Диагностическая значимость предактивированных нейтрофилов при преэклампсии

Цель исследования. Изучить взаимосвязь содержания предактивированных (праймированных) нейтрофилов в периферической крови беременных с преэклампсией.
Материал и методы. В исследование включены 14 женщин с преэклампсией (основная группа – I) и 15 женщин с физиологически протекающей беременностью (контрольная группа – II) и 11 небеременных женщин (для получения нормативных значений). В периферической крови определяли формил пептид (fMLP), градиенты фиколл-гипак (1,077 и 1,119 г/мл), люцигенин, среда RPMI-1640, среда Хенкса, эмбриональная сыворотка телят – Sigma-Aldrich. Выделяли нейтрофилы из крови, полученной из локтевой вены (антикоагулянт гепарин 35 МЕ/мл), на двухступенчатом градиенте фиколл-гипак. Эритроциты разрушали с помощью гипотонического лизиса. Нейтрофилов в суспензиях было не менее 96%. Живые клетки в тесте с трипановым синим составляли 94%. Готовые суспензии содержали 1×106 клеток/мл. В качестве стимулятора использовали формил-метионил-лейцил-фенилаланинин (fMLP, 2 мкМ). Образование радикалов кислорода регистрировали с помощью люминофора-люцигенина (30 мкМ) на хемилюминометре «Биотокс-7» (Россия) в имп/сек. Определяли максимальную амплитуду образования радикалов, время ее достижения, а также свето-сумму за фиксированный период времени.
Результаты. В суспензиях клеток небеременных женщин отмечалось монотонное «спонтанное» увеличение образования радикалов кислорода с очень низкой скоростью. У здоровых беременных скорость возрастает в 1,3 раза (р>0,05). Скорость «спонтанной» генерации радикалов кислорода резко возрастала у беременных с преэклампсией. В этой группе образование радикалов кислорода достигает максимальных значений и выходит на плато через 24±7 мин. По-видимому, «спонтанное» образование радикалов обусловлено стимуляцией исходно праймированных нейтрофилов в результате их адгезии на стенках кюветы. Для проверки этого предположения к суспензиям добавляли стандартный стимулятор fMLP, который выраженным образом стимулировал генерацию радикалов кислорода нейтрофилами женщин с преэклампсей. Следует отметить, что как у небеременных женщин, так и у здоровых беременных fMLP значительно слабее увеличивал уровень радикалов по сравнению с ответами нейтрофилов женщин с преэклампсией.
Заключение. Потенциирование ответа на формил пептид на фоне «спонтанной» стимуляции нейтрофилов беременных женщин с преэклампсией свидетельствует о присутствии в их периферической крови праймированных клеток. Такой суммарный ответ позволяет предположить, что механизм стимуляции нейтрофилов в результате адгезии на стенке кюветы и при действии fMLP разный, носит аддитивный характер и осуществляется с помощью разных процессов.

Осложнение беременности в виде преэклампсии сопровождается рядом характерных клинических изменений, включая гипертензию, протеинурию и, в более тяжелых случаях поражения центральной нервной системы, полиорганную недостаточность [1–4]. Все эти изменения тесно связаны с формированием системного воспаления с участием фагоцитов крови (нейтрофилов и моноцитов) [2], образующих и секретирующих многочисленные провоспалительные факторы (цитокины воспаления), протеолитические ферменты и радикалы кислорода [5, 6]. Однако следует отметить, что стимулированные фагоциты и, прежде всего, нейтрофилы участвуют не только в разрушении и удалении погибших и видоизмененных собственных клеток организма при асептическом воспалении, но и в таких патофизиологических процессах, как увеличение АД, повреждение клеток клубочков и канальцев почек [5–7]. Одним из наиболее важных процессов с участием фагоцитов крови является «дыхательный взрыв», связанный с резким увеличением потребления кислорода этими клетками, из которого с помощью ферментативной НАДФН-оксидазной системы генерируются супероксид анионы в результате одноэлектронного восстановления молекулярного кислорода [8]. «Дыхательному взрыву» предшествует ряд процессов, которые переводят клетки из состояния покоя в состояние предактивации (праймирования) [9]. Такая предактивация развивается под влиянием низких концентраций праймирующих агентов (10-10-10-9 М), создающих благоприятные условия для стимуляции «дыхательного взрыва» в результате последующего воздействия разрешающего агента [10]. В результате праймирования развивается сложный комплекс процессов, который заканчивается потенциированием ответа на стимулятор [9–11]. Разница в действующих концентрациях праймирующих агентов и стимуляторов может составлять два-три порядка [9]. Праймированные и покоящиеся фагоциты морфологически мало отличаются друг от друга. Праймированные нейтрофилы не образуют значительных количеств радикалов кислорода и не секретируют цитотоксические соединения, содержащиеся в гранулах, и могут циркулировать с током крови [11].

Механизмы праймирования носят сложный характер и в полной мере изучены недостаточно полно. В ряде исследований было предположено, что центральную роль в возникновении и развитии преэклампсии играет нарушение плацентации, гипоксически-ишемические изменения плаценты, гибель цитотрофобластов, клеток спиральных сосудов матки и клеток других видов, что сопровождается секрецией в кровь провоспалительных цитокинов, включая фактор активации тромбоцитов (PAF), фактор некроза опухоли (TNF-a), формил пептиды, образуемые не только бактериями, но и митохондриями (fMLP), эндотоксины (LPS) и др., которые первоначально праймируют нейтрофилы, а затем накапливаются и стимулируют эти клетки [12–14]. С током крови предактивированные фагоциты распространяются по всему организму, разрушают слой эндотелиальных клеток микрососудов, формируют порочные циклы, важную роль в которых играет подавление апоптоза нейтрофилов и, как следствие, увеличение продолжительности жизни этих клеток [15]. Необходимо отметить, что само праймирование, по-видимому, изменяет структуру, состав и свойства как белков (например, рецепторов), так и липидов плазматических мембран нейтрофилов, что усиливает чувствительность этих клеток к внеклеточным регуляторным воздействиям, влияющим на уровне плазматических мембран [16]. Подобные изменения, очевидно, не носят выраженного характера и развиваются до возникновения «дыхательного взрыва» вследствие адгезии нейтрофилов не только на эндотелии и других видах клеток, но и компонентах соединительной ткани и барьерах различных видов [17, 18].

Цель исследования. Изучить взаимосвязь содержания предактивированных (праймированных) нейтрофилов в периферической крови беременных с преэклампсией.

Материалы и методы исследования

В исследование включены 14 женщин с преэклампсией (основная группа – I), 15 женщин с физиологически протекающей беременностью (контрольная группа – II) и 11 небеременных женщин (для получения нормативных значения).

Группы были сопоставимы по исходной клинической характеристике. Всеми пациентками было подписано информированное согласие на участие в данном исследовании, которое было одобрено локальным этическим комитетом. Критериями включения в группах являлись: одноплодная беременность, родоразрешение на сроке гестации с 37 до 40 недель 6 дней, наличие преэклампс...

Харченко Д.К., Асташкин Е.И., Кан Н.Е., Тютюнник Н.В., Орехова Н.С., Борис Д.А. Тютюнник В.Л.