестве дополнительного маркера прогнозирования распространенных поражений шейки матки [2].
Дифференциально-диагностическая панель маркеров для оценки цервикальной интраэпителиальной неоплазии (CIN) и РШМ должна включать комплексный анализ экспрессии мРНК BCL-2, BAG, циклина В1, Ki-67 и рецепторов эстрогена [3]. Однако указанные исследования, как и большинство других, проведены на образцах биопсийного и операционного материала. В настоящее время особый интерес вызывает возможность анализа нуклеиновых кислот и в особенности РНК в материале, получаемом для жидкостной цитологии.
В литературе описан целый ряд работ, в которых указывается на возможность проведения таких исследований. M. Del Pino и соавт. (2015) впервые сообщили об обнаружении мРНК клеточных биомаркеров в материале консервирующей жидкости флакона с образцом Пап-теста ThinPrep [4]. Исследователи отмечают, что сочетанная оценка TOP2A и CDKN2A/р16 в данном материале обладает достаточным соотношением чувствительности и специфичности для выявления женщин с высокой степенью плоскоклеточного интраэпителиального поражения (HSIL). H.Y. Wang и соавт. (2015) на основе комплексной оценки уровней мРНК онкопротеинов Е6 и Е7 вируса папилломы человека (ВПЧ) и белка теломеразной обратной транскриптазы человека (hTERT) в материале флакона Пап-теста ThinPrep (545 образцов) приходят к выводу, что сочетанная оценка указанных маркеров может использоваться взаимодополняющим образом при диагностике поражений шейки матки высокой степени злокачественности, а также являться прогностическим маркером при мониторинге заболеваний шейки матки низкой степени злокачественности [5].
Таким образом, определение мРНК в материале консервирующего раствора Пап-теста с использованием количественной ПЦР позволит расширить возможности дифференциальной диагностики CIN различной степени тяжести, рака in situ и инвазивного РШМ.
