Фенотипическая характеристика субпопуляций клеток врожденного иммунитета в периферической крови женщин с эндометриозом до и после хирургического лечения

Цель: Изучение особенностей фенотипа субпопуляций клеток врожденного иммунитета у женщин с эндометриозом до и после комплексной терапии, включившей хирургическое лечение. Материалы и методы: Проведено клиническое и иммунологическое исследование женщин с эндометриозом I–II (n=12) и III–IV (n=28) степени распространения до и после комплексной терапии, включающей хирургическое лечение. Методом проточной цитометрии фенотипировали мононуклеарные клетки перитонеальной жидкости, полученные интраоперационно, и клетки периферической крови, взятые до и через 6 месяцев после хирургической операции (n=15). Результаты: В перитонеальной жидкости женщин с эндометриозом по сравнению с контролем снижены доли TCRγδ-клеток (р<0,001) и Т-регуляторных клеток с фенотипом CD4+CD25+CD127low/- (Тreg-клеток) (р=0,028), а по сравнению с содержанием в периферической крови выявлено уменьшение доли цитотоксических СD3-CD56+CD16+-NK-клеток (р<0,001), увеличение доли регуляторных CD56brightCD16dim-NK-клеток (р=0,005). В периферической крови по сравнению с контролем также уменьшена доля Тreg-клеток (р=0,028), кроме того, увеличен нейтрофильно-лимфоцитарный индекс (р=0,022), уменьшена доля CD14highCD16low-классических моноцитов (р=0,017) и увеличена доля неклассических (р=0,009). Через 6 месяцев после операции в периферической крови общее содержание лейкоцитов, нейтрофильно-лимфоцитарный индекс и доля Тreg-клеток значимо отличаются от исходных значений (р=0,008, р=0,017 и р=0,001 соответственно), не отличаясь от контрольных значений. Заключение: Нарушение в соотношении регуляторных и цитотоксических субпопуляций в большей степени проявляется на локальном уровне, по сравнению с системным. Тем не менее, после комплексного лечения, включающего оперативное вмешательство, выявлена очевидная тенденция к нормализации измененных показателей в периферической крови на фоне улучшения клинической картины, в частности, выражающейся в исчезновении болевого синдрома.

Эндометриоз, являясь одной из актуальных проблем гинекологии, представляет собой патологию, характеризующуюся эстроген-зависимым ростом вне матки ткани, подобной эндометрию, которая встречается у 7–10% женщин. Сложное заболевание, обычно сопровождающееся хронической болью в тазу, болезненными менструациями, усталостью и часто бесплодием, оказывает существенное влияние на качество жизни женщины. Основными критическими механизмами, приводящими к возникновению эндометриоза, считаются избыточная продукция эстрадиола, резистентность к прогестерону, увеличение продукции провоспалительных цитокинов и недостаточная способность иммунных клеток подавлять воспалительный ответ [1]. Диагноз генитального эндометриоза обычно устанавливается при лапароскопической оценке малого таза, а лечение бывает комплексным с применением гормональной терапии и хирургического вмешательства. Многие вопросы, касающиеся патогенеза и терапии эндометриоза, остаются недостаточно изучены, хотя выполнено большое количество научных и клинических исследований [2–4].

Развитие эндометриоза в настоящее время связывают с комплексом патологических изменений, ассоциирующихся с генетическими/эпигенетическими, гормональными, иммунологическими и другими факторами. У женщин с эндометриозом выявлены изменения в содержании разных популяций иммунных клеток и в их функциональной активности, свидетельствующие об активном участии иммунной системы в патогенезе эндометриоза [5–9]. Клетки и гуморальные факторы системы врожденного иммунитета, который направлен на поддержание и сохранение гомеостаза, выполняют эффекторную и регуляторную функции, а также участвуют в запуске адаптивного иммунитета.

Функциональная направленность клеток определяется их фенотипом. Так, субпопуляции NK-клеток, в зависимости от интенсивности экспрессии тех или других рецепторов, проявляют преимущественно регуляторную способность (CD56brightCD16dim\--NK-клетки) или цитотоксическую активность (CD56dim\-CD16bright-NK-клетки) [10–12]. Регуляторной способностью обладают экспрессирующие Т-клеточный рецептор (TCR), в основном αβTCR, NKT-клетки (CD3+CD56+16+-NK-клетки) и субпопуляция, экспрессирующая γδTCR (CD56γδTCR-NK-клетки).

Находящиеся в кровотоке и перитонеальной жидкости моноциты, являются предшественниками макрофагов, которые играют важную роль при воспалении, травмах и развитии неопластических процессов [13–16]. В зависимости от интенсивности экспрессии молекул CD14 и CD16 выделяют две основные субпопуляции: CD14highCD16low (или CD14++CD16-, классическая) и CD14+/lowCD16high (или CD14+CD16++, неклассическая), а также промежуточную субпопуляцию (CD14highCD16+, или CD14++CD16+) [17, 18].

Основные исследования при эндометриозе клеток врожденного иммунитета, таких как NK-клетки и моноциты/макрофаги, посвящены изучению их функциональных свойств. Показано ослабление процесса фагоцитоза у перитонеальных макрофагов, понижение цитотоксической активности NK-клеток, положительно коррелирующих с тяжестью заболевания [7, 19]. Однако у женщин с эндометриозом недостаточно охарактеризованы фенотипические характеристики и соотношение субпопуляций этих клеток после хирургического лечения эндометриоза.

Цель данного исследования состояла в изучении особенностей фенотипа клеток врожденного иммунитета у женщин с эндометриозом до и через 6 месяцев после комплексной терапии, включившей хирургическое лечение.

Материалы и методы

В проспективное исследование были включены пациентки, наблюдавшиеся и оперированные в гинекологическом отделении ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» МЗ РФ. Группу исследования составили 40 пациенток с наружным генитальным эндометриозом (НГЭ), подтвержденным данными УЗИ и/или МРТ, а также впоследствии обзорным гистологическим исследованием удаленных очагов эндометриоза для верификации диагноза. Женщины с эндометриозом разделены на 2 группы в соответствии со степенью распространения поражения: 12 пациенток с I–II степенью распространения эндометриоза (ЭМ-1) и 28 пациенток с III–IV степенью (ЭМ-2). 15 пациенток (7 прак­тически здоровых фертильных женщин и 8 женщин с неполной внутриматочной перегородкой, без воспалительных и пролиферативных гинекологических заболеваний, с отсутствием генитального эндометриоза, что подтверждено лапароскопически), составили контрольную группу (К).

Критерии включения в группы исследования: возраст пациенток 18–45 лет; подтвержденный диагноз НГЭ; подписанное информированное согласие на участие в исследовании. Критерии исключения: пациентки со злокачественными новообразованиями, острыми воспалительными заболеваниями органов малого таза, с тяжелой сопутствующей экстрагенитальной патологией.

Иммунологическое исследование клеток периферической крови (ПК) и перитонеальной жидкости (ПЖ) проводилось у всех женщин перед оперативным удалением эндометриоидных очагов. Через 6 месяцев после оперативного вмешательства проведено повторное исследование фенотипа клеток периферической крови у 15 пациенток (4 женщины из группы ЭМ-1 и 11 же...

Короткова Т.Д., Кречетова Л.В., Инвияева Е.В., Вторушина В.В., Ванько Л.В., Адамян Л.В.