Диагностическая значимость протеомного анализа плазмы крови при задержке роста плода

Цель: Определить критерии диагностики задержки роста плода на основании количественного протеомного анализа плазмы крови беременной.
Материалы и методы: В исследование «случай-контроль» были включены 50 беременных, разделенных на 5 групп. Группа I – беременные с ранней задержкой роста плода (<32 недель) (n=10), группа II – 
с поздней задержкой роста плода (≥32 недель) (n=10), группы III и IV – пациентки, родоразрешенные до и после 32 недель (n=10/n=10) соответственно, группа V – беременные с плодами, маловесными к сроку гестации (≥32 недель) (n=10). Постнатальная оценка массо-ростовых показателей у новорожденных (n=50) проводилась согласно центильным кривым INTERGROWTH-21 для подтверждения антенатального диагноза задержки роста и маловесного плода, а также установления нормальной массы тела в группе с преждевременными родами (до 32 и после 32 недель). Количественный анализ 125 белков плазмы крови проведен с использованием набора BAK 125 (MRM Proteomics Inc., Монреаль, Канада) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС). На основе логистической регрессии были созданы диагностические модели для задержки роста и маловесного плода после предварительного процессинга данных.
Результаты: На основании полученных результатов количественного протеомного анализа белков плазмы крови матери были разработаны 3 диагностические модели. Модель «1» (AUC=0,86), включающая альфа-2-макроглобулин в качестве переменной, с чувствительностью и специфичностью 90% позволяет проводить диагностику ранней формы задержки роста плода. Модель «2» (AUC=0,88), включающая в качестве переменной белки альфа-2-макроглобулин и аполипопротеин A-IV, с чувствительностью 90% и специфичностью 80% позволяет диагностировать позднюю форму задержки роста плода. Модель «3» (AUC=0,80), в основу которой в качестве переменной введены белки антитромбин-III и аполипопротеин C-I, с чувствительностью 80% и специфичностью 80% может быть использована для проведения дифференциальной диагностики поздней формы задержки роста и маловесного к сроку гестации плода.
Заключение: Результаты данного исследования могут быть использованы в формировании подходов к новым методам диагностики различных форм задержки роста и маловесного плода, а также явиться отправной точкой для будущих исследований по изучению, в том числе, потенциальных терапевтических мишеней.

Вклад авторов: Волочаева М.В., Токарева А.О., Кононихин А.С., Кукаев Е.Н., Тютюнник В.Л., Кан Н.Е., 
Стародубцева Н.Л. – концепция и разработка дизайна исследования, получение данных для анализа, обзор публикаций, обработка и анализ материала по теме, статистический анализ полученных данных, написание текста рукописи, редактирование статьи.
Конфликт интересов: Авторы заявляют об отсутствии возможных конфликтов интересов.
Финансирование. Работа выполнена в рамках экспериментального научного исследования «Совершенствование тактики ведения и сроков родоразрешения беременных с задержкой роста плода на основании изучения молекулярно-генетических и метаболомных факторов с последующим внедрением современных методов диагностики тяжести течения данного осложнения гестации» 121040600408-4.
Одобрение Этического комитета: Исследование было одобрено локальным этическим комитетом 
ФГБУ «НМИЦ АГП им. акад. В.И. Кулакова» Минздрава России.
Согласие пациентов на публикацию: Все пациентки подписали добровольное информированное согласие на публикацию своих данных.
Обмен исследовательскими данными: Данные, подтверждающие выводы этого исследования, доступны по запросу у автора, ответственного за переписку, после одобрения ведущим исследователем.
Для цитирования: Волочаева М.В., Токарева А.О., Кононихин А.С., Кукаев Е.Н., Тютюнник В.Л., Кан Н.Е., Стародубцева Н.Л. Диагностическая значимость протеомного анализа плазмы крови при задержке роста плода. Акушерство и гинекология. 2024; 4: 59-68
https://dx.doi.org/10.18565/aig.2023.299

Современное определение задержки роста плода включает в себя невозможность реализации плодом своего биологического потенциала роста в результате дисфункции плаценты, которая носит полиэтиологичный характер [1, 2]. У новорожденных с задержкой роста или малым весом отмечаются высокая частота неонатальной заболеваемости и смертности, а также более высокий риск развития метаболических, сердечно-сосудистых, нервно-психических заболеваний в более взрослом возрасте [1]. Основным методом диагностики за­держки роста плода на антенатальном этапе является ультразвуковое исследование с оценкой допплерометрических показателей. Принятые в клинической практике критерии, разработанные международным консенсусом в рамках протокола Delphi на основании клинических, эхографических и патологических допплерографических характеристик, позволяют диагностировать ранний и поздний фенотипы задержки роста плода [3]. Следует отметить, что в 75% случаев задержка роста или маловесный для срока гестации плод остаются невыявленными вплоть до родоразрешения [4]. Единственным «золотым стандартом» диагностики задержки роста плода является постнатальное подтверждение массы и длины тела при рождении [5, 6]. В настоящее время еще более сложным является вопрос дифферен­циальной диагностики между маловесным к сроку гестации плодом и задержкой его роста [7].

Таким образом, своевременная диагностика различных фенотипов, поиск значимых отличий задержки роста и маловесного к сроку гестации плода являются одними из ведущих задач современного акушерства. Одним из возможных путей решения данной проблемы является внедрение новых omics-технологий, включая использование метаболомики, которая обладает научным потенциалом не только для изучения патогенеза задержки роста плода, но и для создания новых, доступных для использования в клинической практике неинвазивных биомаркеров.

Цель исследования: определить критерии диагностики задержки роста плода на основании количественного протеомного анализа плазмы крови беременной.

Материалы и методы

В пилотное исследование «случай-контроль» были включены 50 беременных, наблюдавшихся и родоразрешенных в ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава России с 2019 по 2021 гг. Было сформировано 5 групп: I, II и V – основные группы, III и IV – группы сравнения. Группу I составили пациентки с ранней формой задержки роста плода (<32 недель) (n=10), группу II – с поздней формой задержки роста плода (≥32 недель) (n=10), группы III и IV – беременные, родоразрешенные до и после 32 недель (n=10/n=10), с нормальными массо-ростовыми показателями и группу V – пациентки с маловесным к сроку гестации плодом (≥32 недель) (n=10).

Для обеспечения максимальной точности определения протеома проводился индивидуальный подбор пары образцов плазмы крови беременных «основная группа/группа сравнения» (критерий: срок беременности на момент родоразрешения).

Критериями включения в исследование явились: возраст от 18 до 45 лет, одноплодная беременность, антенатально установленный диагноз «задержка роста плода», «маловесный к сроку гестации плод» (согласно диагностическим ультразвуковым и допплеромет­рическим критериям Delphi, а также клиническим рекомендациям Минздрава России «Недостаточный рост плода, требующий предоставления медицинской помощи матери (задержка роста плода)» [2]) – для основных групп, размеры плода, соответствующие сроку беременности, – для групп сравнения.

Критериями исключения являлись: многоплодная беременность, хромосомная патология и пороки развития плода, тяжелая экстрагенитальная патология, гипертензивные расстройства во время беременности, преэклампсия.

Постнатально была проведена оценка массо-ростовых показателей у новорожденных (n=50), согласно центильным кривым INTERGROWTH-21, для подтверждения антенатального диагноза задержки роста и маловесного плода, а также нормальной массы тела в группе сравнения (преждевременные роды до 32 и после 32 недель).

На проведение исследовательской работы было получено одобрение Этического комитета, все пациентки подписали добровольное информированное согласие.

Образцы плазмы венозной крови женщин групп I, II, V получены в день родоразрешения, групп III и IV – в день родоразрешения в сроке, соответствовавшем сроку родоразрешения в группах I, II и V. Образцы венозной крови (пробирки с EDTA) центрифугированы при 300 g и 4°C 20 минут, супернатант повторно центрифугировался при 12 000 g 10 минут, затем образцы замораживались и хранились при -80°C. Количественный анализ 125 белков плазмы крови проводили с использованием набора BAK 125 (MRM Proteomics Inc, Монреаль, Канада) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС) в режиме мониторинга множественных реакций (ММР). Подготовку проб и последующий анализ ВЭЖХ-МС проводили в соответствии с протоколом производителя [8]. МС/МС-анализ выполнен на масс-спектрометре QTRAP SCIEX6500+ (SCIEX, Канада). Программное обеспечение Skyline Quantitative Analysis использовалось для визуального изучения данных LC-MRM MS. Калибровочные кривые были построены с использованием взвешенной линейной регрессии 1/x2 и использованы для расчета концентраций пептидов в образцах (фмоль/мкл плазмы).

Статистический анализ

Статистический анализ проводился с использованием программ Statistica 12.6, IBM SPSS Statistics 21. Оценка соответствия нормальному распределению количествен...

32>

Волочаева М.В., Токарева А.О., Кононихин А.С., Кукаев Е.Н., Тютюнник В.Л., Кан Н.Е. Стародубцева Н.Л.