Акушерство и Гинекология №5 / 2016
Экспериментальное обоснование эндотелиопротективного эффекта иммуноглобулинов для внутривенного введения при акушерской патологии
ФГНУ Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии им Д.О. Отта, Санкт-Петербург, Россия
Цель исследования. Оценка цитопротективного эффекта иммуноглобулинов для внутривенного введения (ВВИГ) в отношении эндотелиальных клеток.
Материал и методы. Проведено исследование цитотоксических эффектов сывороток 45 беременных женщин в отношении эндотелиальных клеток, обработанных препаратом иммуноглобулинов для внутривенного введения, с помощью культурального, иммуноферментного метода и метода проточной цитометрии.
Результаты. После обработки эндотелиальных клеток ВВИГ выявлено снижение цитотоксического эффекта сыворотки крови женщин с привычным невынашиванием беременности в отношении эндотелиальных клеток.
Заключение. ВВИГ являются эффективными цитопротекторами, которые способны предотвратить развитие патологических состояний, связанных с повреждением эндотелия и развитием эндотелиальной дисфункции.
Аутоиммунные синдромы занимают важное место в развитии различных форм акушерской патологии. Среди аутоиммунных нарушений, приводящих к потере беременности, ведущее место занимает антифосфолипидный синдром (АФС) [1, 2]. Патогенез практически всех клинических проявлений антифосфолипидного синдрома реализуется в результате нарушений микроциркуляции, гемостаза и патологии сосудистой стенки [3]. При этом одним из самых уязвимых мест являются эндотелиальные клетки [4]. Занимая уникальное положение на границе между циркулирующей кровью и тканями, эндотелиальные клетки подвергаются воздействию различных факторов, находящихся в системном и тканевом кровотоке [5]. При действии на сосудистый эндотелий антифосфолипидных антител, компонентов комплемента, гипоксии, повышенного артериального давления, наблюдаемых в патогенезе АФС, преэклампсии, атеросклероза, происходит гиперэкспрессия клеточных молекул адгезии [6], увеличивается высвобождение вазоконстрикторных субстанций, повышающих сосудистый тонус, агрегацию тромбоцитов и свертывание крови, таких как эндотелин-1, тромбоксан и др. [7]. Параллельно развивается системная эндотелиальная дисфункция, которая характеризуется дисбалансом между различными эндотелиальными медиаторами (вазодилататоры – вазоконстрикторы, анти- и прокоагуянты) [8], происходит нарушение функции эндотелия, приводящее к усиленной адгезии и агрегации тромбоцитов, внутрисосудистому тромбозу в маточно-плацентарном комплексе, что является интегральным этиопатогенетическим фактором большинства акушерских патологий [9].
Оптимальным для профилактики повторных потерь плода, а также венозных и артериальных тромбозов считается сочетанное применение низких доз ацетилсалициловой кислоты и низкомолекулярных гепаринов [10]. Но даже при проведении такой терапии, неблагоприятные исходы беременности у женщин с АФС до сих пор варьируют в пределах 20–30% случаев [11]. Наиболее эффективным методом терапии АФС при беременности является использование иммуноглобулинов для внутривенного введения (ВВИГ) [12, 13], поскольку использование других препаратов, в частности, подавляющих синтез аутоантител ограничено. Следует отметить, что ВВИГ могут быть использованы и при других заболеваниях, связанных с повреждением эндотелия и формированием эндотелиальной дисфункции [14].
АФС на сегодняшний день не включен в список показаний к применению ВВИГ, их использование при данной нозологии находится за пределами инструкций («off-label») [15], так как имеющиеся данные пока еще не дают однозначного ответа на вопрос об использовании этих препаратов при данном виде патологии [16, 17]. Требуются дополнительные исследования, обосновывающие их использование в акушерской и терапевтической практике.
Целью настоящего исследования явилась оценка цитопротективного эффекта ВВИГ в отношении эндотелиальных клеток линии EA.Hy926.
Материал и методы исследования
Проведена оценка цитотоксических эффектов сывороток 45 беременных женщин на сроке до 12 недель, которых разделили на группы: беременные женщины с диагнозом привычное невынашивание и выявленными антифосфолипидными антителами; беременные женщины с диагнозом привычное невынашивание без повышенного уровня антифосфолипидных антител; женщины с физиологической беременностью.
Критериями включения в исследование были: репродуктивный возраст женщин с антифосфолипидными антителами; наличие в анамнезе невынашивания беременности; I триместр беременности. Критериями исключения были: почечная, печеночная недостаточность; пороки развития и доброкачественные новообразования матки; наличие эндокринных, генетических или инфекционных факторов невынашивания.
У пациенток забирали кровь из локтевой вены. Кровь центрифугировали, сыворотки отбирали в стерильных условиях и замораживали при температуре -20ºС.
В сыворотках периферической крови определяли уровень антифосфолипидных антител (к кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу, фосфатидиловой кислоте), антител к β2-гликопротеину-I, антител к аннексину V, к протромбину методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием коммерческих тест-систем фирмы Orgentec Diagnostika GmbH (Германия).
Объектом исследования явились эндотелиальные клетки линии EA.Hy926, полученные путем гибридизации первичной эндотелиальной линии HUVEC с клетками карциномы легкого A-549. Клетки линии EA.Нy926 воспроизводят все основные...
