Динамика показателей системного и локального иммунитета в процессе лечения больных раком желудка

Обоснование. За последние 20–30 лет достигнуты большие успехи в терапии рака желудка (РЖ). Важным этапом в разработке новых терапевтических агентов стало понимание роли прогностических и предиктивных факторов, включая значение субпопуляционного состава иммунокомпетентных клеток и биологии опухоли.
Цель исследования: изучить состояние системного и локального иммунитета до и в процессе лекарственного лечения больных аденокарциномой желудка.
Методы. С 2017 по 2018 г. в ФГБУ НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина 20 первичных метастатических больных аденокарциномой желудка получили лекарственную терапию. Забор биологического материала (периферической крови, опухолевой ткани) осуществлялся двукратно (перед лечением и во время первого контрольного обследования через три курса). С помощью метода проточной цитометрии оценивали степень инфильтрации опухолевой ткани лимфоцитами (CD45+CD14-TILs); Т-клеток (CD3+CD19-TILs); В-клеток (CD3-CD19+TILs); NK-клеток (CD3-CD16+CD56+TILs); CD16- и CD8-эффекторных клеток и их цитотоксического потенциала (ЦТП) (CD16+Perforin+TILs; CD16ЦТПTILs), (CD8+Perforin+TILs; CD8ЦТПTILs); регуляторных Т-клеток – NKT-клеток (CD3+CD16+CD56+TILs), CD4- (CD4+CD25+CD127-TILs) и CD8- (CD8+CD11b-CD28-TILs) регуляторных клеток и параметры системного и локального иммунитета.
Результаты. Фактором благоприятного прогноза выживаемости без прогрессирования (ВБП у пациентов с метастатическим раком желудка [мРЖ] в периферической крови стало повышение числа CD8+-Т-регуляторных клеток (5,1–12,1%; р=0,019), в опухолевой ткани – повышение перфоринового потенциала эффекторных CD16-клеток (0,5–4,9%; р=0,030) и их цитотоксического потенциала (13,2–55,7%; р=0,011). При оценке характера изменения показателей локального иммунитета в процессе ХТ отмечено негативное влияние увеличения содержания Т-клеток (22,0– -9,7%; р=0,012), NKT-клеток (207,9– -13,8%; р=0,002) и CD4+ Т-регуляторных клеток (190,7– -25,2%; р=0,002). Напротив, увеличение уровня эффекторных CD16-клеток в процессе ХТ увеличивает вероятность пережить ВБП 9 месяцев (-69,5–9,1%; р=0,013).
Выводы. Показатели локального и системного иммунитета служат дополнительным прогностическим фактором при РЖ.

Введение

Рак желудка (РЖ) занимает 5-е место среди онкологических заболеваний (1,313 млн случаев) и служит 3-й причиной смертности от рака (819 тыс. случаев смерти) в мире [1]. В настоящее время не вызывает сомнений, что злокачественная опухоль – это динамическая система, рассматриваемая в комплексе со всеми морфологическими составляющими, формирующими ее микроокружение: клетки стромы, клетки системы иммунитета, кровеносные, лимфатические сосуды и экстрацеллюлярный матрикс [1, 2]. Опухоль-инфильтрирующие лимфоциты (TILs – tumor-infiltrating lymphocytes) предсталяются объектом активного изучения [3–5]. Им отводится ключевая роль в концепции противоопухолевого иммунитета. Кроме этого клетки системного иммунитета как отвечают за подавление опухолевого роста [6], так и, напротив, коррелируют с неблагоприятным прогнозом [7, 8]. Таким образом, за последние 20–30 лет достигнуты большие успехи в терапии РЖ. Важным этапом в разработке новых терапевтических агентов стало понимание роли прогностических и предиктивных факторов, включая значение субпопуляционного состава иммунокомпетентных клеток и биологии опухоли.

Целью данной работы стало комплексное изучение структуры TILs, системного иммунитета до и в процессе лечения метастатических больных аденокарциномой желудка.

Методы

В проспективное исследование были включены больные метастатическим РЖ (мРЖ), проходившие лечение в ФГБУ НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина с 2017 по 2018 г. Пациентам проведено 9 двухнедельных циклов химиотерапии (ХТ) I линии либо 6 трехнедельных курсов с последующим наблюдением до прогрессирования болезни. Анализ иммунного статуса по морфологическому материалу и периферической крови осуществлен дважды (до начала лечения и после 3–4 курсов ХТ).

Основные критерии включения пациентов в исследование: возраст старше 18 лет, морфологическая верификация опухоли – аденокарцинома желудка вне зависимости от стадии заболевания. Основные критерии исключения: наличие в анамнезе воспалительных заболеваний за последние 3 месяца, поддерживающая антибактериальная и иммуномодулирующая терапия на момент включения в исследование.

Анализ показателей субпопуляций лимфоцитов периферической крови и опухолевой ткани осуществлен методом проточной цитометрии в целях определения структуры иммунных клеток: степени инфильтрации опухолевой ткани лимфоцитами (CD45+CD14-TILs); Т-клеток (CD3+CD19-TILs); В-клеток (CD3-CD19+TILs); NK-клеток (CD3-CD16+CD56+TILs); эффекторных клеток CD16 (CD16+Perforin+TILs), CD8 (CD8+Perforin+TILs) и их цитотоксического потенциала – CD16ЦТПTILs и CD8ЦТПTILs; субпопуляций регуляторных Т-клеток – NKT-клеток (CD3+CD16+CD56+TILs), регуляторных CD4-- (CD4+CD25+CD127-TILs) и CD8-- (CD8+CD11b-CD28-TILs) клеток, а также данных показателей клеточного иммунитета.

Проточно-цитометрический анализ

Структуру субпопуляций иммунокомпетентных клеток оценивали по связыванию с моноклональными антителами различной специфичности методом многопараметрового количественного анализа на проточном цитометре FACSCalibur (BD Biosciences). Для каждого образца анализировали не менее 500–5000 клеток в CD45+-гейте. Использовали DotPlot-анализ цитограмм с коммерческим программным обеспечением BD CellQuest PRO software (BD Biosciences). Дальнейшую обработку FSC-файлов первичных цитометрических данных проводили с использованием программного пакета WinMDI, версия 2.8.

Статистическая обработка материала и расчеты показателей проведены с использованием статистического пакета программ Statistica for Windows v.10 и SPSS v.21. Достоверность различий между количественными показателями вычисляли по t-критерию Стьюдента для нормально распределенных величин или по непараметрическим критериям Манна–Уитни и Вилкоксона. Для сравнения качественных двух параметров применяли точный критерий Фишера и χ2-критерий. Различия считали значимыми при p<0,05 (95% точности). Степень взаимосвязи параметров оценивали с помощью корреляционного анализа по Спирмену.

Статистическая обработка материала и расчеты показателей проведены с использованием статистического пакета лицензионных программ Statistica для Windows v.10 (однофакторный анализ, корреляционный анализ по Спирмену, описательная статистика сравнения количественных показателей по Манну–Уитни, анализ Каплана–Майера) и SPSS v.21 (ROC-кривые, многофакторный анализ). Количественные переменные отклонялись от нормального распределения (тест Колмогорова–Смирнова) и представлены медианой с указанием 25-го и 75-го квартилей. Категориальные переменные выражали в процентах и абсолютных значениях.

Статистическую значимость различий между количественными показателями вычисляли по t-критерию Стьюдента, по непараметрическим критериям Манна–Уитни и Вилкоксона. Для сравнения качественных параметров применяли точный критерий Фишера и χ2-критерий. Различия считали значимыми при p<0,05 (допустимый уровень α-ошибки – 5%). Степень взаимосвязи параметров оценивали с помощью корреляционного анализа по Спирмену. О...

Г.Г. Хакимова, А.А. Трякин, Т.Н. Заботина