Акушерство и Гинекология №3 / 2017
Дифференциальная диагностика цервикальных интраэпителиальных неоплазий различной степени тяжести на основании количественной оценки экспрессии противоонкогенных микроРНК
ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова
Минздрава России, Москва
Цель исследования. Оценить возможность дифференциальной диагностики степени тяжести неоплазии шейки матки на основании количественной оценки экспрессии противоонкогенных микроРНК: has-mir-143*-3р, has-mir-145*-3р, has-mir-199a-5р и has-mir-122-5р в соскобах шеечного эпителия.
Материал и методы. 101 женщина в возрасте от 18 до 49 лет (средний возраст 32,7±0,5 года) были разделены на 4 группы: без патологии шейки матки (30 пациенток), с плоскоклеточным интраэпителиальным поражением низкой степени (L-SIL, 32 пациентки), с плоскоклеточным интраэпителиальным поражением высокой степени (H-SIL, 26 пациенток) и с раком шейки матки (РШМ, 13 пациенток). Для постановки клинического диагноза использовали цитологический и гистологический методы исследования, расширенную кольпоскопию. Тестирование на вирус папилломы человека и измерение уровня экспрессии микроРНК проводили методом количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени.
Результаты исследования. При неопластических поражениях в эпителии шейки матки значительно снижается синтез противоонкогенных микроРНК – mir-143, mir-145 и mir-199. При этом уровень экспрессии mir-143 и mir-145 снижается пропорционально степени тяжести поражения – минимальный уровень экспрессии отмечен при РШМ. Показатели экспрессии как отдельных микроРНК, так и суммарный показатель экспрессии двух (mir-143 и mir-145) или трех (mir-143, mir-145 и mir-199) микроРНК в соскобах из шейки матки позволяют дифференцировать женщин с L-SIL, H-SIL и РШМ.
Заключение. Проведенное исследование позволяет наряду с традиционными методами рассматривать уровень экспрессии микроРНК mir-143, mir-145 и mir-199 как информативный молекулярный маркер прогнозирования степени поражения цервикального эпителия при неопластических заболеваниях шейки матки.
Рак шейки матки (РШМ) является одним из наиболее распространенных злокачественных заболеваний у женщин [1, 2]. В мире ежегодно диагностируется более 500 000 случаев РШМ, которые в половине случаев заканчиваются летально.
В последние десятилетия значительные успехи были достигнуты в понимании молекулярных механизмов канцерогенеза и развития РШМ [3, 4]. Однако полное понимание механизмов патогенеза заболевания остается невыясненным. Одной из основных причин заболевания является инфицированность высокоонкогенными типами вируса папилломы человека (ВПЧ) базальных эпителиальных клеток шейки матки, сопровождающееся синтезом ранних вирусных онкопротеинов Е5, Е6 и Е7, нарушающих процессы апоптоза и пролиферации и инициирующие гиперпластические процессы в пораженной ткани вплоть до РШМ [5, 6].
Выявление молекулярных факторов в развитии неопластической трансформации шейки матки имеет важное значение для разработки новых терапевтических мишеней для профилактики и лечения РШМ.
В последние годы была показана важная роль не транслируемых низкомолекулярных РНК – микроРНК в развитии неопластической трансформации и злокачественных опухолей [7]. МикроРНК – кроткие одноцепочечные молекулы длиной 20–25 нуклеотидов, осуществляющие регуляцию экспрессии генов на посттранскрипционном уровне. МикроРНК участвуют в регуляции большинства фундаментальных биологических процессов развития организма: делении клеток, смене фаз клеточного цикла, апоптозе, клеточной миграции и инвазии, ангиогенезе, формировании иммунного ответа [8]. Исследования последних лет свидетельствуют о наличии ассоциации изменений уровней экспрессии микроРНК с неопластическими процессами шейки матки [9]. В настоящее время определены более 50 микроРНК, экспрессия которых при неопластической трансформации эпителия шейки матки меняется в процессе перехода от нормы к цервикальной интраэпителиальной неоплазии (CIN) I и далее к CIN II, CIN III и цервикальному раку [10]. Развитие как предраковых, так и злокачественных процессов сопровождается повышением экспрессии так называемых проонкогенных микроРНК, усиливающих пролиферативную активность клеток, способствующих их метастазированию и инвазии, активирующих локальный ангиогенез. Одновременно снижается синтез противоонкогенных микроРНК, обеспечивающих функцию апоптоза, тормозящих процессы пролиферации, миграции, инвазии и ангиогенеза. Исследование динамики изменения микроРНК на разных стадиях развития цервикальной неоплазии дает перспективу для разработки маркеров ранней диагностики и терапии заболевания.
В связи с этим целью настоящей работы было оценить возможность дифференциальной диагностики степени тяжести неоплазии шейки матки на основании количественной оценки экспрессии противоонкогенных микроРНК: has-mir-143*-3р, has-mir-145*-3р, has-mir-199a-5р и has-mir-122-5р в соскобах шеечного эпителия.
Материал и методы исследования
В исследование вошла 101 женщина в возрасте от 18 до 49 лет (средний возраст 32,7±0,5 года), которые были разделены на 4 группы: без патологии шейки матки (30 пациенток), с плоскоклеточным интраэпителиальным поражением низкой степени (L-SIL, 32 пациентки), с плоскоклеточным интраэпителиальным поражением высокой степени (H-SIL, 26 пациенток) и с РШМ (13 пациенток).
Критерии включения в основную группу: женщины в возрасте от 18 до 49 лет, предраковые заболевания шейки матки и РШМ, подтвержденные морфологическими методами диагностики. Критерии исключения: беременность, отсутствие возможного следования протоколу. Среднее время наблюдения за пациентами составило 15,8 месяца. Комплексное обследование женщин включало сбор жалоб, анамнеза, оценку гинекологического статуса (наличие патологических процессов аногенитальной области, слизистой влагалища и шейки...
