Диагностика хромосомных анеуплодий с помощью неинвазивного пренатального теста

Цель исследования. Оценка эффективности неинвазивного пренатального теста для выявления трисомии 21-й, 18-й, и 13-й хромосом, анеуплоидии половых хромосом в образцах материнской крови.
Материал и методы. Результаты анализа фетальной ДНК в крови матери были получены для 2010 беременных. Подготовка образцов включала ПЦР-амплификацию, секвенирование и информационный анализ результатов секвенирования, который позволил разделить фетальную и материнскую геномную ДНК.
Результаты. При исследовании внеклеточной ДНК плода в сыворотке крови беременной с использованием SNPs были правильно идентифицированы все случаи аутосомных трисомий 13-й, 18-й, 21-й хромосом, синдром Тернера, синдром Клайнфельтера, полиплоидия и правильно определен пол плода во всех случаях. Чувствительность Panorama-теста для синдрома Дауна в нашем исследовании достигла 100% при уровне ложноположительных результатов 0,05%.
Заключение. Неинвазивный пренатальный тест является точным методом обнаружения трисомии 21-й, 18-й, и 13-й хромосом, анеуплоидии половых хромосом у плода и может быть рекомендован беременным в качестве высоко эффективного пренатального скрининга с 9-й недель беременности.

До недавнего времени наиболее эффективным методом скрининга распространенных хромосомных аномалий плода (синдром Дауна, синдром Эдвардса, синдром Патау и синдром Тернера) считали биохимический и ультразвуковой скрининг в первом триместре беременности.

Комплексная оценка уровня биохимических маркеров (свободный хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) и плазменный протеин, связанный с беременностью (РАРР-А)) в сочетании с толщиной воротникового пространства в 11–13 недель беременности и возрастом матери позволяет выявить до 90% плодов с трисомией 21 при уровне ложноположительных результатов 5% [1].

Использование дополнительных биохимических и ультразвуковых маркеров, включая определение плацентарного фактора роста в сыворотке беременной, оценку носовых костей и кровоток в венозном протоке, может повысить выявляемость до 95% и снизить уровень ложноположительных результатов до 3% [1].

Инвазивная пренатальная диагностика (биопсия ворсин хориона или амниоцентез), проведение которой требуется беременным «группы риска», в 1% случаев сопряжена с риском осложнений.

Обнаружение внеклеточной ДНК плода, свободно циркулирующей в плазме матери, позволило получить новый метод скрининга анеуплоидий плода – неинвазивный пренатальный тест (НИПТ). Поскольку внеклеточная ДНК плода преодолевает гематоплацентарный барьер и попадает в материнский кровоток, то просто взяв кровь у беременной, можно обнаружить нарушение численности хромосом у плода, избежав при этом риска внутриматочного вмешательства, которое необходимо для получения клеток плода на исследование. Концентрация внеклеточной ДНК плода в сыворотке беременной с 9 недель в среднем составляет 10% общего объема внеклеточной ДНК. Процент фетальной фракции нарастает с увеличением гестационного срока.

Исследования показали высокую эффективность НИПТ в отношении наиболее частых анеуплоидий плода (синдромов Дауна, Эдвардса, Патау, Тернера), которые составляют 95% всех хромосомных аномалий. Выявляемость трисомии 21 при НИПТ превышает 99% при уровне ложноположительных результатов около 0,1% [2–11].

Существует два принципиально различных подхода к анализу фетальной ДНК. При «количественном» методе, используемом большинством тестов, проводится статистическая обработка результатов секвенирования суммарной внеклеточной ДНК матери и плода и сравнение с референсным геномом. Тест Panorama – единственный, при котором специально секвенируют однонуклеотидные полиморфизмы (SNP) и различают генотип матери и плода.

Целью данного исследования являлась оценка эффективности НИПТ Panorama, основанного на исследовании SNP, для выявления трисомий 21, 18, 13 и анеуплоидий половых хромосом плода в образцах материнской крови.

Материал и методы исследования

Образцы материнской венозной крови (20 mL in Streck cell-free DNA BCTTM tubes) были получены у 2028 пациенток с одноплодной беременностью на сроке от 9 до 24 недель и отправлены в лабораторию Натера (Сан-Карлос, Калифорния). Информация, предоставленная в лабораторию по каждому из образцов, была следующей: уникальный код пациента, возраст матери, геста...

Курцер М.А., Гнетецкая В.А.