Акушерство и Гинекология №1 / 2013

Экспрессия генов, регулирующих апоптоз, при разных типах гиперплазии эндометрия и эндометриоидной карциноме

1 февраля 2013

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России, Москва, Россия

Цель исследования: определение клинической значимости экспрессии мРНК генов, участвующих в процессах апоптоза, и гена-супрессора опухолевого роста PTEN при разных типах гиперплазии эндометрия и эндометриоидной карциноме. Материал и методы. Проведено клинико-лабораторное обследование и взятие образцов ткани эндометрия у 133 женщин. Основную группу составили 64 пациентки с гиперплазией эндометрия (31 – с простой, 18 – с комплексной, 15 – с атипической), группу сравнения – 22 пациентки с эндометриоидной карциномой, группу контроля – 47 женщин с морфологически неизмененным эндометрием стадии пролиферации (n=26) или стадии секреции (n=21). Методом ОТ-ПЦР произведено изучение экспрессии мРНК генов апоптоза: ингибиторов – BCL2, BAG1, BIRC5 и индукторов – BAX, NDRG1. Экспрессия гена PTEN определялась двумя независимыми методами (ОТ-ПЦР и иммуногистохимическим). Результаты исследования. Использование метода ОТ-ПЦР не позволило выявить достоверных различий в экспрессии изученных генов-регуляторов апоптоза между различными типами гиперплазии эндометрия. Достоверное снижение экспрессии мРНК гена NDRG1, PTEN и индекса NDRG1/BIRC5 выявлено в ткани эндометриоидной карциномы по сравнению с гиперплазией и морфологически неизмененным эндометрием (р<0,05). Результаты иммуногистохимического исследования подтвердили полученную закономерность, потеря экспрессии PTEN установлена в 45,4% образцов ткани эндометрия при эндометриоидной карциноме эндометрия. Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о вероятной роли запрограмированной гибели клеток в развитии эндометриоидной карциномы эндометрия. Уменьшение экспрессии мРНК гена NDRG1, PTEN, индекса NDRG1/BIRC5, предположительно, можно рассматривать в качестве молекулярно-генетических предикторов риска раковой трансформации эндометрия.

Работа частично поддержана Государственным контрактом Министерства образования и науки РФ №16.512.11.2093 от 22.02.2011.

Высокая распространенность и рецидивирующее течение гиперплазии эндометрия (ГЭ), сопряженность с маточными кровотечениями и риском развития рака эндометрия свидетельствуют о необходимости развития данного направления. Успехи молекулярной биологии и медицинской генетики, достигнутые в последние годы, существенно расширили спектр методических возможностей для проведения научных исследований. Один из ключевых вопросов гинекологии и онко гинекологии – это поиск молекулярно-генетических предикторов формирования ГЭ и эндометриоидной карциномы (ЭК). Его решение позволило бы определить риск возникновения этих заболеваний и направленность последующего их развития. Это во многом способствовало бы объективизации тактики ведения больных.

Многофакторность генеза ГЭ значительно затрудняет разработку методов профилактики и лечения. Основные патофизиологические механизмы возникновения ГЭ сводятся к следующим: чрезмерное воздействие эстрогенов при недостатке прогестерона, нарушение экспрессии рецепторов половых стероидных гормонов, повышение ангиогенеза, дискоординация между пролиферацией и апоптозом и многие другие. Ряд авторов предполагают, что развитию ГЭ способствует чрезмерная пролиферации эндометрия [1, 2]. Это подтверждается увеличением экспрессии PCNA (proliferating cell nuclear antigen) – маркера, отражающего процессы репарации ДНК в пролиферирующих клетках. [3, 4]. Результаты целого ряда других исследований опровергают эту точку зрения, указывают на снижение пролиферативной активности при простой ГЭ (ПГЭ) по экспрессии

Ki-67 [4–6]. Таким образом, вопрос о роли пролиферации в генезе ГЭ остается до настоящего времени дискуссионным. Патогенетические механизмы возникновения ГЭ такжк принято рассматривать с позиций потери клетками способности вступать в апоптоз в ответ на проапоптотические стимулы. Известно, что это приводит к снижению запрограмированной клеточной гибели и накоплению трансформированных клеток. Если ранее апоптоз оценивался, в основном, по активности Ca2+-Mg2+- зависимой эндонуклеазы (фермента, участвующего в фрагментации ДНК), то в последние годы все большее внимание уделяется экспрессии проапоптотических и антиапоптотических белков, фрагментации ДНК методом TUNEL-теста. Наиболее изученными проапоптотическими факторами считаются – BAX, Bad, Bak, антиапоптотическими – BCL2, BCL-XL, BAG1 [7–9]. С точки зрения диагностики информативным считается соотношение BCL2 к BAX, так называемый апоптотический индекc [6]. Ряд авторов указывают на снижение этого индекса при разных типах ГЭ и, особенно при ЭК, по сравнению с морфологически неизмененным эндометрием [10, 11]. Другие исследователи выявили противоположную закономерность [12, 13]. Представляется, что разноречивость мнений связана с несовершенством классификации и трудностями диагностики разных типов ГЭ, а также различием методических подходов и воззрений.

В последние годы появилась реальная возмож ность определять экспрессию ряда новых генов – регуляторов клеточного роста. К ним относят ген, ингибирующий функцию протоонкогена N-myc (NDRG1 – N-myc downstream regulated gene). Считается, что белок этого гена необходим для активации ряда каспаз при р53 опосредованном апоптозе, этим объясняют его проапоптотические свойства [14]. Предположительно, в регуляции клеточного развития принимает участие ген сурвивин (BIRC5 – baculoviral IAP repeat-containing protein 5), ему приписывают антиапоптотический эффект [15]. Так ли это, окончательно не ясно, особенно при ГЭ. Приходится ориентироваться на результаты малочисленных и разноплановых исследований [16]. Пока не удалось однозначно оценить вклад этих факторов в развитие гипер- и неопластических процессов эндометрия. Хотя этот вопрос представляется важным и интересным. Проблема развития гипер- и неопластических процессов эндометрия крайне сложна, к числу регуляторов пролиферации и апоптоза также относят ген-супрессор опухолевого роста PTEN (phosphatase and tensin homologue deleted from chromosome 10). Большинство работ посвящено изучению его экспрессии при раке эндометрия [17], в то же время вопрос о его прогностической роли при ГЭ остается недостаточно изученным, хотя представляется весьма перспективным.

Таким образом, несмотря на интенсивный поиск молекулярно-генетических маркеров ГЭ, пока невозможно выбрать информативные прогностические факторы формирования и развития заболевания.

Измерение уровней экспрессии мРНК генов BCL2, BAX, BAG1, BIRC5, NDRG1, PTEN и четырех референсных генов B2M, TBP, GUSB, HPRT1 проводили методом количественной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с предварительной стадией обратной транскрипции (ОТ-ПЦР), согласно инструкции (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия). Взятие материала осуществляли аспирационной кюреткой Пайпель де Корнье в пробирки со средой для стабилизации РНК. Для количественной оценки уровня экспрессии мРНК...

Чернуха Г.Е., Думановская М.Р., Бурменская О.В, Шубина Е.С., Коган Е.А., Трофимов Д.Ю.
Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.