Акушерство и Гинекология №9 / 2017
Диагностика плоскоклеточных интраэпителиальных поражений и рака шейки матки на основании количественной оценки экспрессии микроРНК.
1ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России, Москва
2ГБОУ Первый московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова, Россия
Цель исследования. Оценить возможность дифференциальной диагностики степени тяжести плоскоклеточных интраэпителиальных поражений шейки матки на основании количественной оценки экспрессии микроРНК: has-mir-22-3р, has-mir-25*-3р и has-mir-92а-5р в соскобах шеечного эпителия.
Материал и методы. В исследование были включены 95 женщин в возрасте от 18 до 49 лет (средний возраст 32,7±0,5 года), которые были разделены на 4 группы: без патологии шейки матки – 32 пациентки, с LSIL – 31 пациентка, с HSIL – 26 пациенток и с раком шейки матки – 6 пациенток. Для постановки клинического диагноза использовали цитологический и гистологический методы исследования, расширенную кольпоскопию, тестирование на вирус папилломы человека и измерение уровня экспрессии микроРНК и методом количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени.
Результаты исследования. При плоскоклеточных интраэпителиальных поражениях шейки матки значительно снижается синтез mir-22, и наоборот, повышается экспрессия mir-92а. Экспрессия mir-25 повысилась не значительно. Проведение логистического регрессионного анализа позволило выявить пороговые уровни экспрессии mir-22 и mir-92а, позволяющие с диагностической точностью более 80% дифференцировать рак шейки матки как среди пациенток без видимых патологий, так и у пациенток с плоскоклеточными интраэпителиальными поражениями.
Заключение. Проведенное исследование позволяет наряду с традиционными методами рассматривать уровень экспрессии микроРНК mir-22 и mir-92а как информативный молекулярный маркер прогнозирования степени поражения цервикального эпителия при предраке и раке шейки матки.
Рак шейки матки является одним из наиболее распространенных заболеваний женщин со смертельным исходом [1]. В мире ежегодно диагностируется более 500 000 случаев рака шейки матки, которые в половине случаев заканчиваются летально [2, 3]. Рак шейки матки – многостадийный процесс, развитию которого предшествуют предраковые процессы в шейке матки, инициированные вирусом папилломы человека (ВПЧ) [4, 5].
В настоящее время используется классификация предраковых поражений, предложенная в 1988 г. в США в г. Бетесда (Terminology Bethesda System, TBS) которая была пересмотрена в 1991, 2001 и 2014 гг. и на сегодняшний день рекомендована Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) как наиболее оптимальная для интерпретации цитологических заключений.
К ее основным терминологическим характеристикам относятся: NILM (Negative for intraepithelial lesion or malignancy) – негативные в отношении интраэпителиального поражения или злокачественности; ASC (Atypicals squamous cells) – атипичные клетки плоского эпителия; ASC-US (Atypicals squamous cells undertermined significance) – атипичные клетки плоского эпителия неясного значения; ASC-H (Atypicals squamous cells cannot exclude HSIL – атипичные клетки плоского эпителия, не позволяющие исключить поражение эпителия тяжелой степени; LSIL (Low grade squamous cells intraepithelial lesion) – низкая степень плоскоклеточного интраэпителиального поражения; HSIL (High grade squamous cells intraepithelial lesion) – высокая степень плоскоклеточного интраэпителиального поражения; CIS (Carcinoma in situ) – рак in situ.
На сегодняшний день имеются убедительные доказательства, что основной причиной заболевания является инфицированность высокоонкогенными типами ВПЧ базальных эпителиальных клеток шейки матки, сопровождающаяся репликацией вирусной ДНК и синтезом ранних вирусных онкопротеинов Е5, Е6 и Е7, способных подавить клеточную дифференцировку, нарушить нормальные процессы апоптоза и пролиферации, вызвать повреждения хромосом и инициировать гиперпластические процессы в пораженной ткани вплоть до рака шейки матки [6].
В то же время известно, что наличия одной только папилломавирусной инфекции недостаточно для инициации злокачественной трансформации, необходимы другие факторы, как внутренние, так и внешние, которые играют важную роль в развитии рака шейки матки.
В последние годы открытие нетранслируемых низкомолекулярных РНК – микроРНК, регулирующих экспрессию генов на транскрипционном и посттранскрипционном уровне, кардинально изменило современную концепцию канцерогенеза шейки матки [7]. МикроРНК – короткие одноцепочечные молекулы длиной 20–25 нуклеотидов, осуществляющие регуляцию экспрессии генов на постранскрипционном уровне. Они участвуют в регуляции практически всех фундаментальных биологических процессов развития организма: делении клеток, апоптозе, дифференциации, клеточной миграции и инвазии, ангиогенезе, формировании иммунного ответа [8]. Многочисленные исследования свидетельствуют о значительной роли микроРНК в развитии онкологических заболеваний, в том числе и рака шейки матки [9, 10].
В настоящее время известно более 50 микроРНК, экспрессия которых меняется при неопластической трансформации эпителия шейки матки в процессе перехода от нормы к плоскоклеточным интраэпителиальным поражениями и цервикальному раку [11]. Развитие как предраковых, так и злокачественных процессов сопровождается повышением экспрессии проонкогенных микроРНК, усиливающих пролиферативную активность клеток, способствующих их метастазированию и инвазии, активирующих локальный ангиогенез. Одновременно снижается синтез противоопухолевых микроРНК, обеспечивающих функцию апоптоза, тормозящих процессы пролиферации, миграции, инвазии и ангиогенеза. Изучение динамики изменения экспрессии микроРНК на разных стадиях развития плоскоклеточных интраэпителиальных поражений, предоставляют новые возможности для разработки тканевых онкомаркеров с целью ранней диагностики, а также возможность использования микроРНК в качестве мишеней для противоопухолевой терапии.
В связи с этим целью настоящей работы было оценить возможность дифференциальной диагностики степени тяжести интраэпителиальных плоскоклеточных поражений шейки матки на основании количественной оценки экспрессии про- и противоо...
