Эффективность диагностики цервикальной интраэпителиальной неоплазии шейки матки с использованием комплекса методов: жидкостной цитологии, двойного иммуноокрашивания p16/Ki67 и ВПЧ тестирования

Цель исследования. Оценка эффективности двойного окрашивания p16/Ki67 в сочетании с жидкостной цитологией и тестированием вируса папилломы человека (ВПЧ) при выявлении цервикальной интраэпителиальной неоплазии (CIN) шейки матки.
Материал и методы. Обследовали цитологический и биопсийный материал 148 женщин с патологией шейки матки методами жидкостной цитологии, двойного иммуноокрашивания р16/Ki67 и ВПЧ-тестирования.
Результаты. Максимальную эффективность цитологического метода выявили в случаях ≥CIN2 (чувствительность 96,97% и специфичность 100%), ВПЧ-тестирования – < CIN2 (97,14%,50,0%), иммуноцитохимического метода (ИЦХ) – ≥CIN2 (98,48%, 100,0%).
Заключение. Эффективное использование всех трех методов выявления патологии шейки матки – цитологии, ВПЧ-тестирования и ИЦХ позволяет максимально решить проблему не только диагностики, но и скрининга предрака и рака шейки матки.

Диагностика предраковой патологии шейки матки на стадии интраэпителиальной неоплазии является глобальной актуальной проблемой. Это продиктовано, во-первых, высокой распространенностью рака шейки матки, показатели заболеваемости которым занимают третье место в мире среди женщин репродуктивного возраста [1]; во-вторых, диагностика на стадии цервикальной интраэпителиальной неоплазии (CIN) дает врачу время (10–15 лет) для лечения пациентки и предотвращения развития рака. Следовательно, разработка методов и систем ранней диагностики CIN является первостепенной задачей здравоохранения.

Для ранней диагностики CIN широко применяют цитологический метод – Pap-тест и молекулярные методы выявления ДНК вируса папилломы человека (ВПЧ) [2, 3]. Каждый метод имеет свои сильные и слабые стороны. Цитологический метод, прежде всего жидкостная цитология, отличается повышенной специфичностью, ДНК-тесты – высокой чувствительностью [4, 5]. Недостаточная специфичность ДНК-тестов, особенно у женщин до 30 лет, обусловлена тем фактом, что большая часть ВПЧ инфекций носит транзиторный характер, и лишь 5–10% имеет персистентный статус, вызывая глубокие необратимые неопластические процессы в шейке матки [6].

Поиск новых маркеров патологии шейки матки привел исследователей к белку р16(INK4A) [7, 8], который является продуктом гена CDKN2A и подавляет активность циклин-зависимых киназ 4 и 6, которые регулируют G1-фазу клеточного цикла. Экспрессия этого белка в нормальных клетках ограничена. При ВПЧ-инфекции онкобелок Е7 связывается с белком супрессором опухолей ретинобластомой (Rb), что приводит к деградации последней и, как следствие, к избыточной экспрессии р16 [9]. Выявление атипичных клеток плоского эпителия шейки матки, экспрессирующих одновременно р16 и маркер пролиферации Ki67, указывает на индуцированное дисрегулирование клеточного цикла и обеспечивает более точную диагностику поражений высокой степени тяжести. Первые исследования по определению р16 и Ki67 показали высокую специфичность метода [10]. В связи с этим в настоящее время в Европе проводится многоцентровое исследование по оценке чувствительности и специфичности иммуноцитохимического (ИЦХ) выявления р16/Ki67 в сочетании с цитологией и ВПЧ-тестированием.

Выявление ДНК ВПЧ в настоящее время проводится с помощью реакции гибридизации вирусной ДНК с РНК-зондом (Digene-тест), полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (cobas-тест) и другими способами.

Данные о специфичности и чувствительности всех перечисленных методов неоднозначны.

Целью данной работы была оценка эффективности двойного окрашивания p16/Ki-67 в сочетании с жидкостной цитологией и ВПЧ-тестированием при выявлении CIN.

Материал и методы исследования

Проведено клинико-морфологическое исследование материала, полученного от 4443 женщин, проходивших обследование и лечение в ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России за 2013 г. Обследованные женщины были в возрасте от 17 до 42 лет (средний возраст 28,3±4,5 года). Обследование проводили по общепринятому протоколу: клинический осмотр, взятие мазков в SurePath виалы (BD, США), приготовление цитологических препаратов, окрашенных по Папаниколау, с помощью TriPath процессора (BD, США), оценка мазков по системе «Bethesda» [11]. В 148 случаях с выявленной патологией шейки матки помимо цитологического анализа проводили молекулярно-биологическое исследование с целью изучения экспрессии маркеров p16/Ki-67 в цитологических препаратах, приготовленных из остаточного материала виал. Кроме того, выполняли кольпоскопию с прицельным взятием измененных или подозрительных участков цервикального канала для гистологического исследования и в случаях диагноза ≥CIN2 проводили конизацию шейки матки (67 пациенток). Гисто...

Коган Е.А., Файзуллина Н.М., Ли Ц., Демура Т.А., Козаченко А.В.