Экспрессия генов, регулирующих апоптоз, при разных типах гиперплазии эндометрия и эндометриоидной карциноме

Цель исследования: определение клинической значимости экспрессии мРНК генов, участвующих в процессах апоптоза, и гена-супрессора опухолевого роста PTEN при разных типах гиперплазии эндометрия и эндометриоидной карциноме. Материал и методы. Проведено клинико-лабораторное обследование и взятие образцов ткани эндометрия у 133 женщин. Основную группу составили 64 пациентки с гиперплазией эндометрия (31 – с простой, 18 – с комплексной, 15 – с атипической), группу сравнения – 22 пациентки с эндометриоидной карциномой, группу контроля – 47 женщин с морфологически неизмененным эндометрием стадии пролиферации (n=26) или стадии секреции (n=21). Методом ОТ-ПЦР произведено изучение экспрессии мРНК генов апоптоза: ингибиторов – BCL2, BAG1, BIRC5 и индукторов – BAX, NDRG1. Экспрессия гена PTEN определялась двумя независимыми методами (ОТ-ПЦР и иммуногистохимическим). Результаты исследования. Использование метода ОТ-ПЦР не позволило выявить достоверных различий в экспрессии изученных генов-регуляторов апоптоза между различными типами гиперплазии эндометрия. Достоверное снижение экспрессии мРНК гена NDRG1, PTEN и индекса NDRG1/BIRC5 выявлено в ткани эндометриоидной карциномы по сравнению с гиперплазией и морфологически неизмененным эндометрием (р<0,05). Результаты иммуногистохимического исследования подтвердили полученную закономерность, потеря экспрессии PTEN установлена в 45,4% образцов ткани эндометрия при эндометриоидной карциноме эндометрия. Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о вероятной роли запрограмированной гибели клеток в развитии эндометриоидной карциномы эндометрия. Уменьшение экспрессии мРНК гена NDRG1, PTEN, индекса NDRG1/BIRC5, предположительно, можно рассматривать в качестве молекулярно-генетических предикторов риска раковой трансформации эндометрия.

Работа частично поддержана Государственным контрактом Министерства образования и науки РФ №16.512.11.2093 от 22.02.2011.

Высокая распространенность и рецидивирующее течение гиперплазии эндометрия (ГЭ), сопряженность с маточными кровотечениями и риском развития рака эндометрия свидетельствуют о необходимости развития данного направления. Успехи молекулярной биологии и медицинской генетики, достигнутые в последние годы, существенно расширили спектр методических возможностей для проведения научных исследований. Один из ключевых вопросов гинекологии и онко гинекологии – это поиск молекулярно-генетических предикторов формирования ГЭ и эндометриоидной карциномы (ЭК). Его решение позволило бы определить риск возникновения этих заболеваний и направленность последующего их развития. Это во многом способствовало бы объективизации тактики ведения больных.

Многофакторность генеза ГЭ значительно затрудняет разработку методов профилактики и лечения. Основные патофизиологические механизмы возникновения ГЭ сводятся к следующим: чрезмерное воздействие эстрогенов при недостатке прогестерона, нарушение экспрессии рецепторов половых стероидных гормонов, повышение ангиогенеза, дискоординация между пролиферацией и апоптозом и многие другие. Ряд авторов предполагают, что развитию ГЭ способствует чрезмерная пролиферации эндометрия [1, 2]. Это подтверждается увеличением экспрессии PCNA (proliferating cell nuclear antigen) – маркера, отражающего процессы репарации ДНК в пролиферирующих клетках. [3, 4]. Результаты целого ряда других исследований опровергают эту точку зрения, указывают на снижение пролиферативной активности при простой ГЭ (ПГЭ) по экспрессии

Ki-67 [4–6]. Таким образом, вопрос о роли пролиферации в генезе ГЭ остается до настоящего времени дискуссионным. Патогенетические механизмы возникновения ГЭ такжк принято рассматривать с позиций потери клетками способности вступать в апоптоз в ответ на проапоптотические стимулы. Известно, что это приводит к снижению запрограмированной клеточной гибели и накоплению трансформированных клеток. Если ранее апоптоз оценивался, в основном, по активности Ca2+-Mg2+- зависимой эндонуклеазы (фермента, участвующего в фрагментации ДНК), то в последние годы все большее внимание уделяется экспрессии проапоптотических и антиапоптотических белков, фрагментации ДНК методом TUNEL-теста. Наиболее изученными проапоптотическими факторами считаются – BAX, Bad, Bak, антиапоптотическими – BCL2, BCL-XL, BAG1 [7–9]. С точки зрения диагностики информативным считается соотношение BCL2 к BAX, так называемый апоптотический индекc [6]. Ряд авторов указывают на снижение этого индекса при разных типах ГЭ и, особенно при ЭК, по сравнению с морфологически неизмененным эндометрием [10, 11]. Другие исследователи выявили противоположную закономерность [12, 13]. Представляется, что разноречивость мнений связана с несовершенством классификации и трудностями диагностики разных типов ГЭ, а также различием методических подходов и воззрений.

В последние годы появилась реальная возмож ность определять экспрессию ряда новых генов – регуляторов клеточного роста. К ним относят ген, ингибирующий функцию протоонкогена N-myc (NDRG1 – N-myc downstream regulated gene). Считается, что белок этого гена необходим для активации ряда каспаз при р53 опосредованном апоптозе, этим объясняют его проапоптотические свойства [14]. Предположительно, в регуляции клеточного развития принимает участие ген сурвивин (BIRC5 – baculoviral IAP repeat-containing protein 5), ему приписывают антиапоптотический эффект [15]. Так ли это, окончательно не ясно, особенно при ГЭ. Приходится ориентироваться на результаты малочисленных и разноплановых исследований [16]. Пока не удалось однозначно оценить вклад этих факторов в развитие гипер- и неопластических процессов эндометрия. Хотя этот вопрос представляется важным и интересным. Проблема развития гипер- и неопластических процессов эндометрия крайне сложна, к числу регуляторов пролиферации и апоптоза также относят ген-супрессор опухолевого роста PTEN (phosphatase and tensin homologue deleted from chromosome 10). Большинство работ посвящено изучению его экспрессии при раке эндометрия [17], в то же время вопрос о его прогностической роли при ГЭ остается недостаточно изученным, хотя представляется весьма перспективным.

Таким образом, несмотря на интенсивный поиск молекулярно-генетических маркеров ГЭ, пока невозможно выбрать информативные прогностические факторы формирования и развития заболевания.

Измерение уровней экспрессии мРНК генов BCL2, BAX, BAG1, BIRC5, NDRG1, PTEN и четырех референсных генов B2M, TBP, GUSB, HPRT1 проводили методом количественной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с предварительной стадией обратной транскрипции (ОТ-ПЦР), согласно инструкции (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия). Взятие материала осуществляли аспирационной кюреткой Пайпель де Корнье в пробирки со средой для стабилизации РНК. Для количественной оценки уровня экспрессии мРНК...

Чернуха Г.Е., Думановская М.Р., Бурменская О.В, Шубина Е.С., Коган Е.А., Трофимов Д.Ю.